補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓大鼠NO、AngⅡ的影響

宋業(yè)琳盧 娜徐偉俊魏陵博于廣宇聶穎穎遲偉峰李 潔

（1天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津，300193；2青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)，青島，266033；3青島阜外心血管病醫(yī)院，青島，266034）

實(shí)驗(yàn)研究

補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓大鼠NO、AngⅡ的影響

宋業(yè)琳1，2盧 娜3徐偉俊1魏陵博1于廣宇1聶穎穎1遲偉峰1李 潔1

（1天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津，300193；2青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)，青島，266033；3青島阜外心血管病醫(yī)院，青島，266034）

目的：探討補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期高血壓（Isolated Systolic Hypertension，ISH）模型大鼠血管重塑的影響。方法：采用法華林和維生素K誘導(dǎo)動(dòng)脈中層鈣化法（WVK）法復(fù)制ISH大鼠模型，分為補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組、補(bǔ)腎活血湯與氨氯地平聯(lián)用組（兩藥聯(lián)用組）、空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，予以相應(yīng)的藥物干預(yù)，8周后檢測(cè)大鼠尾端血壓、血清一氧化氮（Nitrogen Monoxide，NO）、血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）水平。結(jié)果：補(bǔ)腎活血法能夠增加ISH大鼠血清NO水平，降低AngⅡ水平，較模型組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且中西藥聯(lián)用組效果更明顯。結(jié)論：補(bǔ)腎活血法等夠改善ISH大鼠的血管順應(yīng)性。

補(bǔ)腎活血法；單純收縮期高血壓；一氧化氮；血管緊張素Ⅱ；血管順應(yīng)性

ISH是指收縮壓≥140mmHg，舒張壓＜90mmHg，是高血壓的一種特殊類(lèi)型，常見(jiàn)于60歲以上的老年人，其發(fā)生常與血管重塑[1]有關(guān)，如動(dòng)脈中層彈力纖維減少，血管僵硬度增加、彈性下降，血管順應(yīng)性降低等。本研究根據(jù)老年ISH患者“腎虛血瘀”的發(fā)病機(jī)制，探討補(bǔ)腎活血法對(duì)單純收縮期實(shí)驗(yàn)大鼠血管重塑之血管順應(yīng)性的影響。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取健康6～7周齡Wistar-Kyoto大鼠（WKY）50只，SPF級(jí)，♂，體重175～200 g，由青島市藥物檢驗(yàn)研究所提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（魯）20090007。大鼠飼養(yǎng)于青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)動(dòng)物房，金屬鼠籠，分籠飼養(yǎng)，每籠5只，保持室內(nèi)環(huán)境恒溫（19 ±3）℃，濕度在50%～60%，通風(fēng)良好，標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由進(jìn)食飲水。

1.2 藥物 補(bǔ)腎活血湯（BSHXD）藥物組成為生地黃20 g、熟地黃20 g、山茱萸15 g、茯苓15 g、澤瀉30 g、牡丹皮12 g、菟絲子20 g、益母草15 g、當(dāng)歸15 g、鉤藤15 g、淫羊藿6 g，由青島海慈醫(yī)療集團(tuán)藥劑科中藥制劑室制備，濃度為生藥1.647 g／mL，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》；苯磺酸氨氯地平片，每片5 mg，大連輝瑞制藥有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H10950224）；華法林鈉片，每片2.5 mg，山東齊魯制藥有限公司生產(chǎn)（國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H37021314）；維生素K1注射液，每支1 mL：10 mg，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H37021988）。

1.3 試劑 大鼠用血清NO測(cè)定試劑盒，購(gòu)自湖北武漢博士德試劑有限公司；大鼠用血清AngⅡ試劑盒（批號(hào)201007171），購(gòu)自青島市百瑞達(dá)醫(yī)療器械有限公司。

2 方法

2.1 模型制備 WVK法誘導(dǎo)動(dòng)脈中層鈣化法[2]。華法林鈉片研成粉末，蒸餾水配成懸濁液，按照華法林鈉片15 mg／（kg·d）灌胃，1次／d；予以維生素K1注射液，按10 mg／（kg·d）背部皮下注射，每天1次。維生素K1比華法林提前1周用藥，每2周測(cè)量并記錄血壓1次，6周后判定造模結(jié)果。收縮壓升高并持續(xù)大于18.67 kPa（140 mmHg）為造模成功。

2.2 分組及給藥

2.2.1 分組 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為5組。隨機(jī)選取其中的10只做空白對(duì)照組，其余40只進(jìn)行高血壓造模。按隨機(jī)數(shù)字表法分為：補(bǔ)腎活血湯組、氨氯地平組、補(bǔ)腎活血湯與氨氯地平聯(lián)用組（中西藥聯(lián)用組）、模型對(duì)照組，每組10只。

2.2.2 給藥 根據(jù)人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量分別灌胃給藥：補(bǔ)腎活血湯組給予16.47 g／（kg ·d）；氨氯地平組給予0.45 mg／（kg·d）；中西藥聯(lián)用組給予BSHXD 16.47 g／（kg·d）和氨氯地平0.45 mg／（kg·d）；余組給予蒸餾水10 mL／（kg·d）；配制成10 mL／（kg·d），1次／d，給藥8周。

2.3 指標(biāo)檢測(cè) ELISA法檢測(cè)大鼠血清NO、AngⅡ?qū)嶒?yàn)大鼠最后1次給藥后，予以禁食12 h，用10%水合氯醛（0.2 mL／kg）腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口，腹主動(dòng)脈取血約5 mL，3 500 r／min離心10 min，將大鼠血清置于-70℃低溫下冷凍備用；嚴(yán)格按照免疫組化試劑盒說(shuō)明的操作步驟，測(cè)定血清AngⅡ含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有結(jié)果以（±s）表示，數(shù)據(jù)之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠血清NO水平 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組NO濃度較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，各治療組NO濃度均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；兩藥聯(lián)用組較氨氯地平組升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清NO、AngⅡ水平比較（±s）

表1 各組大鼠血清NO、AngⅡ水平比較（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△△P＜0.01；與氨氯地平組比較，▲▲P＜0.01。

組別只數(shù)NO（μmol／L）AngⅡ（pg／m L）10 95.58±26.98 36.01±12.21模型對(duì)照組8 51.26±9.35**289.55±72.23**補(bǔ)腎活血湯組9 164.71±27.85△△140.23±10.71△△氨氯地平組10 98.54±6.23△△147.28±12.97△△兩藥聯(lián)用組9 201.27±27.20**△△▲▲48.35±13.29空白對(duì)照組**△△▲▲

3.2 各組大鼠血清AngⅡ水平 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組AngⅡ升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）；與模型對(duì)照組比較，各治療組AngⅡ均有所降低，其中兩藥聯(lián)用組降低最為明顯，與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

4 討論

ISH的發(fā)生主要與動(dòng)脈僵硬度增加有關(guān)[3]。隨著年齡的增長(zhǎng)，老年人大動(dòng)脈的結(jié)構(gòu)也發(fā)生了變化[4-5]：如動(dòng)脈中層彈力纖維減少，血管僵硬度增加、彈性下降[6]，血管順應(yīng)性降低[7]等。老年ISH時(shí)腎素-血管緊張素系統(tǒng)等神經(jīng)體液因子的激活促進(jìn)了動(dòng)脈僵硬程度的增加[8]和血管收縮功能紊亂。這與中醫(yī)病機(jī)“腎虛血瘀”相輔相成。老年單純收縮期高血壓患者天癸衰竭[9-10]，虛則氣血運(yùn)行不暢，血留而不行致瘀，因此腎虛是形成血瘀的重要因素。腎虛和血瘀相互影響，腎虛為本，血瘀為標(biāo)，由虛致瘀，血瘀是腎虛的必然結(jié)果，而血瘀的存在又加重了腎虛。因此，腎虛血瘀是老年人單純收縮期高血壓病的根本病機(jī)。

NO是調(diào)節(jié)血管順應(yīng)性的重要因子，通過(guò)對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的調(diào)控作用調(diào)節(jié)機(jī)體器官的血流量，使其保持相對(duì)穩(wěn)定，使血管自身調(diào)節(jié)作用得到發(fā)揮，可以調(diào)節(jié)機(jī)體的血壓水平，NO缺乏時(shí)，這種調(diào)節(jié)作用減弱甚至缺失，導(dǎo)致血管順應(yīng)性下降，在某種程度上導(dǎo)致了高血壓病的發(fā)病[11]。血清中的NO可以阻滯細(xì)胞生長(zhǎng)[12]，高血壓血管重塑是刺激因子和抑制因子間比例失衡的結(jié)果。在一般情況下，血管持續(xù)受到血流的沖擊，由于某些原因?qū)е卵獕和蝗坏纳邥r(shí)，NO發(fā)揮其有效的調(diào)節(jié)血管作用[13]，保持機(jī)體各器官，尤其是心、腦、腎等重要臟器的血流量的相對(duì)穩(wěn)定性，發(fā)揮血管自身調(diào)節(jié)血流量的作用，這不僅能夠有效降低體循環(huán)血壓水平[14]，還能改善局部血流分布，調(diào)節(jié)微循環(huán)的血流量，起到有效調(diào)節(jié)血壓的作用。AngⅡ是潛在的促生長(zhǎng)因子，分泌過(guò)多[15]，會(huì)導(dǎo)致血管平滑肌緊張度增高，血管強(qiáng)烈收縮，長(zhǎng)期的刺激，血管壁的平滑肌細(xì)胞發(fā)生代償性的增生，細(xì)胞肥大，其在高血壓血管重塑[16-17]中發(fā)揮重要作用[18]。

本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)腎活血湯能夠提高血液中NO含量，從而起到調(diào)節(jié)血壓，降低血管重塑的作用；且作用優(yōu)于氨氯地平組藥物，可能與方劑中含有的類(lèi)內(nèi)源NO物質(zhì)有關(guān)[19]。補(bǔ)腎活血湯能夠有效降低AngⅡ的水平，發(fā)揮其降壓作用，由此推測(cè)，其降壓作用可能與改善腎素-血管緊張素系統(tǒng)有關(guān)，同時(shí)能夠減少血管重構(gòu)，中西藥物聯(lián)用作用更強(qiáng)。綜上所述，補(bǔ)腎活血法能夠通過(guò)提高NO水平，減低AngⅡ的水平從而達(dá)到調(diào)節(jié)血管順應(yīng)性、改善血壓的作用。

[1]Baumbach GL，Heistad DD.Remodeling of cerebral arterioles in chronic hypertension[J].Hypertension，1989，13：968-972.

[2]Essalihi R，Dao HH，Yamaguchi N，et a1.A new model of isolated systolic hypertension induced by chronic warfarin and vitamin K1 treatment[J]. Am J Hypertens，2003，16（2）：l03-110.

[3]何杰，陳明.老年單純收縮期高血壓研究進(jìn)展[J].心血管病學(xué)進(jìn)展，2011，32（4）：558-561.

[4]馬民.老年男性高血壓病與中醫(yī)腎虛血瘀證相關(guān)性研究[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2004，24（6）：511-512.

[5]張?zhí)N慧，薛金貴，李文彪.中老年高血壓病與腎虛血瘀證相關(guān)性研究[J].山東中醫(yī)雜志，1999，18（6）：26-27.

[6]KriegerJE，DzauVJ，MoleeularbiologyofhyPertenslon[J].11yPertension，1991，18（3）：13-17.

[7]Safar ME.Pulse pressure，arterial stiffness and wave reflections（augmentation index）as cardiovascular risk factors in hypertension[J].Ther Adv CardiovascDis，2008，2（1）：13-24.

[8]Wallace SM，Yasmin，Mceniery cm，et al.Isolated systolic hypertension is characterized by increased aortic stiffness and endothelial dysfunction[J]. Hypertension，2007，50：228-233.

[9]徐強(qiáng)，張秋月，王保和.高血壓中醫(yī)證候特點(diǎn)的現(xiàn)代文獻(xiàn)研究[J].世界中醫(yī)藥，2013，8（2）：125-126.

[10]谷萬(wàn)里，史載祥，余云旭，等.原發(fā)性高血壓的，中醫(yī)證型特征[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2010，9（8）：842-847.

[11]李法琦，陳運(yùn)貞.燈盞花素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌細(xì)胞凋亡和心室重構(gòu)的影響[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，27（4）：400.

[12]Hu WY，F(xiàn)ukuda N，Kanmatsuse K.Growth characteristics，angiotensin II -generation，and microarray-determined gene expression in vascular smooth muscle cells from young spontaneously hypertensive rats[J].Hypertens，2002，20：1323-1333.

[13]冉旭，陳立，呂波.補(bǔ)腎益心湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血管內(nèi)皮功能損傷的干預(yù)作用[J].世界中醫(yī)藥，2013，8（8）：939-941.

[14]柳鋒，鄭智，鐘強(qiáng).丹參酮IIA對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚心肌細(xì)胞凋亡的影響[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2004，17（4）：1097.

[15]Dzau VJ.The odorecooper lecture：tissue angiotensin and pathobiology of vascular disease：a unifying hypothesis[J].Hypertension，2001，37（4）：1047-1052.

[16]Trepls T，Zeiher AM，F(xiàn)ichtlscherer S.The endothelium and inflammation[J].Endothelium，2006，13（6）：423-429.

[17]李承德，康白，毛淑梅，等.地龍降壓蛋白對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血管緊張素及內(nèi)皮素含量的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，5（21）：11-13.

[18]徐浩，陳可冀.中西醫(yī)結(jié)合防治高血壓病的進(jìn)展、難點(diǎn)與對(duì)策[J].世界中醫(yī)藥，2007，2（1）：3-5.

[19]Der Sarkissian S，Huentelman MJ，Stewart J，et al.ACE2：Anovel therapeutic target for cardiovascular diseases[J].Prog Biophys Mol Biol，2006，91：163-198.

（2013-06-19收稿 責(zé)任編輯：徐暉）

Effect of Bushen Huoxue Method on Expression of NO and AngⅡin Isolated Systolic Hypertension Rats

Song Yelin1，2，Lu Na3，Xu Weijun1，Wei Lingbo1，Yu Guangyu1，Nie Yingying1，Chi Weifeng1，Li Jie1
（1 Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China；2 Qingdao Hiser Medical Group，Qingdao 266033，China；2 Qingdao Fuwai Hospital，Qingdao 266033，China）

Objective：To explore effect of the Bushen Huoxue method on vascular remodeling of isolated systolic hypertension（ISH）rats.Methods：ISH rats model was established by WVK method，divided into Bushen Huoxue decoction group，amlodipine group，Bushen Huoxue decoction-amlodipine combination group，blank control group，and model control group，gave corresponding drug intervention，measured rat’s tail blood pressure，serum NO level，AngⅡlevel after 8-week treatment.Results：Bushen Huoxue decoction can significantly increase serum NO level and reduce the AngⅡlevel in ISH rats compared with model group（P＜0.05）.The Chinese and western medicine combination group was more effective.Conclusion：Bushen Huoxuemethod can improve vascular compliance in rats of isolated systolic hypertension.

Bushen Huoxue method；Isolated systolic hypertension；Nitric oxide；AngiotensinⅡ；Vascular compliance

R243；R259；R289.5

A

10.3969／j.issn.1673-7202.2014.02.024

2010年度青島市公共領(lǐng)域科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：10-3-3-5-3-nsh）