不同細(xì)胞因子和蛋白與妊娠期高血壓綜合征相關(guān)性的臨床研究

郝殿晉，李亞卓，孫 鑫，李洪臣，張秀軍

(1.秦皇島市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北秦皇島066000;2.中鐵山橋集團(tuán)醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北山海關(guān)066200;3.河北聯(lián)合大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北唐山063000)

妊娠高血壓綜合征(簡(jiǎn)稱妊高征)是妊娠期特有的疾病，發(fā)生于妊娠20周后，臨床表現(xiàn)為高血壓、蛋白尿、浮腫，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)抽搐、昏迷，甚至母嬰死亡。由于其病因尚不明確，至今仍是圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)。分析國(guó)內(nèi)外有關(guān)妊高征免疫指標(biāo)的研究，多為單獨(dú)分析某一細(xì)胞因子的價(jià)值或胎盤中細(xì)胞因子的含量，而聯(lián)合研究妊高征患者血清細(xì)胞因子和蛋白的變化的報(bào)道甚少。我們通過測(cè)定妊高征患者血清中單核細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤壞死因子 α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)、白細(xì)胞介素12(interleukin 12，IL-12)和由淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的白細(xì)胞介素4(interleukin 4，IL-4)的表達(dá)情況，分析由Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)和由Th2細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)在妊高征患者母體免疫系統(tǒng)中的功能;同時(shí)檢測(cè)參與體液免疫反應(yīng)的免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM，參與免疫防御系統(tǒng)的補(bǔ)體C3、C4和參與免疫調(diào)節(jié)的C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)等在妊高征中的表達(dá)。

材料和方法

一、研究對(duì)象

選取2011年5月至2012年12月秦皇島市第一醫(yī)院住院及門診的妊高征患者114例，年齡22～42歲，孕周 32+～40+周，平均(36.47±2.37)周。所有患者均按《婦產(chǎn)科學(xué)》(第7版)妊娠期高血壓疾病診斷與分類標(biāo)準(zhǔn)[1]確診，其中輕度子癇前期39例、重度子癇前期75例。隨機(jī)選取同期在醫(yī)院就診的正常晚期妊娠婦女93例作為對(duì)照，年齡21～40歲，孕周35+～41+周，平均孕周(37.48±1.88)周。所有入選對(duì)象均為單胎，初產(chǎn)婦，既往均無心、肝、腎、糖尿病及高血壓病史，排除感染性疾病、過敏性疾病及自身免疫疾病等合并癥，近3個(gè)月內(nèi)未用過激素類藥物，兩組間孕周和年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

二、方法

1.標(biāo)本采集 所有受檢者于治療前禁食10～12 h，次日清晨抽取空腹靜脈血，分離血清待測(cè)。

2.儀器 美國(guó)Bio-Rad公司Coda型全自動(dòng)酶標(biāo)儀及美國(guó)Beckman-Coulter公司IMMAGE免疫分析測(cè)定儀。

3.方法 采用雙抗體夾心親和素-生物素復(fù)合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)定 TNF-α、IL-12、IL-4，試劑盒由奧地利 COA 公司提供，IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體 C3、補(bǔ)體C4、CRP采用散射比濁法測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)品由廠家提供。嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行操作。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、各組血清 TNF-α、IL-12、IL-4 水平比較

與正常晚期妊娠組比較，妊高征組TNF-α、IL-12水平明顯升高，IL-4水平明顯降低(P＜0.001)。輕度子癇前期組 TNF-α、IL-4水平與正常晚期妊娠組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而IL-12水平明顯升高(P＜0.05)。輕度子癇前期組TNF-α、IL-12、IL-4水平與重度子癇前期組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。見表1。

二、各組血清 IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體 C3、補(bǔ)體C4、CRP 水平比較

妊高征組IgG、IgM、補(bǔ)體C3和補(bǔ)體C4水平低于正常晚期妊娠組(P＜0.001)，CRP水平高于正常晚期妊娠組(P＜0.001);但I(xiàn)gA兩組間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。輕度子癇前期組IgG、IgM、C3、C4、CRP 水平與正常晚期妊娠組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但兩組間IgA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。輕度子癇前期組IgG、C3、C4、CRP水平與重度子癇前期組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但兩組間IgA、IgM水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表1 妊高征組與正常晚期妊娠組血清TNF-α、IL-12、IL-4水平的變化 (±s，pg/mL)

表1 妊高征組與正常晚期妊娠組血清TNF-α、IL-12、IL-4水平的變化 (±s，pg/mL)

注:與正常晚期妊娠組比較，*P ＜0.05、＊＊P ＜0.001;與輕度子癇前期組比較，△P ＜0.05、△△P ＜0.001

IL-12 IL-4正常晚期妊娠組組別 例數(shù) TNF-α 93 51.02 ±15.76 17.85 ±5.12 16.78 ±5.05妊高征組 114 75.01±24.39＊＊ 36.32±14.85＊＊ 11.32±4.02＊＊輕度子癇前期組 39 62.04 ±16.96 22.89 ±6.15* 13.89 ±4.57重度子癇前期組 75 81.76±25.20△ 43.31±13.12△△ 9.99±2.99△

表2 各組血清IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP含量的變化 (±s)

表2 各組血清IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP含量的變化 (±s)

注:與正常晚期妊娠組比較，*P ＜0.05、＊＊P ＜0.001;與輕度子癇前期組比較，△P ＜0.05、△△P ＜0.001

組別 例數(shù) IgG(g/L) IgA(g/L) IgM(g/L) C3(g/L) C4(g/L) CRP(mg/dL)正常晚期妊娠組 93 10.83 ±3.14 3.96 ±1.03 2.42 ±0.61 1.26 ±0.30 0.33 ±0.07 0.45 ±0.15妊高征組 114 6.55 ±2.20＊＊ 3.52 ±0.98 1.56 ±0.52＊＊ 0.91 ±0.26＊＊ 0.19 ±0.08＊＊ 0.85 ±0.30＊＊輕度子癇前期組 39 7.87 ±2.73＊＊ 3.67 ±0.97 1.81 ±0.59＊＊ 1.03 ±0.27* 0.26 ±0.08* 0.62 ±0.20*重度子癇前期組 75 5.87 ±1.53△ 3.43 ±0.99 1.44 ±0.45 0.85 ±0.23△ 0.15 ±0.05△ 0.96 ±0.28△△

三、CRP與IL-12、TNF-α的直線相關(guān)分析

妊高征組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組、正常晚期妊娠組血清CRP與IL-12、TNF-α呈正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。見表3。

表3 各組CRP與IL-12、TNF-α的相關(guān)性分析 [r值(P值)]

四、TNF-α與補(bǔ)體C3、C4的直線相關(guān)分析

妊高征組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組、正常晚期妊娠組血清TNF-α與補(bǔ)體C3、C4呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。見表4。

表4 各組TNF-α與補(bǔ)體C3、C4的相關(guān)性分析 [r值(P值)]

討 論

TNF-α是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生其它炎癥介質(zhì)，是炎癥細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的啟動(dòng)因子。在正常妊娠時(shí)TNF-α維持在較低水平。適當(dāng)?shù)腡NF-α可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫及代謝功能，而過量則導(dǎo)致病理改變。IL-12也是一種前炎癥細(xì)胞因子，其誘導(dǎo)免疫平衡向Thl方向極化使細(xì)胞免疫反應(yīng)增強(qiáng)。IL-4是典型的由Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，在正常妊娠的維持中起重要作用[2]。

本研究結(jié)果顯示妊高征孕婦血清TNF-α、IL-12水平明顯高于正常晚期妊娠孕婦，IL-4水平明顯低于正常晚期妊娠孕婦，且隨著妊高征病情的加重，其變化程度越明顯。有研究顯示，TNF-α主要是通過損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞參與妊高征的發(fā)病[3]。1996 年，Wang等[4]通過測(cè)定胎盤中 TNF-α水平，首先發(fā)現(xiàn)其明顯高于正常孕婦。Serin等[5]采用前瞻性病例對(duì)照研究，認(rèn)為當(dāng)TNF-α＞10.13 pg/mL時(shí)，孕婦發(fā)生妊高征的可能性比較大。本研究IL-4的結(jié)果與李春香等[6]的報(bào)道相似，與孫瑜等[7]的報(bào)道不同。造成研究結(jié)果不同的原因可能系各項(xiàng)研究的樣本數(shù)不同，選取妊高征患者的病情程度輕重不一所致。

免疫球蛋白是一類具有抗體功能且多樣性的蛋白質(zhì)，是參與體液免疫反應(yīng)的主要反應(yīng)物質(zhì)。補(bǔ)體系統(tǒng)是非特異性免疫中極為重要的組成部分之一。當(dāng)受到激活，補(bǔ)體成分便按一定順序呈現(xiàn)連續(xù)酶促反應(yīng)，參與機(jī)體的防御功能和機(jī)體的自穩(wěn)狀態(tài)。CRP作為炎性反應(yīng)的標(biāo)志物，在急性創(chuàng)傷和感染時(shí)濃度升高。本研究顯示妊高征患者體內(nèi)循環(huán)IgG及IgM下降，IgG水平與病情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，證實(shí)了妊高征患者血清IgG水平低有自身產(chǎn)生不足的原因。本研究結(jié)果與林其德等[8]的研究結(jié)果相同。Petrucco 等[9]認(rèn)為妊高征患者腎小球中IgM型免疫復(fù)合物沉積的多少與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，患者血清IgM水平可作為一個(gè)估計(jì)病情和預(yù)后的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，但本研究結(jié)果不支持這一結(jié)論。本研究顯示發(fā)現(xiàn)妊高征組補(bǔ)體C3、C4均明顯低于正常晚期妊娠組，且在輕度子癇前期便已出現(xiàn)下降。張俊等[10]的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)晚孕組補(bǔ)體C3、C4高于妊高征組。CRP參與妊高征致病機(jī)制主要為CRP和體內(nèi)細(xì)胞毒性物質(zhì)引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙[11]。有證據(jù)顯示炎癥細(xì)胞因子改變了內(nèi)皮含氮氧化酶的表達(dá)[12]，急性內(nèi)皮一氧化氮產(chǎn)物阻塞引起反射性的血管收縮導(dǎo)致高血壓。同時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷導(dǎo)致內(nèi)皮源性血管舒張因子減少，也可致血壓升高。另一方面，慢性一氧化氮合成物的抑制，引起新內(nèi)膜形成，導(dǎo)致腎臟受損，產(chǎn)生蛋白尿。本研究顯示妊高征組CRP均明顯高于正常晚期妊娠組，且隨著妊高征病情嚴(yán)重程度的增加而增加。由此可以推測(cè)CRP水平與妊高征病情輕重程度有著密切的聯(lián)系。Kilic-Okman等[13]的研究結(jié)果與本研究相同，妊高征患者CRP水平顯著高于正常妊娠孕婦，且與體重指數(shù)無相關(guān)性。

IL-12有促進(jìn)TNF-α的作用。TNF-α可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)增加，激活中性粒細(xì)胞，釋放顆粒，出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，CRP隨之增高。最終促使妊高征的發(fā)生，加重病情。本研究結(jié)果顯示CRP與IL-12、TNF-α呈正相關(guān)。

補(bǔ)體活化的產(chǎn)物C3a可激活巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞等，后者釋放TNF-α等血管活性物質(zhì)。妊高征與補(bǔ)體活化有十分密切的關(guān)系，補(bǔ)體產(chǎn)物的增加必然消耗補(bǔ)體。本研究結(jié)果顯示妊高征各期TNF-α與補(bǔ)體 C3、C4均呈負(fù)相關(guān)。Haeger等[14]發(fā)現(xiàn)，在先兆子癇患者分娩時(shí)，血漿 C3a、C5a、SC5b-9水平升高的同時(shí)，伴隨白細(xì)胞介素6(interleukin 6，IL-6)和TNF-α的升高以及嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞活動(dòng)增加。這些物質(zhì)的增高均可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，從而引起妊高征的一系列病理變化。本研究結(jié)果與Haeger等[15]的研究結(jié)果相近。

從妊高征的發(fā)病過程可以看出，免疫功能的改變可能與病變的發(fā)生及程度有關(guān)。TNF-α引起妊高征的主要原因是血管內(nèi)皮損傷，全身小動(dòng)脈痙攣，導(dǎo)致血壓增高，腎血管痙攣又可以導(dǎo)致腎臟細(xì)胞間隙增大，蛋白漏出，出現(xiàn)蛋白尿，并伴有炎癥反應(yīng)，CRP隨之增高。IL-12有促進(jìn)TNF-α的作用。IL-4水平降低，使IL-4對(duì)妊娠的免疫保護(hù)被破壞。補(bǔ)體活化后激活凝血系統(tǒng)，使凝血功能發(fā)生改變。它們之間相互聯(lián)系，并互相影響，共同作用于機(jī)體，使妊高征患者出現(xiàn)了高血壓、蛋白尿、浮腫、凝血功能及肝臟功能異常等諸多的臨床表現(xiàn)。妊高征患者血清 IL-12、IL-4、IgG、C3、C4和CRP可反映妊高征的嚴(yán)重程度，可作為判斷病情的指標(biāo)。

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