Nrf2及其相關(guān)因子在非酒精性脂肪肝炎形成過程中的作用*

蔡月琴，張利棕，王德軍，陳方明，陳芝蕓，朱科燕，李劍霜，嚴(yán)茂祥

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，杭州310053）

非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）是非酒精性脂肪性肝病由單純肝脂肪變向肝硬化甚至肝細(xì)胞肝癌進(jìn)展的關(guān)鍵階段。隨著我國生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的變化，NASH的發(fā)病率有逐漸增加的趨勢(shì)，已經(jīng)成為危害人類健康的常見病。但目前NASH的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。核因子 E2相關(guān)因子 2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）是細(xì)胞重要的防御轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)肝臟有著多方面的影響，如調(diào)節(jié)肝臟的代謝、解毒及促進(jìn)肝細(xì)胞再生，在肝損傷、脂肪肝、肝纖維化及肝癌等方面也具有保護(hù)作用［1-3］。本文通過觀察大鼠NASH形成過程中脂質(zhì)代謝、氧化應(yīng)激水平、肝細(xì)胞脂肪變、Nrf2及相關(guān)關(guān)鍵因子的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的變化，以進(jìn)一步探討NASH的發(fā)病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠40只，體重160～180 g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2007-0005。溫度（20±2）℃，相對(duì)濕度50%～60%，光照12 h明暗交替，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心［SYXK（浙）2008-0115］。

1.2 主要試劑及儀器

膽固醇購自安徽天啟化工科技有限公司，批號(hào)：20120327，三號(hào)膽鹽購自杭州微生物試劑有限公司，批號(hào)：20111103-00，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、甘油三酯 （triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒購自德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司。大鼠一抗Nrf2、血紅素氧合酶1（heme oxyenase 1，HO-1）、依賴還原型輔酶／II醌氧化還原酶1（NADPH quinone oxidoreductase 1，NQO1）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamylcysteine synthethase，γ-GCS）、谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）抗體均購自Abcam公司，內(nèi)參β-actin抗體購自Santa Cruze Biotechnology；Odyssey羊抗兔熒光二抗、羊抗鼠熒光二抗均購自LI-COR公司，RNAiso plus、RT-PCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green熒光定量試劑均購自TaKaRa。全蛋白提取試劑盒、BCA蛋白含量檢測(cè)試劑盒購自杭州昊天生物科技有限公司。熒光定量 PCR儀（BIO-RAD，IQ5），生物安全柜（Thermo），微量核酸測(cè)定儀（Thermo，Nano-drop），定性 PCR儀（BIO-RAD，PTC200），垂直電源系統(tǒng)（BIO-RAD），近紅外激光成像系統(tǒng)（LI-COR），多功能酶標(biāo)儀（Thermo），全自動(dòng)生化分析儀（HITACHI）

1.3 NASH大鼠模型建立與分組

40只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為正常組、模型組，每組各20只，正常組給予標(biāo)準(zhǔn)飼料（粗脂肪含量4.62%）喂養(yǎng)，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料在標(biāo)準(zhǔn)飼料的基礎(chǔ)上加10%豬油、2%膽固醇、0.5%膽酸鈉、5%蛋黃粉。在造模第4周末，兩組實(shí)驗(yàn)大鼠各隨機(jī)處理10只，剩余所有大鼠均在造模第12周末處理。大鼠處理前晚禁食不禁水18 h，用10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈采血，分離血清待用，收集肝臟標(biāo)本，部分在固定液中固定用于病理觀察，其余肝組織存入-80℃待用。

1.4 肝功能、脂質(zhì)代謝指標(biāo)的檢測(cè)

采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)大鼠血清和肝組織中ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。

1.5 肝組織病理學(xué)檢測(cè)

以油紅O染色光鏡檢測(cè)肝組織脂肪沉積；常規(guī)HE染色光鏡觀察肝組織脂肪變程度、炎癥程度和氣球樣變程度，參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組2010年制訂的《非酒精性脂肪性肝病診療指南》［4］，并計(jì)算非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）活動(dòng)度積分（NAFLD activity score，NAS），NAS計(jì)分：肝細(xì)胞脂肪變 ＋小葉內(nèi)炎癥＋肝細(xì)胞氣球樣變，NAS＜3分可排除NASH，NAS＞4分則可診斷NASH，介于兩者之間為NASH可能。免疫組化法檢測(cè)肝組織中Nrf2的表達(dá)情況。

1.6 Nrf2及其相關(guān)因子mRNA表達(dá)的測(cè)定

按Trizol說明書提取大鼠肝組織總RNA，測(cè)定A260／A280的比值及總RNA濃度。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，SYBR Green法進(jìn)行Realtime PCR擴(kuò)增。每個(gè)樣本3個(gè)復(fù)孔。大鼠 Nrf2上游引物：5’-CTGCCATTAGTCAGTCGCTCTC-3’，下游引物：5’-TCAGTGTGCTTCTGGTTGAAAG-3’；HO-1上 游 引 物：5’-TTTCCCCAGTTCTACCAGTG TAA-3’，下游引物：5’-CCTCAAAAGACAGCCCTACTTG-3’；NQO1上游引物：5’-CTCCACCCACTTGTTGCTATTA-3’，下游引物：5’-GTTAGTCCCTCAGCCATTGTTT-3’；γ-GCS上游引物：5’-TGAGCATAGACACCATCATCAA-3’，下游引物：5’-TGTTTTCAAGGTAGGAGT TCAGA-3’；GST上游引物：5’-CCGTCACCCTCTGATTGATTTA-3’，下游引物：5’-TCCTGATTTCTCTGC TCCTTTC-3’；內(nèi)參照 GAPDH上游引物：5’-GGCACAGTCAAGGCTGAGAATG-3’，下游引物：5’-ATGGTG GTGAAGACGCCAGTA-3’。以上熒光定量PCR引物序列均由生工生物工程（上海）有限公司設(shè)計(jì)并合成。目標(biāo)基因與內(nèi)參照基因擴(kuò)增效率接近100%情況下，以內(nèi)參照作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相對(duì)定量，采用 2-△△CT計(jì)算大鼠肝臟組織中 Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1、γ-GCS和GSTmRNA相對(duì)表達(dá)水平。

1.7 Nrf2及其相關(guān)因子蛋白水平的測(cè)定

將大鼠肝組織冰上勻漿，采用全蛋白提取試劑盒提取總蛋白，BCA法進(jìn)行蛋白含量測(cè)定后，蛋白樣品加入5×SDS加樣緩沖液進(jìn)行變性，行SDS-PAGE凝膠分離，采用電泳濕轉(zhuǎn)方法將凝膠上的蛋白條帶轉(zhuǎn)移到醋酸纖維素膜（NC膜）上，電壓為120 V，轉(zhuǎn)膜2 h。將含蛋白的NC膜在PBS溶解的5%脫脂奶粉中室溫封閉 2 h（搖床上放置）后，分別與 Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1、γ-GCS和 GST等一抗 4℃孵育過夜。TBST洗5 min×5次，最后用近紅外染料標(biāo)記的二抗（Li-COR）室溫孵育 1.5 h，用 TBST洗 5 min×5次，將膜在近紅外雙色激光成像系統(tǒng)（Odyssey）上掃描。采集圖像并進(jìn)行半定量分析，以目標(biāo)蛋白／actin的灰度比值表示各個(gè)蛋白表達(dá)水平。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 NASH大鼠肝功能及脂代謝的變化

由表1和表2可見，4周模型組大鼠血清ALT、AST、TC較正常組均顯著增高（P＜0.01），肝組織TC、TG、LDL-C也顯著高于同期正常組（P＜0.01），但血清TG和肝內(nèi)HDL-C含量無明顯變化；12周模型組大鼠血清 ALT、AST、TC持續(xù)增高（P＜0.01，P＜0.05），同時(shí)血清TG較同期正常組顯著增高（P＜0.01），肝組織HDL-C較同期正常組顯著降低（P＜0.05）；且12周模型組大鼠血清 TG和肝組織 TC、LDL-C含量顯著高于4周模型組大鼠（P＜0.01，P＜0.05）。

Tab.1 The levels of ALT，AST，TC，TG in rat serum（，n＝10）

Tab.1 The levels of ALT，AST，TC，TG in rat serum（，n＝10）

Group ALT（U／L） AST（U／L） TC（mmol／L） TG（mmol／L）Control（4 weeks） 25.40±5.36 89.89±14.98 1.23±0.21 0.35±0.09 Model（4 weeks） 54.10±14.49** 151.00±15.73** 3.47±1.25** 0.31±0.08 Control（12 weeks） 40.10±9.09 130.70±18.13 1.36±0.24 0.40±0.14 Model（12 weeks） 60.14±14.96* 168.38±32.12* 3.17±0.60** 0.62±0.13**＃＃

ALT：Alanine aminotransferase；AST：Aspartate aminotransferase；TC：Total cholesterol；TG：Triglyceride*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃＃P＜0.01 vs model（4 weeks）groupTC：Total cholesterol；TG：Triglyceride；HDL-C：High density lipoprotein cholesterol；LDL-C：Low density lipoprotein cholesterol*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model（4 weeks）group

Tab.2 The content of TC，TG，HDL-C，LDL-Cin rat liver（mmol／g，，n＝10）

Tab.2 The content of TC，TG，HDL-C，LDL-Cin rat liver（mmol／g，，n＝10）

Group TC TG HDL-C LDL-C Control（4 weeks） 0.55±0.09 0.86±0.22 0.06±0.02 0.19±0.07 Model（4 weeks） 1.09±0.23** 1.29±0.27** 0.07±0.02 0.29±0.04**Control（12 weeks） 0.71±0.09 0.97±0.14 0.10±0.04 0.29±0.05 Model（12 weeks） 1.43±0.23**＃＃ 1.13±0.20* 0.07±0.01* 0.35±0.06*＃

2.2 NASH大鼠肝組織脂肪沉積的變化

油紅O染色法檢測(cè)NASH大鼠肝組織內(nèi)脂肪沉積變化，由圖1可見，4周和12周正常組大鼠肝細(xì)胞均形態(tài)正常，胞漿未見紅染的脂肪滴，細(xì)胞核呈藍(lán)色，4周和12周模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)沉積大量被染成紅色的脂肪滴，脂質(zhì)含量顯著高于4周和12周正常組大鼠肝細(xì)胞（P＜0.01）；12周模型組大鼠肝細(xì)胞脂質(zhì)含量顯著高于4周模型組大鼠（P＜0.01）。

Fig.1 Oil red Ostaining in NASH rats liver tissue（×400）

2.3 NASH大鼠肝組織病理學(xué)改變

HE染色觀察NASH大鼠肝組織病理學(xué)改變，由圖2、表3可見，4周和12周正常組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，未見肝細(xì)胞脂肪變、炎癥和氣球樣變；4周模型組大鼠，光鏡下可見肝細(xì)胞脂肪變，以大泡性為主，炎癥和氣球樣變少見（P＜0.01），NAS為 3.7，根據(jù)中國非酒精性脂肪性肝病診療指南，判斷為NASH可能；12周模型組大鼠大量肝細(xì)胞脂肪變進(jìn)一步嚴(yán)重，呈彌漫性，伴有炎癥，肝細(xì)胞氣球樣變程度顯著高于正常組和4周模型組（P＜0.01），NAS為 6.5，可診斷為 NASH。

Fig.2 Pathological changes in NASH rats liver（HE×400）

2.4 NASH大鼠肝組織Nrf2表達(dá)情況

免疫組化DAB染色，Nrf2陽性細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色（圖3）。4周和12周正常組大鼠肝細(xì)胞胞漿和細(xì)胞核中較少表達(dá)Nrf2；4周模型組大鼠肝細(xì)胞細(xì)胞核中Nrf2有較多表達(dá)，顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01），12周模型組中的Nrf2在肝細(xì)胞胞漿和細(xì)胞核中強(qiáng)表達(dá)，顯著高于正常組和4周模型組（P＜0.01，表 3）。

Fig.3 The positive expression of Nrf2 in NASH rats liver（immunocytochemistry，DAB×400）

2.5 NASH大鼠肝組織Nrf2及相關(guān)因子mRNA水平的變化

從表4可見，與正常組相比，4周模型組大鼠肝組織中NQO1、γ-GCS、GST的mRNA水平均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），而 Nrf2、HO1的 mRNA水平變化無顯著差異（P＞0.05）；12周模型組大鼠肝組織中Nrf2、HO1、NQO1的mRNA表達(dá)顯著高于正常組（P＜0.01），γ-GCS、GST的mRNA水平均顯著低于正常組（P＜0.01）。

2.6 NASH大鼠肝組織Nrf2及相關(guān)因子蛋白的影響

與正常組相比，4周模型組大鼠肝組織中NQO1、GST蛋白表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），而Nrf2、HO1、γ-GCS蛋白表達(dá)量變化不明顯（P＞0.05，圖 5、6）；12周模型組大鼠肝組織中 HO1、NQO1、γ-GCS、GST蛋白表達(dá)量均有不同程度的升高或降低（P＜0.05），而Nrf2蛋白表達(dá)量變化仍不明顯（P＞0.05，圖 5、6）。

Tab.3 NASof hepatic steatosis，inflammation and hepatocellular ballooning and expression of Nrf2 in NASH rats（，n＝10）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃＃P＜0.01 vs model（4 weeks）group

Group Oil red O staining Positive Nrf2 expression Control（4 weeks） 21299.25±6049.93 0 0 0 137.11±32.51 Model（4 weeks） 158859.22±51149.88** 1.50±0.53** 0.90±0.32**1.30±0.48** 4085.83±727.80**Control（12 weeks） 26232.75±9397.61 0 0 0 372.83±69.40 Model（12 weeks） 537174.17±107513.36**＃＃ 2.90±0.32**＃＃ 1.00±0.00**2.60±0.52**＃＃ 68486.22±9450.01**＃＃Steatosis score Inflammation score Hepatocellular ballooning score

Tab.4 Levels of Nrf2，HO1，NQO1，γ-GCS，GST mRNA in rat liver（，n＝10）

Tab.4 Levels of Nrf2，HO1，NQO1，γ-GCS，GST mRNA in rat liver（，n＝10）

Nrf2：NF-E2-related factor 2；HO1：Heme oxyenase 1；NQO1：NADPH quinone oxidoreductase l；γ-GCS：γ-glutamylcy steine synthethase；GST：Glutathione S-transferase*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model（4 weeks）group

Group Nrf2 HO1 NQO1 γ-GCS GST Control（4 weeks） 1.007±0.124 1.024±0.236 1.014±0.178 1.008±0.137 1.006±0.129 Model（4 weeks） 0.952±0.079 1.116±0.101 0.838±0.073* 0.668±0.045** 0.747±0.054**Control（12 weeks） 1.002±0.071 1.002±0.072 1.002±0.059 1.002±0.071 1.001±0.052 Model（12 weeks） 1.282±0.071**＃＃ 1.687±0.102**＃＃ 2.895±0.422**＃＃ 0.725±0.119** 0.752±0.075**

Fig.4 The Western-blot bands of Nrf2 and related factors in NASH rats

3 討論

NASH的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明，亦缺乏有效的防治手段?！岸未驌簟笔悄壳白顬槌墒斓慕忉屍浒l(fā)病機(jī)制的學(xué)說：第一次打擊為胰島素抵抗對(duì)肝細(xì)胞的損傷，肝臟形成脂肪變性；第二次打擊是促進(jìn)疾病發(fā)展的關(guān)鍵，主要為各種原因所致的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷及其相關(guān)事件，使脂肪變性的肝細(xì)胞發(fā)生炎癥壞死，甚至并發(fā)進(jìn)展性肝纖維化、肝硬化［5，6］。氧化應(yīng)激是 NASH發(fā)生發(fā)展過程中的中心環(huán)節(jié)，抗氧化應(yīng)激在NASH的防治中具有十分重要意義。Nrf2是抗氧化酶表達(dá)過程中的關(guān)鍵調(diào)控因子，對(duì)于穩(wěn)定氧化-抗氧化的平衡，減輕氧化應(yīng)激導(dǎo)致的損害可起到關(guān)鍵性的作用［7，8］。正常情況下Nrf2與其受體結(jié)合，在氧化應(yīng)激等情況下與受體解離被激活并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性，從胞漿轉(zhuǎn)入細(xì)胞核中與抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合，啟動(dòng)抗氧化反應(yīng)元件調(diào)控的多種抗氧化酶類基因、Ⅱ相解毒酶基因的表達(dá)，包括 HO-1、NQO1、γ-GCS、GST等基因［9，10］。

本實(shí)驗(yàn)的生化及病理結(jié)果均表明成功建立了NASH大鼠模型，高脂飲食喂養(yǎng)4周時(shí)，大鼠血清ALT、AST、TC和肝內(nèi) TC、TG、LDL-C含量顯著高于同期正常飲食組大鼠，但血清TG含量和肝內(nèi)HDL-C水平無明顯變化，肝細(xì)胞內(nèi)可見紅染的脂肪滴，脂肪變程度加重，炎癥和氣球樣變少見；高脂飲食喂養(yǎng)12周時(shí)，大鼠血清 ALT、AST、TC和肝組織 TC、TG、LDL-C含量均持續(xù)增高，血清TG水平也較同期正常大鼠明顯增高，肝內(nèi)HDL-C顯著降低，脂肪沉積和脂肪變進(jìn)一步嚴(yán)重，呈彌漫性，伴明顯肝細(xì)胞氣球樣變和炎癥。以上結(jié)果表明采用高脂肪、高膽固醇飲食喂養(yǎng)大鼠，外源性脂肪顯著增加，經(jīng)小腸吸收入血液的乳糜顆粒增多，體內(nèi)脂類合成增加，導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)代謝發(fā)生障礙，肝內(nèi)脂質(zhì)類物質(zhì)合成與分泌的動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)，當(dāng)肝內(nèi)TG蓄積到一定程度，即發(fā)生肝臟組織學(xué)改變，形成脂肪肝；在病因（高脂飲食）持續(xù)存在時(shí)，單純性脂肪肝進(jìn)展為脂肪性肝炎，呈現(xiàn)了NASH病變的漸進(jìn)性發(fā)展過程。

免疫組化檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)，高脂飲食喂養(yǎng)4、12周大鼠肝臟組織Nrf2在細(xì)胞核中表達(dá)強(qiáng)度明顯大于同期正常飲食組大鼠，且12周大鼠肝細(xì)胞核內(nèi)Nrf2表達(dá)顯著強(qiáng)于4周大鼠，NASH大鼠肝組織中Nrf2表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象進(jìn)一步在mRNA水平檢測(cè)中得到證實(shí)，與同期正常組大鼠相比，12周模型組大鼠肝組織中Nrf2 mRNA水平顯著上調(diào)。然而Western blot結(jié)果顯示，總Nrf2蛋白表達(dá)較正常雖有增高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這提示，隨著非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生和發(fā)展，肝細(xì)胞內(nèi)Nrf2總蛋白水平未發(fā)生明顯變化，Nrf2可能通過增加穩(wěn)定性從胞漿轉(zhuǎn)入細(xì)胞核與ARE結(jié)合而激活，從而發(fā)揮對(duì)氧化應(yīng)激所致的炎癥損傷可能起的保護(hù)作用，Nrf2可能是單純性脂肪肝向NASH轉(zhuǎn)化過程中的一種主要風(fēng)險(xiǎn)因素。

HO1的抗氧化功能一方面與其阻止游離血紅素參與氧化反應(yīng)有關(guān)，而另一方面，HO1及其酶解產(chǎn)物膽紅素、CO共同發(fā)揮抗氧化、抗炎、抑制細(xì)胞凋亡和改善組織微循環(huán)等作用，參與肝組織細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激損傷［11］。NQO1是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)處于氧化還原狀態(tài)的黃素酶，對(duì)各種代謝引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有保護(hù)作用，有研究表明，肝臟NQO1含量的增加，與Nrf2蛋白表達(dá)增加呈正相關(guān)。γ-GCS是體內(nèi)還原性谷胱甘肽（GSH）合成的限速酶，增加γ-GCS的含量和活性，可以促進(jìn)GSH的合成，增強(qiáng)組織細(xì)胞抗氧化應(yīng)激的能力，GST是體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化最重要的Ⅱ相代謝酶之一，可抑制微粒體過氧化反應(yīng)及修復(fù)自由基引起的膜磷脂損傷，具有過氧化化物酶的活性［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食喂養(yǎng)4周時(shí)，大鼠HO1的mRNA水平和蛋白表達(dá)均無明顯變化，但是12周NASH大鼠HO1在mRNA水平和蛋白表達(dá)水平上均顯著升高；NQO1 mRNA和蛋白水平在4周時(shí)表達(dá)下調(diào)，然而在12周NASH大鼠中NQO1 mRNA和蛋白均顯著上調(diào)；4周和12周模型組大鼠γ-GCS、GSTmRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著低于同期正常組大鼠。提示高脂飼料引起NASH大鼠肝組織氧化應(yīng)激的損傷，激活了Nrf2-ARE通路，Nrf2被活化，從而啟動(dòng)下游保護(hù)性基因HO-1、NQO1等，發(fā)揮其在組織氧化損傷的病理?xiàng)l件下對(duì)保護(hù)細(xì)胞的作用。而γ-GCS、GST基因的mRNA和蛋白表達(dá)在模型組輕度降低可能與其高峰出現(xiàn)的時(shí)間及抗氧化應(yīng)激過程中的消耗有關(guān)，需要通過時(shí)效關(guān)系的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。結(jié)合前期NASH大鼠血及肝臟MDA含量增加，肝臟SOD活性降低，與氧化應(yīng)激相關(guān)的指標(biāo)如過氧化酶體增殖物激活受體、核轉(zhuǎn)錄因子-κB及IκB均參與了NASH的研究結(jié)果［13，14］，提示隨著炎癥的進(jìn)展，模型組大鼠肝組織細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激能力減弱，進(jìn)一步證實(shí)氧化應(yīng)激確實(shí)參與了NASH的發(fā)生發(fā)展。

Tab.5 Levels of Nrf2，HO1，NQO1，rGCS，GST protein in rat liver（，n＝10）

Tab.5 Levels of Nrf2，HO1，NQO1，rGCS，GST protein in rat liver（，n＝10）

Nrf2：NF-E2-related factor 2；HO1：Heme oxyenase 1；NQO1：NADPH quinone oxidoreductase l；γ-GCS：γ-glutamylcy steine synthethase；GST：Glutathione S-transferase*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model（4 weeks）group

Group Nrf2 HO1 NQO1 rGCS GST Control（4 weeks） 1.000±0.000 1.024±0.236 1.014±0.178 1.008±0.137 1.006±0.129 Model（4 weeks） 0.791±0.027 0.978±0.170 0.692±0.084* 1.165±0.250 0.655±0.160*Control（12 weeks） 1.002±0.071 1.002±0.072 1.002±0.059 1.002±0.071 1.001±0.052 Model（12 weeks） 1.063±0.166 1.285±0.122*＃ 1.550±0.218*＃＃ 0.761±0.099*＃ 0.882±0.059*

本研究結(jié)果表明，Nrf2及相關(guān)因子參與的氧化應(yīng)激可能是NASH發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。

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