中國(guó)荷斯坦牛乳腺不同發(fā)育時(shí)期乳腺細(xì)胞內(nèi)大分子成分變化研究

甄貞，曲波*，姜毓君，李慶章

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物功能基因重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150030；3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱 150030）

中國(guó)荷斯坦牛乳腺不同發(fā)育時(shí)期乳腺細(xì)胞內(nèi)大分子成分變化研究

甄貞1,2，曲波1,2*，姜毓君3，李慶章1,2

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物功能基因重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150030；3.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱 150030）

文章采用PAS法、油紅O染色法、茚三酮-Schiff法等經(jīng)典組織化學(xué)方法，結(jié)合生物顯微圖像分析，對(duì)中國(guó)荷斯坦牛乳腺不同發(fā)育時(shí)期乳腺內(nèi)大分子成分變化進(jìn)行研究。結(jié)果表明，中國(guó)荷斯坦牛乳腺發(fā)育過程中，青春期、妊娠初中期和退化期乳腺中的糖類以糖蛋白和蛋白聚糖為主；妊娠晚期和泌乳期以乳糖為主。乳腺中的蛋白質(zhì)以糖蛋白和蛋白聚糖為主；妊娠中晚期和泌乳期以乳蛋白為主。乳腺中的脂類主要為富含三酰甘油的脂肪組織，在不同發(fā)育時(shí)期呈現(xiàn)不同的生理狀態(tài)。

中國(guó)荷斯坦牛；乳腺；發(fā)育；大分子成分

乳腺發(fā)育過程涉及許多種細(xì)胞的參與及協(xié)同作用[1]。乳腺細(xì)胞內(nèi)大分子成分主要有糖類、脂類和蛋白質(zhì)等三大類，也是乳汁主要組成成分。乳汁是乳腺生理活動(dòng)的產(chǎn)物，乳汁中含有初生幼仔生長(zhǎng)發(fā)育所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。乳汁成分復(fù)雜，都含有水、蛋白質(zhì)、脂肪、糖、無機(jī)鹽等。季節(jié)、年齡、胎次、泌乳期、個(gè)體特性等，都能影響乳汁成分。

乳中的蛋白質(zhì)主要包括3類，即酪蛋白、乳清蛋白和微量蛋白[2]。它們除能供給機(jī)體營(yíng)養(yǎng)，還具有保護(hù)、物質(zhì)運(yùn)輸、控制代謝、輸送氧氣、防御病菌的侵襲、傳遞遺傳信息等功能。乳中脂類主要是三酰甘油，約占乳脂的98%[3]。乳中無機(jī)鹽有主要包括鈉、鉀、鈣、鎂的氯化物，磷酸鹽、鐵等。這些物質(zhì)在乳中的含量有很大差異，在體內(nèi)都各自具有特殊的生理功能，缺乏時(shí)常引起特殊疾病[4]。

本研究采用經(jīng)典組織化學(xué)方法結(jié)合生物顯微圖像分析軟件，系統(tǒng)地對(duì)不同發(fā)育時(shí)期中國(guó)荷斯坦牛乳腺中大分子成分變化進(jìn)行分析，可有效提高乳產(chǎn)量和質(zhì)量。為進(jìn)一步研究中國(guó)荷斯坦牛的泌乳機(jī)制及其泌乳機(jī)能分化規(guī)律和選育優(yōu)良性狀提供形態(tài)學(xué)資料與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)動(dòng)物來自于黑龍江省（國(guó)家級(jí)）畜牧業(yè)科技園區(qū)。選取健康雌性中國(guó)荷斯坦牛30頭。檢測(cè)無乳腺炎及其他疾病。采樣時(shí)點(diǎn)為：青春期360、420 d；妊娠期60、180、260 d；泌乳期7、60、280 d；退化期3、30 d，共計(jì)10個(gè)時(shí)點(diǎn)。每個(gè)采樣時(shí)點(diǎn)選取3只奶牛作平行，每次試驗(yàn)至少重復(fù)3次。奶牛處死后，用滅菌手術(shù)刀分離乳腺組織，立即置于10%甲醛水溶液固定備用。

1.1.2 樣品采集與制備

乳腺組織采集后，迅速轉(zhuǎn)入凍存管中，液氮凍存后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱備用。將固定好的各時(shí)期組織塊修整標(biāo)號(hào)后，用流水沖洗后，乙醇梯度脫水，丙酮、二甲苯透明；56℃蠟箱浸蠟，石蠟包埋，修塊；切片（4～5 μm）、展片、粘片、烘干后備用。

1.2 方法

1.2.1 過碘酸-Schiff反應(yīng)（PAS）顯示乳腺中糖類的變化

將標(biāo)記好的乳腺組織冰凍切片用過碘酸水溶液處理；染色、漂洗、復(fù)染、梯度脫水、封片。顯微鏡觀察、照像。對(duì)照片不經(jīng)過碘酸處理，直接進(jìn)入染色流程，則反應(yīng)呈陰性或明顯減弱。

1.2.2 油紅O染色法顯示乳腺中脂類的變化

取標(biāo)記好的乳腺組織冰凍切片固定、漂洗、油紅O染液浸染、復(fù)染、封片。顯微鏡觀察、照像。

1.2.3 茚三酮-Schiff反應(yīng)顯示乳腺中蛋白質(zhì)的變化

將標(biāo)記好的乳腺組織冰凍切片固定、置入0.5%茚三酮液中處理、切片取出后流水沖洗、染色、漂洗、沖洗、復(fù)染、1%鹽酸酒精分化流水沖洗、梯度脫水、封片。顯微鏡觀察、照像。對(duì)照片不經(jīng)茚三酮液處理，直接進(jìn)入Schiff試劑染色流程，則反應(yīng)呈陰性或明顯減弱。

1.2.4 圖像采集、處理與分析

本研究應(yīng)用Leica DLMB-2顯微鏡觀察、照像，每個(gè)重復(fù)3次，每張切片選取5個(gè)視野觀察，最后用Image-pro plus 6.0軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行處理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 過碘酸-Schiff反應(yīng)（PAS）顯示乳腺中糖類的變化

青春期中國(guó)荷斯坦牛乳腺內(nèi)分布許多導(dǎo)管，紫色信號(hào)大都分布在導(dǎo)管周圍的結(jié)締組織中，此時(shí)乳腺內(nèi)糖類主要為糖蛋白和蛋白聚糖（見圖1a，圖1b）。妊娠60日，PAS陽性信號(hào)大多出現(xiàn)在腺泡間的結(jié)締組織中，但腺泡和小葉間結(jié)締組織明顯變?。ㄒ妶D1c）。妊娠180日，PAS陽性仍主要出現(xiàn)在結(jié)締組織中，腺泡腔內(nèi)陽性信號(hào)很難判斷（見圖1d）。妊娠260日，整個(gè)腺泡腔因?yàn)榉置谖锏脑黾佣蛎涀兇?，腺泡腔部分?nèi)容物呈現(xiàn)紫色的PAS陽性反應(yīng)。小葉間結(jié)締組織中陽性信號(hào)明顯，但面積逐步減少（見圖1e，圖1f）。泌乳期乳腺的發(fā)育分化完全，腺泡上皮細(xì)胞分泌特征明顯，腺體的大部分都是充盈飽滿的腺泡腔（見圖1g，圖1h）。腺泡腔中內(nèi)容物的PAS陽性信號(hào)非常強(qiáng)（見圖1i，圖1j）。乳腺進(jìn)入退化期，腺泡上皮細(xì)胞逐漸凋亡，其泌乳活動(dòng)也逐步停止。退化3日，逐漸萎縮的腺泡腔內(nèi)還可見明顯減弱的PAS陽性信號(hào)，結(jié)締組織中陽性信號(hào)逐步增強(qiáng)（見圖1k）。退化30日，只有小部分殘留的腺泡腔內(nèi)還可見較弱的PAS陽性信號(hào)，腺泡腔內(nèi)主要為大的脂肪顆粒，結(jié)締組織中陽性信號(hào)進(jìn)一步增強(qiáng)擴(kuò)大，PAS陽性信號(hào)大多分布在乳腺間質(zhì)中（見圖1l）。

圖1 中國(guó)荷斯坦牛乳腺組織中糖類的變化Fig.1 Changes of carbohydrates in pubertal mammary gland of Chinese Holstein dairy cow

2.2 油紅O染色法顯示乳腺中脂類的變化

青春期乳腺，乳導(dǎo)管開始生長(zhǎng)逐漸延伸變厚且分支增多，外面包圍著很厚的小葉間結(jié)締組織，逐漸侵入脂肪組織。橙色著染的空泡狀的大脂肪細(xì)胞是青春期乳腺的主體結(jié)構(gòu)（見圖2a，圖2b）。妊娠期乳腺最顯著的變化就是腺泡腔逐漸出現(xiàn)，小葉內(nèi)腺泡數(shù)量逐漸增多，大脂肪細(xì)胞逐漸消失。妊娠180 d時(shí)大脂肪細(xì)胞完全消失（見圖2c，圖2d）。到妊娠260 d時(shí)腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，并有少量脂滴分泌至腺泡腔內(nèi)（見圖2e，圖2f）。泌乳期乳腺發(fā)育分化完全，大量的脂滴從腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)泌至腺泡腔，使腺泡腔變得充盈飽滿（見圖2g，圖2h，圖2i，圖2j）。乳腺進(jìn)入退化期時(shí)脂肪組織發(fā)生劇烈的變化。退化3 d時(shí)只有腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)有脂滴，腺泡腔里則沒有（見圖2k）。退化30 d，腺泡的大小和輪廓出現(xiàn)劇烈變化，形狀變得不規(guī)則，小葉間結(jié)締組織密度增加，脂滴相互融合形成大的空泡狀脂肪細(xì)胞。脂肪細(xì)胞重新分化，并與結(jié)締組織一起圍繞著重組后明顯減少和縮小的腺泡結(jié)構(gòu)（見圖2l）。完全退化的乳腺主要由脂肪細(xì)胞組成，腺體重新呈現(xiàn)成熟未妊娠狀態(tài)。

圖2 中國(guó)荷斯坦牛乳腺組織中脂類的變化Fig.2 Changes of lipids in pubertal mammary gland of Chinese Holstein dairy cow

2.3 茚三酮-Schiff反應(yīng)顯示乳腺中蛋白質(zhì)的變化

青春期乳腺大部分都是以脂肪和結(jié)締組織，乳腺實(shí)質(zhì)部分較少。光鏡下可見紫紅色的陽性信號(hào)大都分布在導(dǎo)管周圍的結(jié)締組織中（見圖3a，圖3b）。妊娠期乳腺加速生長(zhǎng)分化，腺泡上皮細(xì)胞快速增殖。腺泡結(jié)構(gòu)日趨成熟，腺泡腔出現(xiàn)并逐漸變大，但在妊娠60 d，紫紅色的陽性信號(hào)大都分布在腺泡芽周圍的結(jié)締組織中（見圖3c）。妊娠180 d，陽性信號(hào)仍大都份出現(xiàn)在小葉間結(jié)締組織中，腺泡腔逐漸擴(kuò)大，腔內(nèi)可見微弱陽性信號(hào)（見圖3d），直到妊娠260 d，腺體內(nèi)出現(xiàn)成熟獨(dú)立的腺泡。腺腔內(nèi)可見強(qiáng)烈的紫紅色陽性信號(hào)，腺泡腔逐漸膨脹飽滿（見圖3e，圖3f）。泌乳期乳腺內(nèi)布滿分化完全的成熟腺泡結(jié)構(gòu)，腺體的大部分是充盈的腺泡腔，腺泡腔內(nèi)呈現(xiàn)紫紅色陽性信號(hào)，腺泡上皮細(xì)胞分泌活動(dòng)旺盛（見圖3g，圖3h，圖3i，圖3j）。

乳腺進(jìn)入退化期后，腺泡上皮細(xì)胞開始凋亡，泌乳活動(dòng)也逐步停止。退化3 d結(jié)締組織中陽性信號(hào)逐漸增強(qiáng)，縮小變形的腺泡腔內(nèi)有減弱的陽性信號(hào)（見圖3k）。退化30 d，脂肪組織和結(jié)締組織等間質(zhì)大量增生，結(jié)締組織中陽性信號(hào)進(jìn)一步增強(qiáng)擴(kuò)大，只有部分殘留的腺泡腔內(nèi)還可見較弱陽性信號(hào)，腺泡腔內(nèi)主要為大的空泡狀脂肪顆粒。腺泡結(jié)構(gòu)已基本消失，陽性信號(hào)大多分布在乳腺間質(zhì)中（見圖3l）。

圖3 中國(guó)荷斯坦牛乳腺組織中蛋白質(zhì)的變化Fig.3 Changes of proteins in pubertal mammary gland of Chinese Holstein dairy cow

3 討論

3.1 乳腺中糖類的變化規(guī)律

乳腺中的糖類主要包括乳糖和糖復(fù)合物。乳糖是乳中糖類的主要組成成分，乳糖是牛奶中最為豐富的糖類，不同動(dòng)物乳中的乳糖含量不同，牛乳中糖類有99.8%是乳糖[5]。顯示糖類最常用的組織化學(xué)方法是過碘酸-Schiff反應(yīng)（PAS）。過碘酸-Schiff反應(yīng)（PAS）的反應(yīng)基礎(chǔ)是利用過碘酸的氧化作用，過碘酸把糖類相鄰兩個(gè)碳上的羥基氧化成醛基，醛基再與Schiff試劑中的堿性品紅形成紫色化合物，達(dá)到染色目的。PAS反應(yīng)同樣對(duì)含有CHOH-CO、CHOH-COOH、CHOH-CHNH2的糖蛋白、蛋白聚糖等大分子具有氧化作用，釋放醛基。過碘酸和Schiff試劑濃度、作用時(shí)間、pH、溫度等對(duì)PAS結(jié)果的強(qiáng)度都會(huì)產(chǎn)生影響[6]。青春期乳腺導(dǎo)管系統(tǒng)雖已形成，但乳腺基本不發(fā)育。本研究中乳腺內(nèi)分布著許多導(dǎo)管，紫色的PAS陽性信號(hào)大都分布在導(dǎo)管周圍，此時(shí)乳腺內(nèi)糖類主要為糖蛋白和蛋白聚糖等糖復(fù)合物，說明乳腺間質(zhì)大量增生，腺體內(nèi)主要以脂肪和結(jié)締組織為主。妊娠期初期乳腺內(nèi)腺泡腔開始出現(xiàn)，PAS陽性信號(hào)大多出現(xiàn)在腺泡間的結(jié)締組織中，表明此時(shí)乳腺內(nèi)糖類仍主要為糖復(fù)合物。但腺泡和小葉間結(jié)締組織明顯變薄，說明此時(shí)期腺泡芽大量增生，乳腺間質(zhì)逐步減少。妊娠中期腺泡逐漸發(fā)育，腺泡腔逐漸擴(kuò)大，PAS陽性信號(hào)顯示的仍主要為結(jié)締組織中的糖蛋白和蛋白聚糖。盡管有報(bào)道顯示合成乳糖所需酶在妊娠中期已出現(xiàn)[7]，但本研究中很難判斷此時(shí)有乳糖的表達(dá)，即便有分泌也是微量。而到妊娠260 d腺泡分泌特性明顯，腺泡腔部分內(nèi)容物呈現(xiàn)紫色的PAS陽性反應(yīng)，表明此時(shí)期乳腺內(nèi)糖類主要為腺泡腔內(nèi)的乳糖。糖蛋白和蛋白聚糖成分陽性信號(hào)明顯，但面積逐步減少。泌乳期乳腺腺泡腔內(nèi)有大量乳糖顆粒堆積，腺泡腔內(nèi)容物的PAS陽性信號(hào)要強(qiáng)于妊娠晚期，表明乳糖的分泌表達(dá)逐漸達(dá)到頂峰。乳腺進(jìn)入退化期后，腺泡上皮細(xì)胞的泌乳活動(dòng)也逐步停止。退化3 d乳腺內(nèi)腺泡腔內(nèi)容物的PAS陽性信號(hào)強(qiáng)度逐漸降低，表明乳糖分泌隨泌乳活動(dòng)逐步停止。同時(shí)結(jié)締組織中糖蛋白和蛋白聚糖成分陽性信號(hào)逐步增強(qiáng)，表明乳腺間質(zhì)逐漸增生。退化30 d腺體內(nèi)腺泡結(jié)構(gòu)基本消失，PAS陽性信號(hào)大多分布在增生乳腺間質(zhì)中，此時(shí)乳腺內(nèi)糖類與青春期基本一致，主要為糖復(fù)合物。

3.2 乳腺中脂類的變化

乳腺中脂類可分為貯存脂（Storage lipid）和結(jié)構(gòu)脂（Structural lipid）。乳腺中貯存脂為三酰甘油，是乳脂主要組成，主要貯存在脂肪細(xì)胞內(nèi)。乳腺中的結(jié)構(gòu)脂包括糖脂、磷脂、固醇，是構(gòu)成各種生物膜的脂雙層骨架[8]。在乳腺發(fā)育過程中腺泡上皮組織和脂肪組織變化最大[9]。油紅O為脂溶性染料，在脂肪內(nèi)能高度溶解，可特異性的使組織內(nèi)甘油三酯等中性脂肪著色[6]。本研究采用油紅O染色和細(xì)胞核復(fù)染定位法檢測(cè)中國(guó)荷斯坦牛乳腺組織，在細(xì)胞水平觀察乳腺發(fā)育中脂類的產(chǎn)生和表達(dá)變化情況。

本研究中青春期中國(guó)荷斯坦牛乳腺絕大部分為脂肪組織，富含三酰甘油的空泡狀大脂肪細(xì)胞被油紅O染成橙色。乳腺進(jìn)入妊娠期后，隨著腺泡的逐步發(fā)育分化，大脂肪細(xì)胞逐漸消失，妊娠60 d中國(guó)荷斯坦牛乳腺只有很少量的大脂肪細(xì)胞。妊娠180 d時(shí)大脂肪細(xì)胞完全消失，腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，并有少量脂滴分泌至腺泡腔內(nèi)。泌乳期乳腺發(fā)育分化完全，大量脂滴從腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)分泌至腺泡腔形成乳脂，使腺泡腔便道充盈飽滿。有研究顯示此時(shí)約30%腺體仍分布有脂肪細(xì)胞，且一部分為多泡脂肪細(xì)胞，可能歸因于腺泡上皮細(xì)胞利用脂肪而引起的脂肪動(dòng)員[10-11]。乳腺進(jìn)入退化階段，脂肪組織發(fā)生劇烈變化。退化3 d乳腺內(nèi)只有腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)存有脂滴，腺泡腔沒有。此后腺體內(nèi)脂滴開始相互融合形成大的空泡狀脂肪細(xì)胞。退化30 d脂肪細(xì)胞重新分化，完全退化的乳腺內(nèi)主要由大的空泡狀脂肪細(xì)胞組成，腺體重新呈現(xiàn)性成熟未妊娠狀態(tài)。

研究表明，作為乳腺形態(tài)形成的最后一個(gè)階段，腺泡發(fā)育過程與乳腺泌乳機(jī)能的分化過程相互交叉密不可分[12-13]。小鼠乳腺泌乳機(jī)能的分化可分為兩個(gè)階段[14]，第一階段在妊娠中期開始，各種乳蛋白基因持續(xù)表達(dá)，合成增加，如乳清蛋白、β-酪蛋白等，這階段在形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴[15]；第二階段在分娩前后，各種乳蛋白基因繼續(xù)高表達(dá)而在形態(tài)學(xué)上的表現(xiàn)為腺泡上皮細(xì)胞間連接更加緊密，腺泡上皮細(xì)胞內(nèi)的脂滴和酪蛋白分泌至腺泡腔內(nèi)[16-17]。本研究結(jié)果顯示中國(guó)荷斯坦牛乳腺泌乳機(jī)能分化的第一階段始于妊娠晚期，第二階段發(fā)生在分娩后泌乳開始。這一結(jié)果與關(guān)中奶山羊乳腺發(fā)育與泌乳機(jī)能分化過程相似[18]，這也從形態(tài)學(xué)上證明，反芻類動(dòng)物乳腺泌乳機(jī)能的分化與嚙齒類動(dòng)物存在一定的差異。

3.3 乳腺中蛋白質(zhì)的變化

本研究中青春期和妊娠期初期中國(guó)荷斯坦牛乳腺內(nèi)，紫紅色的陽性信號(hào)大都分布在導(dǎo)管和腺泡芽周圍的結(jié)締組織中，此時(shí)乳腺內(nèi)蛋白質(zhì)主要為糖蛋白和蛋白聚糖，這也表明此時(shí)期腺體內(nèi)以乳腺間質(zhì)為主，乳腺上皮細(xì)胞較少。妊娠中期，腺泡腔逐步擴(kuò)大，陽性信號(hào)仍大都份顯現(xiàn)于小葉間結(jié)締組織中，但腺泡腔內(nèi)可見微弱陽性信號(hào)，表明此時(shí)期乳腺內(nèi)蛋白質(zhì)主要仍為糖蛋白和蛋白聚糖，同時(shí)有少量乳蛋白分泌表達(dá)。而在妊娠晚期，整個(gè)腺泡腔內(nèi)均呈現(xiàn)紫紅色的陽性信號(hào)，說明此時(shí)期隨著腺泡分泌活動(dòng)的增強(qiáng)，乳腺內(nèi)蛋白質(zhì)逐漸以乳蛋白為主。這種現(xiàn)象貫穿整個(gè)泌乳期。退化3 d腺泡腔內(nèi)陽性信號(hào)強(qiáng)度逐漸降低，同時(shí)間質(zhì)中陽性信號(hào)逐步增強(qiáng)，表明乳蛋白的分泌逐步減弱，乳腺間質(zhì)逐漸增生。退化30 d腺體內(nèi)陽性信號(hào)大多分布在增生的乳腺間質(zhì)中，此時(shí)乳腺內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)基本恢復(fù)到妊娠前狀態(tài)，主要為糖蛋白和蛋白聚糖。

4 結(jié)論

a.中國(guó)荷斯坦牛乳腺發(fā)育過程中青春期乳腺主要為富含三酰甘油的脂肪組織，妊娠期和泌乳期，大脂肪細(xì)胞逐漸消失，大量脂滴逐漸出現(xiàn)。退化期腺體內(nèi)脂滴開始相互融合成大的空泡狀脂肪細(xì)胞，重新呈現(xiàn)成熟未妊娠狀態(tài)。

b.中國(guó)荷斯坦牛乳腺發(fā)育過程中，青春期、妊娠初中期和退化期乳腺中的糖類以糖蛋白和蛋白聚糖為主，妊娠晚期和泌乳期以乳糖為主。

c.中國(guó)荷斯坦牛乳腺發(fā)育過程中乳腺中的蛋白質(zhì)以糖蛋白和蛋白聚糖為主；妊娠中晚期和泌乳期以乳蛋白為主。

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Study on changes of macromolecular components during different developmental stages of Chinese Holstein mammary gland

ZHEN Zhen1,2,QU Bo1,2,JIANG Yunjun3,LI Qingzhang1,2
(1.School of Life Sciences,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;2.Agricultural Biological functional Gene Laboratory,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;3.School of Food Sciences,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

In this research,the study on the changes of macromolecular components in different periods of Chinese Holstein dairy cow mammary gland using classic histochemical methods,including PAS,oil red dyeing,ninhydrin-schiff dyeing,combined with biological microscopic image analysis.The results indicated that glucoproteins and proteoglycans were the major carbohydrate in puberty,early and midpregnancy and involution.Lactose was the most in late pregnancy and lactation.The main proteins were glucoproteins and proteoglycans in puberty,early pregnant and involuting mammary gland.Milk proteins were major in mid-and late pregnant and lactating mammary gland.The lipids of mammary gland was the triglyceride fatty tissue,which showed diverse state during different developmental stages.

Chinese Holstein dairy cow;mammary gland;development;macromolecule component

Q492.7

A

1005-9369（2014）04-0071-07

2013-07-05

國(guó)家自然科學(xué)基金（31100959）

甄貞（1982-），女，實(shí)驗(yàn)師，碩士，研究方向?yàn)槿橄侔l(fā)育與泌乳生物學(xué)。E-mail:nneehhzz@126.com。

*通訊作者：曲波，副研究員，研究方向?yàn)槿橄侔l(fā)育與泌乳生物學(xué)。E-mail:qb5172@163.com。

時(shí)間2014-4-21 13:26:52[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20140421.1327.044.html

甄貞,曲波,姜毓君,等.中國(guó)荷斯坦牛乳腺不同發(fā)育時(shí)期乳腺細(xì)胞內(nèi)大分子成分變化研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2014,45(4)∶71-77.

Zhen Zhen,Qu Bo,Jiang Yunjun,et al.Study on changes of macromolecular components during different developmental stages of Chinese Holstein mammary gland[J].Journal of Northeast Agricultural University,2014,45(4)∶71-77.(in Chinese with English abstract)