應(yīng)用HPLC 法測定天麻頭風(fēng)靈膠囊中天麻素含量

陳韻蓓

(四川省骨科醫(yī)院，四川 成都610041)

天麻頭風(fēng)靈膠囊由天麻、槲寄生、牛膝、玄參、地黃、當(dāng)歸、鉤藤、杜仲、川芎、野菊花等10 味中藥制成，功能滋陰潛陽、祛風(fēng)、強(qiáng)筋骨，用于治療頑固性頭痛、長期手足麻木、慢性腰腿酸痛等，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第五冊。本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-0903-91)雖在實(shí)行中藥保護(hù)時(shí)進(jìn)行研究修訂(WS3-B-3034-98)，但也只有齊墩果酸及當(dāng)歸的定性鑒別，沒有含量測定項(xiàng)，且本方中槲寄生、牛膝均含有齊墩果酸［1，2］，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對齊墩果酸的定性鑒別不具有專屬性。而天麻作為本方的君藥，本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并沒有對其中的天麻素含量進(jìn)行測定。為了全面評價(jià)天麻頭風(fēng)靈膠囊的質(zhì)量，本研究建立天麻素含量測定的高效液相色譜法(HPLC)［3，4］，擬使天麻頭風(fēng)靈膠囊的質(zhì)量控制更簡便、準(zhǔn)確、可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 SPD-10AVP 高效液相色譜儀(日本島津);分析天平(Sartorius，BS110S);天麻頭風(fēng)靈膠囊(貴州益佰制藥股份有限公司，批號:130101、130410、130808);天麻素對照品(批號:807-200205，中國藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純，TEDIA);甲醇(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司);重蒸餾水為自制;其他所用試劑均為分析純。

1.2 方法 ①對照品溶液的制備:精密稱取80 ℃

減壓干燥1 h 的天麻素對照品適量，加流動(dòng)相制成每1 ml 含50 μg 的溶液，即得。②供試品溶液的制備:取本品內(nèi)容物約2 g，精密稱定，置50 ml 圓底燒瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，回流提取1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解，并轉(zhuǎn)移至5 ml 量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用0．45 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。③陰性樣品溶液的制備:按處方比例稱取除天麻以外的其他藥材，參照天麻頭風(fēng)靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制法項(xiàng)下工藝制得陰性樣品，按②項(xiàng)方法制成陰性樣品溶液。④色譜條件［5］與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱:Dikma ODS，4．6 mm × 250 mm，5 μm;流 動(dòng) 相:乙 腈-水-磷 酸(1 ∶98．9 ∶0．1);柱溫:30 ℃;檢測波長為220 nm;流速為1．0 ml/min。理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。⑤空白干擾試驗(yàn):分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測定。⑥標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系:取天麻素對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 ml 含250 μg 的溶液，分別吸取上述溶液0．5、1、2、3、4、5 ml，分別置10 ml 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為各對照品溶液。分別精密吸取各對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀，依法測定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，以天麻素進(jìn)樣量微克數(shù)(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算得回歸方程。⑦精密度試驗(yàn):精密吸取對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀測定6 次，計(jì)算峰面積。⑧重現(xiàn)性試驗(yàn):取本品內(nèi)容物約2 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法平行制備5 份，依法測定，并計(jì)算樣品中天麻素的含量。⑨穩(wěn)定性試驗(yàn):取室溫放置的對照品溶液與供試品溶液，在0、1、2、4、8、12、24 小時(shí)分別進(jìn)樣。為了更全面地考察穩(wěn)定性，分別計(jì)算峰面積和天麻素含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。⑩加樣回收率試驗(yàn):取已知含量的樣品內(nèi)容物約1．0 g，精密稱定，平行5 份，各精密加入天麻素對照品溶液1 ml(精密稱取天麻素對照品10．08 mg，置10 ml 量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，即得，按供試品的制備方法制備供試品溶液，依法測定各樣品天麻素的含量，計(jì)算回收率。

2 結(jié)果

2.1 空白干擾試驗(yàn) 供試品色譜中天麻素峰分離度良好，柱效高，且陰性樣品色譜中在與天麻素峰相同保留時(shí)間處無干擾色譜峰，見圖1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系 線性關(guān)系回歸方程為Y=1786227．55X-27588．39，相關(guān)系數(shù)r= 0．9997。結(jié)果表明天麻素進(jìn)樣量在0．2328 ～2．3280 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3 精密度 計(jì)算得峰面積積分值RSD 為0．72%。

2.4 重現(xiàn)性 樣品中天麻素含量RSD 為2．4%。

2.5 穩(wěn)定性 峰面積和天麻素含量的RSD 分別為1．1%和0．57%，顯示天麻素對照品溶液及供試品溶液室溫放置24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 天麻素的平均回收率為97．74%，RSD 為1．9%，見表1。

圖1 天麻素含量測定HPLC 圖 a:對照品;b:供試品;c:陰性;1．天麻素峰

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品含量 取貴州益佰制藥股份有限公司生產(chǎn)的天麻頭風(fēng)靈膠囊樣品3 批，每批3 份，按1．2②項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液20 μl，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，并計(jì)算得各批樣品的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品中天麻素的含量測定結(jié)果

3 討論

中國藥典2010 年版一部天麻項(xiàng)下規(guī)定天麻素的含量不低于0．2%，由表2 可以看出市售產(chǎn)品中天麻素的平均含量為0．205 毫克/粒，參照《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》可計(jì)算出樣品中天麻素的含量均符合《藥典》要求，其中第一批樣品含量相對較低，可能是因?yàn)閺S家生產(chǎn)時(shí)原料差異造成的，但均符合藥典要求。

天麻為本方中君藥，雖然用量較少，但制定其含量測定方法是非常重要的。本文使用的含量測定方法有較強(qiáng)的實(shí)用性、可操作性，能合理、規(guī)范地測定天麻頭風(fēng)靈膠囊中天麻素的含量，為以后天麻頭風(fēng)靈膠囊含量限度的制定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的更新提供了依據(jù)。

［1］國家藥典委員會(huì)．《中華人民共和國藥典》一部［S］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:350．

［2］鄭虎占，董澤宏，佘靖．中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用［M］． 北京:學(xué)苑出版社，1998:1055．

［3］張輝，陳文秋，余敏靈，等．應(yīng)用氣相色譜法測定冰硼散中樟腦的含量［J］．實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2014，11(2):100-102．

［4］童榮生．高效液相色譜法測定山茱萸中沒食子酸的含量［J］． 實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2006，3(4):27-28．

［5］國家藥典委員會(huì)．《中華人民共和國藥典》一部［S］． 北京:化學(xué)工業(yè)出版，2010:54．