黑皮果蔗組培脫毒與快繁技術研究

林警周，陳金斌，倪秋涼，鄧妍妍，吳松海

(1.福建省龍巖市新羅區(qū)種子站 364000;2.福建省龍巖市新羅區(qū)蘇坂鄉(xiāng);3.福建省龍巖市新羅區(qū)農業(yè)局;4.福建省農業(yè)科學院甘蔗研究所)

福建省龍巖市新羅區(qū)是黑皮果蔗的主要產區(qū)，2011年全縣黑皮果蔗種植面積667 hm2。黑皮果蔗皮薄、莖脆、汁多、味甜，富含人體所需的多種氨基酸、維生素和礦物質等，可以解渴、充饑、消除疲勞，在藥用上還有消痰止咳、健脾解酒的功效，是一種深受廣大消費者喜愛的果品，市場前景十分廣闊，農民種蔗的積極性很高。但由于黑皮果蔗在本地已推廣多年，種性退化問題已開始顯現(xiàn)，尤其是果蔗花葉病和宿根矮化病發(fā)生嚴重，造成植株變矮、節(jié)間變短、品質變劣，致使其商品性變差，產量下降，嚴重的減產30%左右［1］，已影響新羅區(qū)果蔗產業(yè)的發(fā)展。為了對黑皮果蔗進行提純復壯，提高其種性，筆者于2010年對黑皮果蔗的脫毒組培技術進行探索研究。

1 材料與方法

1.1 材料

選取無病蟲害、長勢較好并已露節(jié)的黑皮果蔗蔗莖為供試材料，用52℃熱水溫湯浸種30 min進行脫毒處理，之后種植，待種苗長到20 cm后，取下莖梢。立即對取下的莖梢葉片用RT－PCR檢測法進行甘蔗花葉病毒 (SCMV)、甘蔗高粱花葉病毒(SrMV)和甘蔗黃葉病毒 (ScYLV)檢測。檢測后，將沒有帶病毒的莖梢作為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1 材料處理 將莖梢的外葉鞘剝開切段，先用75%酒精對外部及兩端切口擦洗，再用75%酒精擦洗1次，環(huán)剝外層葉鞘并去除兩端切口，之后把莖段進行橫切，每段2 mm左右，作為誘導愈傷組織的材料。

1.2.2 培養(yǎng)基 誘導愈傷組織、分化培養(yǎng)、生根培養(yǎng)3個試驗各設置4種不同濃度的培養(yǎng)基配方。

誘導愈傷組織培養(yǎng)基:①MS+2，4－D 0.5 mg/L;②MS+2，4－D 1.5 mg/L;③MS+2，4－D2.5 mg/L;④MS+2，4－D 3.5 mg/L。

分化增殖培養(yǎng)基:①MS+BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L;②MS+BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L;③MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L;④MS+BA 2.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

誘導生根培養(yǎng)基:①1/2MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;②1/2 MS+IBA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;③1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;④1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L。

1.2.3 培養(yǎng)條件 在黑暗環(huán)境條件下，有利于果蔗愈傷組織的誘導，此階段要用厚布對組培瓶進行遮蓋。綠苗分化增殖及生根培養(yǎng)則需要光照，在培養(yǎng)室用日光燈進行照射，每天光照10 h以上，光照度為1 500～2 000 lx，培養(yǎng)室溫度保持在26～28℃。

2 結果與分析

2.1 誘導愈傷組織

在誘導愈傷組織階段，以MS作為基本培養(yǎng)基，通過調節(jié)2，4－D濃度，從中選取合適誘導愈傷組織的2，4－D濃度。在愈傷組織誘導階段，每種濃度處理接種200粒、10 d左右，誘導出淡黃色的愈傷組織，長成結構較為緊密的菜花狀;25 d后，進行觀察記載。從表1數據看出，2，4－D 1.5 mg/L濃度及2.5 mg/L濃度處理的誘導率達到90%以上。其中2，4－D濃度為2.5 mg/L處理的誘導率達到94.0%，且誘導質量較高，是愈傷組織誘導的適宜濃度。

表1 不同濃度的2，4－D對愈傷組織誘導的影響

2.2 分化培養(yǎng)

2.2.1 細胞分裂素含量對分化綠苗的影響 在綠苗分化階段，通過調節(jié)6－BA和KT的濃度，觀察其對綠苗分化的影響，從中確定適宜的細胞分裂素濃度水平。

從表2數據看出，愈傷組織經過25 d的培養(yǎng)，不同濃度處理均能分化出綠苗，分化率都達到80%以上。其中MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L處理的綠苗分化率最高，質量最好，苗較高較壯。

表2 細胞分裂素含量對綠苗分化的影響

2.2.2 細胞分裂素含量對綠苗增殖培養(yǎng)的影響在綠苗增殖階段，繼續(xù)采用上述4種細胞分裂素的濃度組合。培養(yǎng)25 d后，4個處理均可見綠苗增殖，但增殖數量和苗的長勢存在一定的差別。

從表3數據看出，MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L處理的效果最好，苗數多，苗較高較壯，長勢最好，且增殖系數最高，達到4.0倍;MS+BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L處理的效果最差，苗小且少，增殖系數只有2.0倍;其他2種濃度處理的表現(xiàn)中等，苗數較多，增殖系數都達到3.0倍以上。試驗結果表明，適宜綠苗增殖的培養(yǎng)基為MS+BA 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

表3 細胞分裂素含量對綠苗增殖培養(yǎng)的影響

2.3 生根培養(yǎng)

由于生根階段對大量元素需求較少，因此對MS基本培養(yǎng)基進行減半處理，通過調節(jié)IBA和NAA的濃度，觀察對果蔗生根的影響。

從表4數據看出，4個處理的生根率都達到80%以上，其中1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.0mg/L處理的生根率達到92.0%，苗高且壯，根較長且壯;1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L處理的生根率較低，苗細小，長勢較差。因此，適宜的生根培養(yǎng)基配方為1/2 MS+IBA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。

表4 IBA對生根的影響

2.4 假植階段

待根系較為發(fā)達后，可假植到苗床，用甲基托布津進行消毒，蓋上地膜保溫保濕，成活率可達90%以上。

3 討論

在組培過程中，發(fā)現(xiàn)光照強度對芽苗長勢有較大影響，當光照強度大于1 500 lx時，芽苗粗壯，葉片濃綠，肥厚;反之，長勢較差。