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    水綿葉綠素、果膠連續(xù)提取的工藝研究

    2013-12-21 07:56:09姜益泉
    生物學雜志 2013年3期
    關鍵詞:果膠提取液葉綠素

    袁 玲,姜益泉

    (湖北工程學院生命科學技術(shù)學院, 孝感 432000)

    水綿(Spirogyra)是綠藻門接合藻綱水綿科水綿屬植物,藻體由1列圓柱狀細胞連成長絲狀,細胞內(nèi)富含葉綠素、礦物質(zhì)和生物活性物質(zhì),表面有較多的果膠質(zhì);廣布于池塘、溝渠、河流、湖泊和稻田[1]。水綿可作為某些魚類的餌料,曬干可作為食物;入藥有清熱解毒的作用,用于丹毒、燙火傷。水綿大量繁殖時,大片生于水底或成團漂浮水面,危害水稻生長或漁業(yè)生產(chǎn),也造成一些工廠管道的堵塞。

    水綿中葉綠素含量高于陸生植物;果膠分布于細胞表面,易于提取。果膠和葉綠素在食品上用作增稠劑、著色劑,對保護皮膚、防止紫外線輻射、治療創(chuàng)口有一定的作用[2-4]。本文研究提取劑、溫度、提取時間、料液比等因素對水綿葉綠素和果膠提取的影響,利用正交實驗優(yōu)化水綿葉綠素和果膠提取的生產(chǎn)工藝,為變廢為寶及生物資源的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 材料和儀器

    水綿采于校園三聲亭水池,清水洗去雜質(zhì),控干水分,105~110℃滅菌15min,分袋包裝待用。

    HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋,752 N紫外可見分光光度計,微波爐,SENCO R205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。乙醇、丙酮、石油醚、鹽酸等均為分析純。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 葉綠素提取劑及葉綠素檢測方法

    稱取2 g水綿6份,加入10 mL的不同溶劑密封浸泡3 d,確定最佳提取劑。分光光度法測定葉綠素含量[5-6]。

    1.2.2 影響葉綠素提取效果主要因素的選擇

    對乙醇提取葉綠素的影響因素溫度、時間、液料比進行單因子實驗并設計正交試驗確定葉綠素提取工藝[7]。

    1.2.3 果膠提取

    酸法提取[8]。將處理過的濾渣洗凈乙醇,加水,用鹽酸調(diào)pH值至1.5~2.5,微波加熱一定時間,趁熱過濾得果膠萃取液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在55℃~60℃的條件下,將萃取液的果膠濃縮,立即冷卻用95%酒精使果膠沉淀析出,壓榨干燥得果膠粉。正交試驗確定果膠提取的料液比、微波功率、pH值和提取時間。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 葉綠素提取劑及葉綠素提取液最大吸收波長的確定

    6種溶劑提取水綿葉綠素的結(jié)果見表1。95%乙醇提取效果最好,浸提后水綿乳白色;75%乙醇、乙醇丙酮混合液次之,色素在水及石油醚中難溶??紤]到丙酮毒性及后續(xù)提取,選擇95%乙醇作為浸提劑。

    表1 不同溶劑對水綿色素的提取效果

    95%乙醇浸提液紫外可見分光光度計掃描結(jié)果見圖1。440nm 和 665nm 波長下葉綠素提取液有吸收峰。由于在浸提過程沒有除雜,而這些雜質(zhì)的最大吸收峰接近440nm,因此實驗中以665nm 的OD值進行提取液吸光值的測定。

    圖1 水綿葉綠素可見分光吸收光譜

    2.2 不同因素對水綿葉綠素提取的影響

    2.2.1 料液比對葉綠素提取的影響 95%乙醇為提取劑考察料液比對葉綠素提取的影響,室溫下暗處浸提1 d,定容至25 mL,稀釋10倍測665nm 的OD值。

    表2 料液比對水綿葉綠素提取的影響

    由表2可知,適當增加溶劑用量有利于提高提取液的吸光值,當料液比1∶15時,吸光值下降,表明1∶10提取已完全。

    2.2.2 提取溫度對葉綠素提取的影響 測定不同溫度下浸提100min提取液的吸光度作為色素提取率的指標(表3)。結(jié)果表明,在溫度低于 60℃時,隨著提取溫度的逐漸升高,色素提取率逐漸升高,但在80℃時提取率降低。由于溫度升高,促進細胞壁的破裂,利于葉綠素從細胞中分離出來;但當溫度高于80℃時,提取率降低,可能與葉綠素高溫下降解有關。

    表3 提取溫度對水綿葉綠素提取的影響

    2.2.3 水綿葉綠素提取的正交實驗 將料液比、提取溫度、時間3因素按3水平進行正交實驗,正交實驗數(shù)據(jù)及結(jié)果見表4。

    表4 葉綠素提取正交實驗設計及結(jié)果

    影響葉綠素提取的因素依次為料液比>時間>溫度,優(yōu)化工藝條件組合為料液比為1∶10,60℃下提取 90min。在此工藝條件下葉綠素粗產(chǎn)品得率可達到2.24%。

    2.3 微波助提水綿果膠的正交實驗

    微波輻射能穿透介質(zhì),到達物料的內(nèi)部,使基質(zhì)內(nèi)部溫度迅速上升,增大萃取成分在介質(zhì)中的溶解度,加速目標物向溶劑的擴散[9]。微波法用于天然成分的提取,選擇性高、操作時間短、溶劑耗量小、目標組分獲得率高,并且能極大限度地保留分離組分的天然活性[10]。以橘皮為原料在微波條件下,用水和鹽酸萃取、乙醇沉淀提取果膠,通過電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)微波加熱會破壞原料的組織結(jié)構(gòu),經(jīng)微波處理后果膠的提取率高,得到的果膠質(zhì)量好、酯化度高、分子量大、凝膠強度大[11]。提取果膠的微波功率、萃取時間、pH值、溶液與濾渣比均對果膠的提取有影響,將這4因素按3水平進行正交實驗,正交實驗數(shù)據(jù)及結(jié)果見表5。

    表5 果膠提取正交實驗設計及結(jié)果

    微波萃取影響果膠得率最大的是pH值,其次是微波功率。提取果膠的最佳工藝為微波功率600 W,每次萃取5min,pH值2.0的鹽酸溶液與濾渣比為10∶1。在此條件下,果膠得率達到19.2%。

    與傳統(tǒng)提取方法相比,微波輻射能大大加快組織的水解,使果膠的提取時間由傳統(tǒng)方法的90min縮短為5min[12]。避免了大量果膠的分解,同時果膠提取液中果膠的含量有所提高。

    3 結(jié)論

    正交實驗確定葉綠素提取的最佳工藝條件為乙醇作為提取劑,料液比為1∶10,60℃水浴條件下提取 90min,葉綠素粗產(chǎn)品得率可達到2.24%。果膠提取的最佳工藝為微波功率600 W,每次萃取5 min,pH值2.0的鹽酸溶液與濾渣比為10∶1,果膠得率達到19.2%。

    水綿葉綠素、果膠連續(xù)提取工藝設備簡單,免去了果膠生產(chǎn)中脫色工藝,降低了生產(chǎn)成本,簡化了操作工序,回收利用率高,具有開發(fā)利用的價值。

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