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    甘肅地區(qū)豬發(fā)酵床土著菌種安全性評價

    2013-12-26 01:09:00丁文姣李曉蓉
    甘肅農(nóng)業(yè)科技 2013年7期
    關鍵詞:土著小白鼠菌劑

    丁文姣,李曉蓉,董 俊

    (甘肅省農(nóng)業(yè)科學院畜草與綠色農(nóng)業(yè)研究所,甘肅 蘭州 730070)

    土著菌種發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)利用周圍自然環(huán)境的生物資源,即采集本地土壤中的多種有益微生物,通過對這些微生物進行培養(yǎng)、擴繁,形成有相當活力的微生物母種,再合成菌劑用于發(fā)酵床養(yǎng)豬,菌劑的安全及可靠是其進行推廣的基礎與前提。為此,我們對前期分離篩選的土著菌種進行了安全性檢驗,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試菌種為2010年7月至2011年4月從蘭州、武威、臨洮3地采集不同種類樣品的分離所得(見表1)和活力99生酵劑(市售)。供試培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖瓊脂(PSA),肉汁胨瓊脂(BPA),肉汁胨培養(yǎng)液。供試小白鼠為昆明系小白鼠,標準體重20 g左右,共100只,雌雄各半,購于蘭州大學。

    表1 供試標樣來源

    1.2 試驗方法

    1.2.1 菌種分離及純化 在超凈工作臺用滅菌器械挑取標樣1 g左右于滅菌錐形瓶內(nèi),用無菌水定容到100 mL,震蕩20 min后靜置5 min,然后將其稀釋到質(zhì)量濃度為10-8g/mL,分別在10-4、10-6、10-8g/mL濃度下各取0.5 mL懸液平鋪于PSA平板上;再將10-2、10-4、10-6g/mL 3個濃度懸液80℃恒溫水浴處理30 min后各取0.5 mL平鋪于BPA平板上,每處理5個平板,37℃黑暗條件下培養(yǎng)24 h。取出培養(yǎng)好的平板,統(tǒng)計每個標樣所分離出菌種的類型計數(shù),并挑取長勢良好的菌種劃線接入BPA培養(yǎng)基純化培養(yǎng),在PSA平板上培養(yǎng)聞味初篩,挑取氣味不刺鼻的單菌落作為備選菌種保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2 菌種安全性毒力試驗 將備選菌種活化至PSA,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。將活化好的菌種接種至肉汁胨培養(yǎng)液,37℃恒溫條件下?lián)u床培養(yǎng)48 h,取培養(yǎng)好的菌液于血球計數(shù)板計數(shù),計算1 mL菌液的活菌數(shù)。試驗設菌種接種為主處理(A),共9個,處理A1為用菌種JZ1接種2次,處理A2為用菌種JZ2接種2次,處理A3為用菌種JZ3接種2次,處理A4為用菌種JZ4接種2次,處理A5為用菌種JZ5接種2次,處理A6為用菌種JZ6接種2次,處理A7為用菌種JZ7接種2次,處理A8為用菌種JZ8接種2次(活力99生酵劑,菌種對照),處理⑨為不接種,空白對照。設接種處理方式和接種菌液量為副處理(B),共3個,處理B1為灌胃0.25 mL/只,處理B2為灌胃0.50 mL/只,處理B3為腹腔注射0.50 mL/只。每處理取6只小鼠(雌雄各3只),先用菌液濃度為5×108個/mL的菌種接種1次,飼養(yǎng)觀察14 d后再用菌液濃度為50×108個/mL的菌種接種1次,飼養(yǎng)觀察14 d。試驗前1 d給小鼠斷食斷水,接種處理好的小鼠1 h后正常喂食飲水,在20℃恒溫條件下飼養(yǎng)觀察。

    表2 代表性菌種及來源

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌種分離純化結(jié)果

    通過對采集自蘭州、武威、臨洮3地不同樣源類型的19個樣品標本經(jīng)分離、純化,共獲得純化菌種167株。

    2.2 菌種安全性評價

    根據(jù)對功能菌的樣源地、樣品類型、產(chǎn)酶特點、生長狀況的綜合分析,選取前期試驗中獲得的具有代表性的土著功能菌種7株和商品菌種作為菌種對照布置毒力試驗,代表性菌種及來源見表2。

    試驗結(jié)果(表3)表明,從菌種接種方面可以看出,第1次接種后飼養(yǎng)觀察14 d,各處理對小鼠采食狀況、飲水、行為能力以及體貌特征如毛況等均無影響,小白鼠均未出現(xiàn)死亡。第2次接種后飼養(yǎng)觀察14 d,各處理的小白鼠也均未出現(xiàn)死亡,采食和精神狀態(tài)良好。接種2次后各處理小白鼠的生長情況同接種前。試驗結(jié)束后剖解觀察小白鼠各臟器(如心臟、肺臟、肝臟、腎臟、胃、腸、氣管、生殖器官等部位)均無病變且無出血點,表明所選7個土著菌種安全無毒。進一步將這些菌種對實驗動物小白鼠經(jīng)口灌胃法、腹腔注射法進行毒力試驗的結(jié)果表明,不同菌液用量灌胃處理和腹腔注射處理的小白鼠均未出現(xiàn)死亡,且采食狀況、行為能力以及精神狀態(tài)均無異常。綜合以上結(jié)果,試驗評價的7株土著功能菌種均安全可靠,可以用于豬發(fā)酵床制作接種并作為合成菌劑的備選菌種。

    表3 選取菌種安全性試驗

    3 小結(jié)與討論

    1)試驗篩選出的7個土著菌種菌株均為甘肅地區(qū)土著功能菌種。試驗結(jié)果表明,不同菌液用量灌胃處理和腹腔注射處理的小白鼠均未出現(xiàn)死亡,且小白鼠采食狀況、行為能力以及精神狀態(tài)均無異常,即7株土著功能菌種均安全可靠,可以用于豬發(fā)酵床制作接種并作為合成菌劑的備選菌種,但今后尚需進一步擴大實驗動物數(shù)量,繼續(xù)進行長期的安全性評價。

    2)發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)自近年傳入我國后,目前不分南北都有采用,商業(yè)公司宣傳為“生物環(huán)保養(yǎng)豬法”。但實際生產(chǎn)中存在許多客觀問題,因此,對合成菌劑的菌種在菌劑合成之前進行安全性風險評估,建立適合我國國情的菌種安全性評價體系,對保證發(fā)酵床養(yǎng)殖的安全性有重要的意義。

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