藏藥八味獐牙菜丸中芒果苷的含量測定

逯雯潔，王慧春，劉亞蓉，魏玉海，劉學良，劉海青 （青海省食品藥品檢驗所，青海 西寧810003）

八味獐牙菜丸為藏醫(yī)傳統(tǒng)名方，藏文名“蒂達杰巴日布”，收載于1995年《衛(wèi)生部藥品標準》藏藥標準（標準號為：WS3－BC－0241－95）［1］。臨床上用于膽囊炎和初期黃疸型肝炎等癥的治療。主要成分由獐牙菜、兔耳草、波棱瓜子、角茴香、榜嘎、小檗皮、巖參、木香八味藏藥材組成。本品君藥獐牙菜為龍膽科植物，是被廣泛用于治療肝膽疾病的藥物［2］，其主要化學成分為獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、當藥醇苷、異葒草苷等，芒果苷是獐牙菜屬植物中的有效成分，具有抗炎、抑菌、抗病毒、利膽和抗氧化等功能［3］。原衛(wèi)生部頒藏藥標準中僅對木香、小檗皮進行鑒別，并無定量測定內(nèi)容，為有效的定量控制藥品質(zhì)量，本實驗建立高效液相色譜方法對八味獐牙菜丸中芒果苷的含量進行了測定研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters1525型高效液相色譜儀，Waters2489紫外檢測器；電子天平（METTLER AB204－S，瑞士METTLER公司）；電子天平（METTLER TOLEDO，瑞士METTLER 公司）；Milli－QA 超純水器。

1.2 試藥 芒果苷對照品（批號111607－200301）供含量測定用，購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。八味獐牙菜丸樣品由兩家不同藥廠提供，分別是青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司（批號20090722、20100420），寧夏多維藥業(yè)有限公司（批號060601、

080304、080911、090310、090311、091212、091209、090312）。

陰性樣品分別按照按原標準制備工藝去除獐牙菜后制得。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 Waters SunFire C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；甲醇－0.1%冰醋酸（21∶79）為流動相；流速1 mL·min－1；柱溫：25 ℃；檢測波長260 nm；進樣量10μL。理論板數(shù)按芒果苷峰計算應不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芒果苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.054 0 mg的芒果苷對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 提取方法的考察

（1）超聲提取法：精密稱取本品（批號20090722）1.001 2 g置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定，超聲提?。üβ?50 W，頻率50 kHz）30 min，放冷后補足減失質(zhì)量，搖勻，濾過后取續(xù)濾液，即得。

（2）加熱回流提取法：精密稱取本品（批號20090722）1.000 4 g置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定，加熱回流提取30 min，放冷后補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過后取續(xù)濾液，即得。

對上述2種提取方法所得供試品溶液按照“2.1”項方法測定，測定結(jié)果相近，故確定選擇提取相對簡便的超聲提取法做為供試品的制備方法。

2.3.2 提取時間的考察 將本品（批號20090722）研細，精密稱取1.001 8 g于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定，超聲提取（功率250 W，頻率50 kHz）20，30，40 min，放冷，再稱定，補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按照“2.1”項方法測定芒果苷含量。結(jié)果表明30，40 min所測得的芒果苷含量接近，故提取時間選擇30 min。

2.4 陰性對照溶液的制備 按照處方組成，取除獐牙菜外的其余藥味，按供試品溶液制備項下的方法制備陰性對照溶液。進行測定，陰性溶液在對照品溶液出峰位置上無峰出現(xiàn)，表明無干擾，見圖1。

圖1 芒果苷高效液相色譜圖A.樣品；B.對照品；C.陰性；1－芒果苷Fig 1 HPLC chromatogram of mangiferinA.sample；B.standard；C.negative sample；1－mangiferin

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取芒果苷對照品10.8 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0.108 0 mg·mL－1的對照品儲備溶液。取上述對照品儲備溶 液 分 別 制 成 質(zhì) 量 濃 度 為0.003 24，0.006 48，0.012 96，0.043 20，0.064 80，0.108 00 mg·mL－1的溶液，分別精密吸取5μL按上述條件注入色譜儀測定，以進樣量（μg）為橫坐標和峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y ＝4 279 440.4 X－17 761.9，r＝0.999 7，表明進樣量在0.016 2～0.540 0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察 精密吸取質(zhì)量濃度為0.054 mg·mL－1的對照品溶液10μL，重復進樣5次，按色譜條件操作進行，測峰面積，以峰面積計算，結(jié)果RSD＝0.94%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取上述供試品溶液（批號20090722）分別在0，2，4，8 h進行，進樣量10μL，測定芒果苷峰面積，以峰面積計算，結(jié)果RSD＝0.29%。

2.8 重復性試驗 按照上述含量測定方法對相同批號樣品（批號20090722）制備5份供試液，分別進樣10μL，測得峰面積，計算RSD＝1.89%。

2.9 加樣回收率試驗 精密稱取芒果苷對照品適量，加甲醇溶解配制成0.054 0 mg·mL－1的溶液，搖勻；稱取已知含量的八味獐牙菜丸樣品（批號20090722，含量為0.43 mg·g－1）0.7 g，精密稱定，稱取6份，置具塞錐形瓶中；每份中均同時加入芒果苷對照品溶液（0.054 0 mg·mL－1）7 mL，并精密加入甲醇13 mL，按供試品溶液制備項下的方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測定芒果苷的含量，計算回收率。芒果苷加樣回收率結(jié)果見表1。結(jié)果表明方法可行。

表1 芒果苷回收率測定結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery of mangiferin（n＝6）

3 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件對10批樣品進行含量測定，以外標一點法計算樣品中芒果苷的含量，10批樣品（批號20090722，20100420，20110313，20090404，20090111，080911，090310，090312，060601，091212）含 量 分 別 為0.43，0.79，0.16，0.10，0.09，0.09，0.06，0.05，0.16，0.07 mg·g－1。

4 討論

由于原標準對成藥中獐牙菜未進行定量控制，因此增訂了用高效液相法測定獐牙菜中芒果苷的含量測定項。含量測定方法優(yōu)化時，嘗試用甲醇－水，甲醇－冰醋酸溶液，甲醇－磷酸溶液等多種流動相，最后選擇甲醇－0.1%冰醋酸為流動相，被測組分達到良好地分離度并且有較好的峰形。

10 批 樣 品 含 量 分 別 為0.43，0.79，0.16，0.10，0.09，0.09，0.06，0.05，0.16，0.07 mg·g－1，差 異 較 大，查 閱 文獻［4－6］，獐牙菜屬植物種類較多，藥材含量成分差異也較大，還可能受到地域、生長期、儲藏時間等因素的影響。而由于此品種為本所藏藥標準提高課題，曾赴藥廠實地考察，發(fā)現(xiàn)兩廠家投料所用原料藥材為獐牙菜屬不同種植物，青海金訶藏藥藥業(yè)股份有限公司用印度獐牙菜投料，而寧夏多維藥業(yè)用川西獐牙菜作為原料藥材投料，分別各取兩廠家3批原藥材按正文樣品含量測定方法進行比較，發(fā)現(xiàn)印度獐牙菜原藥材芒果苷含量分別為2.35、4.20、0.78 mg·g－1，明顯優(yōu)于川西獐牙菜芒果苷含量（0.50、0.41、0.33 mg·g－1）。由此可見，提高本品藏藥標準，還需進一步將處方組成細化并制定合理的原藥材含量測定指標。

［1］ 衛(wèi)生部藥品標準委員會.衛(wèi)生部藥品標準（藏藥第一冊）［S］.1995：244.

［2］ 楊永昌，何廷農(nóng)，盧生蓮，等.藏藥志［M］.西寧：青海人民出版社，1991：112－113.

［3］ 丁鳳娟，朱雯，于瑩，等.HPLC 分析四種獐牙菜中芒果苷的質(zhì)量分數(shù)［J］.大連工業(yè)大學學報，2009，28（6）：401－403.

［4］ 孫磊，田金改，金宏宇，等.HPLC 法測定印度獐牙菜中5種有效成分含量［J］.中國藥事，2010，24（7）：687－689.

［5］ 保儀，吉文鶴，馬玉花，等.HPLC 測定四川及青海地區(qū)獐牙菜植物中6種主要成分的含量［J］.中國中藥雜志，2006，31（24）：2036－2038.

［6］ 夏從龍，張浩，劉光明，等.獐牙菜屬及近緣植物中4種有效成分HPLC 定 量 分 析［J］.藥 物 分 析 雜 志，2007，27（8）：1161－1164.