Urantide對大鼠心肌缺血/再灌注后心肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究

張駿艷，姚 華，李 晟，孫璇君，陳志武

1.抗炎免疫藥理學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家中醫(yī)藥管理局中藥藥理三級實(shí)驗(yàn)室，安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，安徽 合肥 230032;2.安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)院生物學(xué)教研室，安徽合肥 230032)

近年來，動脈搭橋術(shù)、溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)、體外循環(huán)心臟外科手術(shù)和心肺腦復(fù)蘇術(shù)等手段的建立和推廣應(yīng)用，使得缺血心臟能在短時間內(nèi)重新獲得血液灌注并恢復(fù)氧供應(yīng)。但臨床研究發(fā)現(xiàn)這種在心肌缺血基礎(chǔ)上恢復(fù)血流后，組織損傷加重、甚至發(fā)生不可逆性損傷的現(xiàn)象稱為心肌缺血/再灌注損傷(myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI)?；钚匝踝杂苫谌毖驮俟嘧⑦^程中產(chǎn)生增加并在該病理過程中發(fā)揮了重要的作用［1］。而且再灌注可加速由于心肌缺血促發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡過程，證實(shí)細(xì)胞凋亡也參與了缺血/再灌注的病理損傷過程［2］。

Urantide是在UrotensinⅡ基礎(chǔ)上衍生的肽類UT受體拮抗劑，與 hUⅡ結(jié)構(gòu)相似，為環(huán)11肽［3］。Urantide與重組人、猴、貓、鼠等多種動物的UT受體均具有相當(dāng)高的親和力。本課題組前期研究表明Urantide對心肌缺血/再灌注大鼠的心臟具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與改善低灌流、清除氧自由基及抗脂質(zhì)過氧化、增加NOS活性、促進(jìn)NO合成及抑制鈣超載有關(guān)［4］。最近研究表明［5］，urantide 預(yù)處理減輕心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷的作用還與磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)和PKC信號通路有關(guān)。

本文旨在整體動物模型基礎(chǔ)上研究PI3K/Akt信號通路和PKC信號通路在urantide抗氧化應(yīng)激反應(yīng)和抗心肌細(xì)胞凋亡中的作用，為urantide用于心肌保護(hù)提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 Urantide:吉爾生化(上海)有限公司合成，經(jīng)HPLC檢測純度≥95%，凍干粉劑，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水稀釋至所需濃度;鹽酸維拉帕米注射液(Ver):上海禾豐制藥有限公司;LY294002:san-ta cruz biotechnology(sc-201426);白屈菜紅堿(Chelerythrine Chloride，CHE):santa cruz biotechnology(sc-3547);伊文思蘭:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;TTC:Sigma公司產(chǎn)品;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)試劑盒購自南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所。兔抗Bax多克隆抗體及兔抗Bcl-2多克隆抗體均為Santa Cruz產(chǎn)品;免疫組化試劑盒:北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;TUNEL檢測試劑盒:德國Roche公司產(chǎn)品。

1.2 動物 選用SD大鼠，♂，體質(zhì)量300～380 g，由安徽醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。合格證號:SCXK(皖)2005－0001號。

1.3 儀器 HX-300動物呼吸機(jī):成都泰盟科技有限公司;BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):成都泰盟科技有限公司;TDZ4-WS低速臺式離心機(jī):長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;SpectraMax 190型全波長酶標(biāo)儀:美國MD公司。

1.4 方法

1.4.1 冠狀動脈左前降支(LAD)結(jié)扎/松開致大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型的制備 大鼠腹腔注射10%的水合氯醛3 ml·kg－1麻醉。大鼠頸前及胸前皮膚常規(guī)備皮，仰臥位固定。在環(huán)狀軟骨上方0.5 cm處，頸部正中縱形切口顯露氣管，剪一倒“T”型口，置入氣管導(dǎo)管，接小動物呼吸機(jī)，呼吸頻率為50～60次/分。四肢皮下插入電極，連接BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，持續(xù)記錄心電圖(Ⅱ?qū)?lián)，ECG)。沿左鎖骨中線心臟搏動處縱向切開皮膚2～3 cm，在第4、5肋間打開胸腔，逐層鈍性分離皮下組織及肌肉，輕輕剪開心包，用自制開胸器擴(kuò)張切口，使心臟充分暴露。結(jié)扎左冠狀動脈前降支，方法為用持針器將6-0真絲帶針線，在動脈圓錐與左心耳之間冠狀靜脈處進(jìn)針，將結(jié)扎線從PE管(直徑2 mm)中間穿出，用PE管一端阻斷冠狀動脈血流，另一端用動脈夾固定。心肌缺血即阻斷血流30 min(缺血表現(xiàn)為其支配的局部心肌組織發(fā)紺或蒼白，心電圖ST段明顯抬高或T波高聳，以此作為冠狀動脈結(jié)扎成功的標(biāo)志)，松開動脈夾及PE管再灌注90 min(局部心肌組織轉(zhuǎn)紅恢復(fù)血流，心電圖抬高的ST段下降50%以上)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取血離心，取上清放入－20℃冰箱凍存，嚴(yán)格按試劑盒操作測SOD、MDA、NO、NOS等生化指標(biāo)。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 大鼠隨機(jī)分為8組，分別為:①假手術(shù)組(sham group):僅穿線，不結(jié)扎冠狀動脈;②模型組(model group):結(jié)扎左冠狀動脈30 min后，松開結(jié)扎線再灌注90 min;③ Urantide 3 μg·kg－1組:于缺血前5 min舌下靜脈1 min內(nèi)一次推注 urantide 3 μg·kg－1;④ Urantide 10 μg·kg－1組:于缺血前5 min舌下靜脈1 min內(nèi)一次推注urantide 10 μg·kg－1;⑤ Urantide 30 μg·kg－1組:于缺血前5 min舌下靜脈1 min內(nèi)一次推注urantide 30 μg·kg－1;⑥ Ver 1.6 mg·kg－1組:于缺血前 5 min 舌下靜脈1 min內(nèi)一次推注Ver 1.6 mg·kg－1;⑦ Urantide 30 μg·kg－1+CHE(Chelerythrine，PKC 特異性阻斷劑)組:在穿線穩(wěn)定后，舌下靜脈快速推注CHE 1 mg·kg－1，5 min后舌下靜脈快速推注 urantide 30 μg·kg－1，穩(wěn)定10 min后再行缺血/再灌注操作;⑧Urantide 30 μg·kg－1+LY294002(PI3K/AKT 信號通路阻斷劑)組:在穿線穩(wěn)定后，舌下靜脈快速推注LY294002 0.3 mg·kg－1，5 min 后舌下靜脈快速推注 urantide 30 μg·kg－1，穩(wěn)定 10 min 后再行缺血/再灌注操作。

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 大鼠血清中SOD、NO活力以及 MDA含量的測定 SOD和NOS采用化學(xué)比色法測定，測定波長分別為550 nm和530 nm;MDA采用硫代巴比妥酸鹽法檢測;NO采用硝酸還原酶法測定，各操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.5.2 TUNEL法檢測大鼠心肌細(xì)胞凋亡 各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取心尖部位心肌組織放入4%甲醛溶液中固定。常規(guī)石蠟包埋，切片，用脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測凋亡細(xì)胞(測法遵照羅氏凋亡檢測試劑盒說明書)。從各組取5張石蠟切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 7.2)沖洗5 min，3次;蛋白酶K(20 mg·L－1)37℃ 消化 8 min，PBS 沖洗，3 次;3%H2O2室溫下處理5 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS沖洗，含0.1%TritonX-100的0.1%枸櫞酸溶液以去除細(xì)胞膜表面污物(冰上4 min)，PBS沖洗，3次;加50 μl TUNEL反應(yīng)混合液，包括脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶液，37℃ 孵育60 min，PBS沖洗，3次;加POD液37℃孵育30 min，PBS沖洗，二乙胺四乙酸(DAB)顯色。在400倍顯微鏡下，于缺血區(qū)邊緣隨機(jī)采集5個非重疊視野，檢測100個心肌細(xì)胞中TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。凋亡指數(shù)/%=(凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù))×100%。

1.5.3 免疫組化檢測大鼠心肌組織中Bcl-2和Bax的表達(dá)水平 石蠟切片用二甲苯和梯度酒精脫蠟至水后，蒸餾水沖洗，PBS(pH 7.4)浸泡切片5 min;3%過氧化氫室溫孵育5 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗3次;在切片上滴加10%正常山羊血清(PBS緩沖液稀釋)，放置在濕盒中，室溫孵育10～15 min，以封閉游離的結(jié)合位點(diǎn)，減少非特異性染色;甩去多余山羊血清，勿洗，滴加一抗(抗bcl-2和抗bax的多克隆抗體，用0.01 mol·L－1PBS緩沖液稀釋成1∶100)，4℃孵育過夜;PBS漂洗3次;滴加生物素標(biāo)記的二抗 (羊抗兔 lgG工作液)，37℃孵育30 min;PBS漂洗3次;滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育20 min;PBS漂洗3次;DAB顯色，在光學(xué)顯微鏡下控制顯色時間，鏡下觀察核中出現(xiàn)黃色顆粒及胞質(zhì)黃染后及時終止;自來水終止顯色、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片;陰性對照用PBS代替一抗，按上述步驟同步進(jìn)行。在高倍鏡下(×400)隨機(jī)選取心肌組織連續(xù)3個視野，采用形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(捷達(dá)科技)測量所要觀察區(qū)域內(nèi)免疫陽性細(xì)胞單位面積平均光密度。

Tab 1 Changes of segment ST(mv)of ECG by urantide treatment and its modification by CHE and LY294002 in myocardial I/R injury rats(±s，n=10)

Tab 1 Changes of segment ST(mv)of ECG by urantide treatment and its modification by CHE and LY294002 in myocardial I/R injury rats(±s，n=10)

△△ P＜0.01 vs sham;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model;#P＜0.05，##P＜0.01 vs 30 μg·kg－1urantide

Group Dose/kg－1Ischemia 5 min 30 min Reperfusion 5 min 30 min 60 min Sham － 0.04 ±0.01 0.03 ±0.02 0.03 ±0.01 0.04 ±0.03 0.03 ±0.01 Model － 0.18 ±0.04△△ 0.22 ±0.03△△ 0.20 ±0.05△△ 0.20 ±0.03△△ 0.18 ±0.04△△Urantide 3 μg 0.15 ±0.03 0.20 ±0.03 0.17 ±0.05 0.18 ±0.04 0.15 ±0.03 10 μg 0.10 ±0.02＊＊ 0.18 ±0.03* 0.15 ±0.05 0.16 ±0.04* 0.14 ±0.04 30 μg 0.08 ±0.03＊＊ 0.14 ±0.03＊＊ 0.12 ±0.03＊＊ 0.12 ±0.02＊＊ 0.12 ±0.03＊＊Ver 1.6 mg 0.06 ±0.02＊＊ 0.12 ±0.05＊＊ 0.13 ±0.03＊＊ 0.10 ±0.03＊＊ 0.12 ±0.03＊＊Urantide+CHE 30 μg+1 mg 0.17 ±0.03## 0.21 ±0.06# 0.19 ±0.06## 0.20 ±0.03## 0.18 ±0.03##Urantide+LY294002 30 μg+0.3 mg 0.20 ±0.04## 0.19 ±0.04# 0.21 ±0.05## 0.21 ±0.02## 0.19 ±0.04##

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心電圖結(jié)果 結(jié)果如Tab 1所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠在心肌缺血及再灌注時ST段抬高明顯，再灌注30 min時尤為明顯;與模型組比較，urantide(10，30 μg·kg－1)能明顯抑制缺血/再灌注大鼠心電圖中ST段的抬高，加快再灌后心臟功能的恢復(fù);陽性藥(Ver)也有類似的作用。而應(yīng)用了 PKC抑制劑 CHE和 PI3K/Akt抑制劑LY294002能取消urantide改善ECG的作用。

Tab 2 Serum SOD activitiy and MDA content by urantide treatment and its modification by CHE and LY294002 in myocardial I/R injury rats(±s，n=10)

Tab 2 Serum SOD activitiy and MDA content by urantide treatment and its modification by CHE and LY294002 in myocardial I/R injury rats(±s，n=10)

△△P＜0.01 vs sham;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model;#P＜0.05 vs urantide(30 μg·kg－1)

Group Dose/kg－1 SOD/U·ml－1 MDA/μmol·L －1 Sham － 180.28 ±5.15 2.28 ±0.96 Model － 145.24 ±19.28△△ 4.94 ±1.55△△Urantide 3μg 156.17 ±13.35* 3.97 ±0.89 10μg 164.65 ±16.17＊＊ 3.59 ±1.15 30μg 171.47 ±13.37＊＊ 3.40 ±1.14*Ver 1.6 mg 175.90 ±5.99＊＊ 3.33 ±0.88*Urantide+CHE 30 μg+1 mg 149.94 ±16.57# 4.42 ±0.90 Urantide+LY294002 30 μg+0.3 mg 148.22 ±19.26#4.04 ±0.95

2.2 各組大鼠血清中SOD活力和MDA含量的測定 結(jié)果如Tab 2所示，大鼠心肌缺血/再灌注模型組MDA含量明顯高于假手術(shù)組，SOD的活力明顯降低，與假手術(shù)組比較差異有顯著性(P＜0.01)。與模型組比較，urantide 3、10、30 μg·kg－1能升高SOD 活性，urantide 30 μg·kg－1能夠明顯減少血清中MDA的生成;而urantide+CHE組與urantide+LY294002組與模型組相比，對SOD活性與MDA含量影響不大。

Tab 3 Serum NO content and NOS activity by urantide treatment and its modification by CHE and LY294002 in myocardial I/R injury rats(±s，n=10)

Tab 3 Serum NO content and NOS activity by urantide treatment and its modification by CHE and LY294002 in myocardial I/R injury rats(±s，n=10)

△△P＜0.01 vs sham;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model;#P＜0.05，##P＜0.01 vs urantide(30 μg·kg－1)

Group Dose/kg－1 NO/μmol·L －1 NOS/U·ml －1 Sham － 57.43 ±16.83 16.80 ±1.88 Model － 27.13 ±4.86△△ 10.98 ±1.90△△Urantide 3 μg 28.86 ±3.70 11.53 ±3.93*10 μg 32.76 ±4.46 13.36 ±1.68＊＊30 μg 43.58 ±6.63＊＊ 15.40 ±3.38＊＊Ver 1.6 mg 51.52 ±8.76＊＊ 15.59 ±1.58＊＊Urantide+CHE 30 μg+1 mg 28.43 ±6.91## 11.51 ±1.31#Urantide+LY294002 30 μg+0.3 mg 30.30 ±8.80# 11.68 ±1.20#

2.3 各組大鼠血清中NOS活力和NO含量的測定

如Tab 3所示，與假手術(shù)組相比，模型組NO含量明顯減少，NOS活力明顯減低;Urantide 30 μg·kg－1及 Ver 1.6 mg·kg－1可增加血清中 NO 含量，urantide 3，10，30 μg·kg－1及 Ver 1.6 mg·kg－1均可提高血清中NOS活性。與模型組比較，在靜脈注射urantide 30 μg·kg－1之前分別給予阻斷劑 CHE 和LY294002均可以使urantide升高NOS活性和NO含量的作用消失。

Fig 1 Representative photomicrographs of in situ detection of TUNEL-positive nuclei by in vivo urantide treatment and its modification by CHE and LY294002(magnification，×400)

2.4 各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù) 由Fig 1可見TUNEL法標(biāo)記的凋亡心肌細(xì)胞，凋亡陽性細(xì)胞核被染成棕黃色或棕褐色，正常心肌細(xì)胞核被蘇木精復(fù)染成藍(lán)色。由Fig 2可見與假手術(shù)組的凋亡指數(shù)(9.29±3.44)%相比，模型組凋亡指數(shù)明顯升高為(43.54±3.16)%，urantide 3個劑量組均可以不同程度的降低缺血/再灌注大鼠的心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，在 urantide10 μg·kg－1和 urantide30 μg·kg－1兩個劑量組中，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)與模型組比較差異有顯著性(P＜0.01)。而urantide+CHE組與urantide+LY294002組的凋亡指數(shù)與urantide用藥組相比明顯升高，與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Fig 2 Effect of urantide treatment and its modification by CHEand LY294002 on I/R-induced apoptosis assayed by TUNEL

2.5 各組大鼠心肌組織中Bcl-2和Bax表達(dá)水平

免疫組化結(jié)果顯示，含Bcl-2或Bax蛋白的細(xì)胞漿著染成棕黃色。假手術(shù)組大鼠心肌組織Bcl-2蛋白表達(dá)明顯，而Bax蛋白表達(dá)較弱。而在缺血/再灌注組大鼠心肌組織中可見Bcl-2蛋白表達(dá)減弱，Bax蛋白表達(dá)則有顯著增加;Urantide 3、10、30 μg·kg－1組及陽性藥Ver可不同程度增強(qiáng)Bcl-2蛋白的表達(dá)，而減弱Bax的表達(dá);合用1 mg·kg－1CHE或0.3 mg·kg－1LY294002后，urantide對 Bax和 Bcl-2蛋白表達(dá)的作用明顯減弱。(見Fig 3，F(xiàn)ig 4)

圖像分析結(jié)果顯示，缺血/再灌注組大鼠心肌組織Bcl-2和Bax陽性細(xì)胞平均光密度與假手術(shù)組比較差異有顯著性(P＜0.01)。Urantide各用藥組及陽性藥Ver能夠增加Bcl-2蛋白表達(dá)，減少Bax蛋白表達(dá)，使Bcl-2/Bax的比值增大，表明urantide具有抗心肌細(xì)胞凋亡的作用。而CHE或LY294002能明顯抑制urantide對Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)和Bax表達(dá)減弱的作用(P＜0.05或P＜0.01)，urantide合用CHE或LY294002組中Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)與模型組相比差異無顯著性(P＞0.01)，表明urantide的這種抗凋亡作用可以被蛋白激酶C的阻斷劑CHE和PI3K/AKT信號通路特異性阻斷劑LY294002所阻斷。見Tab 4。

Fig 3 Effect of urantide on the Bax protein immunoreactivity cells in cardiomyocytes of I/R rats(×400，n=4)

Fig 4 Effect of urantide on the Bcl-2 protein immunoreactivity cells in cardiomyocytes of I/R rats(×400，n=4)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用的在體左冠狀動脈前降支結(jié)扎/松開術(shù)是經(jīng)典的心肌缺血/再灌注模型，具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。本研究采用的缺血30 min、再灌注90 min模型能較好的誘導(dǎo)心肌缺血/再灌注損傷［6］。

Tab 4 Effect of urantide on the mean optical density of Bcl-2 and Bax of myocardium in myocardial I/R rats( ± s，n=6)

Tab 4 Effect of urantide on the mean optical density of Bcl-2 and Bax of myocardium in myocardial I/R rats( ± s，n=6)

△△P＜0.01 vs sham;*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model;#P＜0.05，##P＜0.01 vs urantide(30 μg·kg－1)

Group Dose/kg－1Mean optical density Bcl-2 Bax Sham － 0.504 ±0.162 0.233 ±0.077 Model － 0.217 ±0.016△△ 0.728 ±0.199△△Urantide 3 μg 0.287 ±0.044 0.476 ±0.127*10 μg 0.317 ±0.077* 0.409 ±0.060＊＊30 μg 0.370 ±0.135* 0.286 ±0.036＊＊Ver 1.6 mg 0.314 ±0.068* 0.259 ±0.071＊＊Urantide+CHE 30 μg+1 mg 0.232 ±0.059# 0.557 ±0.073##Urantide+LY294002 30 μg+0.3 mg 0.220 ±0.099# 0.554 ±0.185##

心肌細(xì)胞凋亡在缺血/再灌注損傷中的作用長期以來受到關(guān)注，如何保護(hù)心肌細(xì)胞，減少凋亡細(xì)胞的數(shù)量，減小梗死周邊危險(xiǎn)區(qū)(area of risk)成為心血管領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)［7］。已知心肌缺血/再灌注期間的氧化應(yīng)激能夠誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡［8］，亦可降低細(xì)胞內(nèi)信號分子一氧化氮的生物利用度，從而抵消了一氧化氮的保護(hù)作用［9］。大量氧自由基的產(chǎn)生可導(dǎo)致心肌線粒體功能的不可逆損傷和心肌細(xì)胞死亡［10］。

PKC是一組具有單一肽鏈結(jié)構(gòu)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，廣泛參與細(xì)胞信息傳遞、分泌、離子通道調(diào)節(jié)、細(xì)胞增生、分化等一系列與生命現(xiàn)象相關(guān)過程。在心肌缺血預(yù)適應(yīng)的觸發(fā)階段，腺苷、緩激肽和阿片受體都被激活，盡管這3種受體從不同通路觸發(fā)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終均匯聚在PKC通路上?；罨腜KC通過磷酸化或耦合其他蛋白使A2b腺苷受體激活，從而進(jìn)一步活化 PI3K-Akt和 ERK信號通路［11］。

PI3K/Akt信號通路是膜受體信號向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要途徑，調(diào)節(jié)著細(xì)胞生長、凋亡及細(xì)胞一些重要基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)在某些條件下，激活PI3K/Akt信號通路可有效抑制低氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生［12］。

本研究表明urantide可以減少心肌缺血/再灌注大鼠體內(nèi)氧自由基的生成，增加NO含量，提高NOS活性。同時降低心肌細(xì)胞凋亡率，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)。而urantide的上述作用均可以被PI3K-Akt信號通路和PKC信號通路阻斷劑所逆轉(zhuǎn)。提示urantide可以通過激活PKC信號通路和PI3K/Akt信號通路，發(fā)揮抗心肌細(xì)胞脂質(zhì)過氧化作用，進(jìn)一步干預(yù)凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，減輕心肌缺血/再灌注損傷。而這兩條信號通路之間的相互作用，以及有無其他信號通路參與其中的作用，有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

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