高效液相色譜法測定藿香正氣膠囊中橙皮苷含量的分析

谷海玲

高效液相色譜法測定藿香正氣膠囊中橙皮苷含量的分析

谷海玲

目的探討高效液相色譜法測定藿香正氣膠囊中橙皮苷的含量。方法應(yīng)用高效液相色譜方法, 檢測藿香正氣膠囊中橙皮苷含量。結(jié)果橙皮苷在10.0～101 μg/ml范圍具有良好線性關(guān)系, 回歸方程為Y=0.2931, X=0.1642, R=0.9999, 平均回收率為100.62%(RSD=1.2%)。結(jié)論高效液相色譜法測定方法具有較高簡便性、快速性、準(zhǔn)確性, 可以避免干擾, 保持較高重復(fù)性和穩(wěn)定性, 對于藿香正氣膠囊質(zhì)量控制具有重要作用。

橙皮苷；高效液相色譜法；含量

藿香正氣膠囊屬于一種中藥復(fù)方制劑, 主要成分包括廣藿香油、紫蘇葉油、生半夏、陳皮、白術(shù)、茯苓等。傳統(tǒng)方法中, 藿香正氣軟膠囊和藿香正氣水有厚樸酚與和厚樸酚含量測定項。高效液相色譜法對于中藥陳皮橙皮苷含量測定方法具有較高準(zhǔn)確性, 現(xiàn)報告如下。

1 儀器與藥物

高效液相色譜儀、電子天平、紫外分光光度計。橙皮苷對照品、甲醇、醋酸。

2 方法

2.1色譜柱 應(yīng)用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑DiamosilTM(鉆石), 5.0 μm, 200 mm×4.6 mm；流動相應(yīng)用甲醇-0.5%醋酸溶液(30:70), 其流速為1.0 ml/min;檢測波長為284 nm。總理論板數(shù)根據(jù)橙皮苷峰計算≥2000［1］。

2.2對照品溶液制備 準(zhǔn)確稱取橙皮苷對照品適量, 加入甲醇制成每1.0 ml含橙皮苷40 μg溶液, 可以得到對照品溶液。

2.3供試品溶液制備 稱量本品裝量差異項下內(nèi)容物0.35 g,經(jīng)嚴(yán)格稱定, 放置到錐形瓶內(nèi), 準(zhǔn)確加進(jìn)入醇50 ml, 并準(zhǔn)確稱其重量, 經(jīng)超聲處理45 min, 功率保持120 W, 頻率設(shè)定為40 kHz, 將其放置冷卻后, 密閉塞緊, 準(zhǔn)確稱量重量, 且以甲醇將減掉重量補(bǔ)全, 搖晃均勻, 濾過處理后, 收集續(xù)濾液, 則可得到。

2.4陰性對照液制備 制備不含有陳皮樣品, 根據(jù)供試品溶液制備法制備好陰性對照液。

在測定時, 分別準(zhǔn)確取用對照品溶液與供試品溶液及陰性對照液各10 μl, 將其分別注入液相色譜儀內(nèi)進(jìn)行檢測。

2.5專屬性試驗 將不含有陳皮的藿香正氣膠囊陰性樣品,根據(jù)溶液制備方法制備供試品溶液, 并實施有效測定。結(jié)果避免陰性樣品HPLC色譜圖在與橙皮苷對照品同樣保留時間處無色譜峰, 由此可知藿香正氣膠囊內(nèi)其他藥味及輔料等對橙皮苷測定并無干擾性。

2.6線性范圍考察［2］分別準(zhǔn)確量取橙皮苷對照品儲備液(202 μg/ml)實施梯度稀釋, 然后呈現(xiàn)橙皮苷為10、20、25、40、50、100 μg/ml對照品溶液, 依次進(jìn)樣10 μl, 觀察色譜圖,檢測峰面積, 得到進(jìn)樣濃度(μg/ml)與峰面積A依次為10.1、2.8721；20.2、5.7521；25.25、7.2140；40.40、11.5132；50.50、14.8123；101.00、29.4126。由此可知, 進(jìn)樣濃度在10.0～101 μg/ml時, 橙皮苷峰面積與進(jìn)樣濃度具有理想線性關(guān)系。

2.7精密度試驗 應(yīng)用同一種供試品溶液, 相同進(jìn)樣量, 持續(xù)性進(jìn)樣6次, 根據(jù)試驗條件進(jìn)行測定, 橙皮苷峰面積分別為 14.5926、14.6242、14.6412、14.5995、14.6231、14.6721,平均峰面積為14.6254, RSD為0.18%。

2.8穩(wěn)定性試驗 應(yīng)用同一種供試品溶液, 根據(jù)溶液制備方法, 色譜條件分別為0、3、6、9、12、24 h實施測定。橙皮苷峰面積分別為14.3678、14.4941、14.5582、14.6534、14.7215、14.9426, 平均峰面積為14.6229。樣品內(nèi)橙皮苷峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.4%, 在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定性。

2.9重復(fù)性試驗 根據(jù)擬定含量測定方法, 對同一種批號樣品實施平行試驗, 根據(jù)方法進(jìn)行測定。測定6次, 橙皮苷峰面積分別為14.4035、14.2931、14.4881、14.4632、14.5623、14.5275, 平均峰面積為14.4563, RSD為0.67%。

2.10回收率試驗 應(yīng)用加樣回收方法, 并應(yīng)用以上重復(fù)性試驗時所使用的樣品, 取9份, 均為0.15 g, 進(jìn)行嚴(yán)格稱量, 分別放置不同量橙皮苷對照品, 根據(jù)擬定含量測定方法進(jìn)行制備, 并進(jìn)行準(zhǔn)確測量, 計算回收率。9次測量主要為：①取樣量0.1503 g, 測得量2.6341 mg, 加入量1.21 mg, 回收率99.04%；②取樣量0.1502 g, 測得量2.7935 mg, 加入量1.39 mg,回收率99.72%；③取樣量0.1504 g, 測得量2.6338 mg, 加入量1.20 mg, 回收率99.12%；④取樣量0.1501 g, 測得量2.8462 mg,加入量1.39 mg, 回收率101.25%；⑤取樣量0.1507 g, 測得量3.0095 mg, 加入量1.54 mg, 回收率100.68%；⑥取樣量0.1505 g, 測得量3.2654 mg, 加入量1.89 mg, 回收率101.87%；⑦取樣量0.1503 g, 測得量2.6341 mg, 加入量1.21 mg, 回收率99.04%；⑧取樣量0.1505 g, 測得量3.3849 mg, 加入量1.92 mg, 回收率101.69%；⑨取樣量0.1505 g, 測得量3.3855 mg,加入量1.91 mg, 回收率101.98%。平均回收率為100.72%, RSD為1.2%。

2.11樣品測定 按照準(zhǔn)確方法測定6個不同批次樣品, 檢測結(jié)果顯示, 樣品內(nèi)橙皮苷平均含量為9.55 mg/g, RSD為0.24%(n=5)。檢測結(jié)果顯示其重復(fù)性試驗效果良好。

3 討論

應(yīng)用甲醇配制橙皮苷對照品溶液, 紫外分光光度計掃描, 284 nm位置有最大吸收峰, 波長橙皮苷為284 nm［3］。橙皮苷在甲醇內(nèi)無較大溶解度, 因此需以超聲波超聲確保橙皮苷得到溶解。

［1］王建光, 王旭文, 王潞娜.HPLC法測定藿香正氣膠囊中橙皮苷含量.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2013, 8(9):886-888.

［2］黃可婧, 王杰.HPLC法測定藿香正氣軟膠囊中橙皮苷的含量.中國藥品標(biāo)準(zhǔn), 2011, 12(2):117-119.

［3］王麗麗, 張寶華, 寇筱囡, 等.高效液相色譜法測定藿香正氣膠囊中橙皮苷的含量.黑龍江醫(yī)學(xué), 2010, 34(6):43-45.

2014-04-02］

130062 長春, 解放軍第二○八醫(yī)院