草果多糖的含量測定

盧小雪，張德威，黃雨晴，和小娟，黃鎖義*

多糖是由糖苷鍵連接起來的醛糖或酮糖組成的天然大分子物質(zhì)。研究表明，多糖及其復(fù)合物分子具有重要的生理作用［1］。

草果(Amomum tsao-ko)為姜科豆蔻屬(Amomum Roxb.)植物草果(Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire)的成熟果實(shí)，又名草果仁、草果子、老寇，味辛、性溫，入脾、胃二經(jīng)，能溫中、行氣、燥濕為藥食兩用同源植物［2］。中國藥典(2010年版)記載草果(Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire)為兩用同源植物［2］。中國藥典(2010年版)記載草果(Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire)為姜科豆蔻屬植物草果的干燥成熟果實(shí)，主產(chǎn)于廣西、云南、貴州等地，具有燥濕溫中、截虐除痰的功效，用于寒濕內(nèi)阻、痞滿嘔吐、瘧疾寒熱、瘟疫發(fā)熱等證。在民間，草果主要用于瘧疾、咽喉感染、腹痛、胃功能失調(diào)、消化不良、惡心嘔吐和腹瀉等［3］。

1.1 原料與試劑

無水乙醇AR;乙醚 AR;氯仿 AR;苯酚AR;硫酸AR;正丁醇AR;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(J＆K CHEMICAL LTD);貴港草果購自廣西百色市藥店。

1.2 主要儀器設(shè)備

臺(tái)式連續(xù)投料粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司);電熱式恒溫水浴鍋(江蘇金壇宏凱儀器廠);電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);722N可見分光光度計(jì)(上海精科科學(xué)儀器有限公司);循環(huán)水真空抽氣泵(上海嘉鵬科技有限公司);DHG-9070A型電熱恒溫旋風(fēng)干燥箱(上海精密設(shè)備有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 貴港草果多糖的提取

將貴港草果打磨成粉末精確稱取9 g，分成3等份，加入100 mL的燒杯中，蒸餾水加至40 mL，將其置于65℃電熱恒溫水浴鍋中，水浴3 h后，進(jìn)行抽濾，將濾液放于大燒杯中，同樣方法將草果多糖重復(fù)提取3次，再用電熱恒溫水浴鍋將合并濾液加熱濃縮至15 mL左右，冷卻30 min后，加入乙醇60 mL，避光靜置1 d，抽濾，用乙醇和乙醚依次將濾餅多次清洗至見棕黃色粉末狀固體，稱量得到0.095 g。

2.2 貴港草果多糖粗品的提純

2.2.1 Sevage 法脫蛋白［4］

取上一步得到的粗多糖溶液放于燒杯中，加入相當(dāng)于粗多糖溶液體積1/4氯仿-正丁醇(預(yù)先配制成體積比為4∶1混合液)，充分搖晃30 min后，然后用分液漏斗將水與氯仿分開。將水再再加入相當(dāng)于其體積1/4的氯仿-正丁醇溶液，重復(fù)上述過程，共計(jì)重復(fù)3次。最后將的到液體用電熱恒溫旋風(fēng)干燥箱烘干，及得樣品多糖為w1，稱量w1=0.028 g。

2.3 貴港草果多糖含量測定

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定［5］

精確配制5.0%的苯酚溶液和0.1 mg/mL的葡萄糖溶液。再依次精確配制 10、20、40、60、70μg/mL的不同濃度的葡萄糖對照品系列溶液。分別準(zhǔn)確量取5份1.00 mL樣品液，分別置于10 mL具塞比色管中，加苯酚溶液1.50 mL，濃硫酸溶液7.50 mL，混勻放置30 min，用可見分光光度計(jì)測其吸光度值(在λ=486 nm處)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程:A=0.065 4C-0.005 7，r=0.999 6。

2.3.2 貴港草果多糖提取測定(苯酚-硫酸［6-7］)

稱取草果多糖0.01 g，量取1 mol/L H2SO42 mL依次置于10 mL試管中，在100℃水中加熱2 h，冷卻20 min后再移至100 mL容量瓶，并用蒸餾水定容。分別量取5份1.0 mL樣品液，5份1.5 mL 5%苯酚溶液，5份7.5 mL濃硫酸溶液依次置于5個(gè)具塞比色管中，混勻后靜置30 min，用可見分光光度計(jì)測其吸光度值(在λ=486 nm處)，計(jì)算貴港草果多糖的含量，測得結(jié)果如表1。

表1 紫外可見分光光度計(jì)平行測定貴港草果多糖溶液的吸光度

據(jù)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖線性回歸方程，計(jì)算出平均濃度，結(jié)果為 C=3.102 4 μg/mL。

根據(jù)公式F=m/(C×D)計(jì)算草果多糖與葡萄糖之間的換算因子。由實(shí)驗(yàn)可知m為稱取的粗多糖的質(zhì)量0.010 0×106μg，D為粗多糖稀釋液倍數(shù)100 0，代入公式計(jì)算得 F=3.223。

2.3.2.1 粗多糖提取率的計(jì)算［8］及回收率的測定

根據(jù)公式粗多糖提取率(%)=［C×D×F×K/m0×106］×100(%)計(jì)算粗多糖提取率。K=(貴港草果制備的樣品多糖m1)/(0.010 g貴港草果多糖)，計(jì)算得 K=2.806;C=3.102 4 μg/mL;D 為粗多糖稀釋液倍數(shù)100 0;F=3.223;m0為貴港草果干粉重量9 g。代入公式計(jì)算得:

粗多糖提取率(%)=0.312%。

取5支10 mL具比色管中，分別量取不同濃度的對照品溶液 1 mL，15.0%苯酚溶液 1.5 mL，濃硫酸溶液7.50 mL，充分混勻后靜置20 min，再分別加入“2.3.3”中的粗多糖溶液 0.1 mL，用可見分光光度計(jì)測其吸光度值(在λ=486 nm處)，計(jì)算出回收率 =97.14%，RSD=0.827%(n=5)。

3 結(jié)論

3.1 貴港草果多糖的含量為0.312%，回收率為97.14%，RSD=0.827%(n=5)。

3.2 多糖是強(qiáng)極性分子，溶于水而不溶于有機(jī)溶劑的特點(diǎn)采用熱水浸提法提取，以防止引起糖苷鍵的斷裂。

3.3 多糖在人們的生產(chǎn)和生活中具有廣泛的應(yīng)用前景，本研究方法簡便準(zhǔn)確可行，并且為草果多糖的開發(fā)與利用提供了可靠的理論依據(jù)。

［1］ 方一葦.具有藥理活性多糖的研究現(xiàn)狀［J］.分析化學(xué)，1994，11(9):955-960.

［2］ 國家藥典委員會(huì)，中華人民共和國藥典:一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:165.

［3］ Yang Y，Yue Y，Runwei Y，et al.Cytotoxic，apoptotic and antioxdidant activity of the essential oil of Amomum tsao-ko［J］.Bioresour Technol，2010，101(11):4205

［4］ 劉成海，萬菌，涂宗財(cái)，等.百合多糖脫蛋白方法的研究［J］.食品科技，2002，23(1):89-90.

［5］ 李金花，農(nóng)石生，黃鎖義，等.芒果葉多糖的提取及含量測定［J］.食品研究與開發(fā)，2012，33(3):135-137.

［6］ 趙云濤，國興明，李付振.金櫻子多糖的抗氧化作用［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2003，24(4):35-37.

［7］ 鐘巖，潘浦群，王艷紅，等.苯酚-硫酸法測定鮮人參中多糖含量［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥.2008，19(8):57-58.

［8］ 劉志成.艾葉中黃酮和多糖的提取及分析［D］.湖南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文，2009.