量子共振檢測(cè)儀檢測(cè)抗乙型肝炎病毒藥物效價(jià)初探

安林勇 陳曉磊 張國(guó)鋒 栗瑛潔 陳靜

量子理論是二十世紀(jì)最偉大的科技突破之一，近幾年來(lái)，基于量子醫(yī)學(xué)的量子共振檢測(cè)儀（QRS）已廣泛應(yīng)用于臨床輔助診斷和研究，藥物效價(jià)檢測(cè)是其最具有代表性的功能之一。QRS應(yīng)用于中藥及抗生素效價(jià)的臨床研究已有報(bào)道[1-2]，但其應(yīng)用于抗病毒藥物效價(jià)檢測(cè)還未見(jiàn)報(bào)道。筆者開(kāi)展了用QRS檢測(cè)抗乙型肝炎病毒（HBV）藥物效價(jià)的初步研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年6月-2012年6月筆者所在醫(yī)院接受抗病毒治療的乙型肝炎肝患者52例，男36例，女16例；年齡18～65歲。將其按服用藥物不同分為四組，其中9例單服用拉米夫定（LAM），21例單服用阿德福韋酯（ADV），18例同時(shí)服用LAM和ADV，4例單獨(dú)服用恩替卡韋（ETV），口服藥物周期均大于96周。四組中HBV DNA>500 copies/ml病例分別為5例，5例，4例，0例；HBV DNA<500 copies/ml病例分別為4例，16例，14例，4例。健康對(duì)照組10例，男5例，女5例；年齡18～51歲（排除甲、乙、丙、丁、戊型肝炎，及HIV感染）。

1.2 儀器試劑及藥品 藥物效價(jià)檢測(cè)用重慶同康量子信息檢測(cè)儀，檢測(cè)范圍+1～+22，有效藥物效價(jià)范圍≥+8（由儀器說(shuō)明書(shū)提供），檢測(cè)數(shù)值越大說(shuō)明藥效越高。HBV DNA檢測(cè)用美國(guó)LightCyle熒光定量PCR檢測(cè)儀，試劑由上海科華生物有限公司提供，檢測(cè)范圍500～108 copies/mL，陰性參考值為<500 copies/mL；LAM（葛蘭素史克有限公司）每片劑量100 mg，ADV（葛蘭素史克有限公司）每片劑量10 mg，ETV（中美上海施貴寶制藥有限公司）每片劑量0.5 mg。

1.3 方法 受檢者手握金屬傳感器，將抗病毒藥物L(fēng)AM，ADV，LAM+ADV，ETV，其中一片（LAM+ADV，各加一片）放在檢測(cè)盤(pán)上，選擇N060“乙肝病毒”代碼測(cè)正值，測(cè)量結(jié)果為該抗病毒藥物效價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

38例HBV DNA陰性乙肝患者的量子藥物效價(jià)檢測(cè)值分別與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；14例HBV DNA陽(yáng)性乙肝患者的量子藥物效價(jià)檢測(cè)值，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。未發(fā)現(xiàn)恩替卡韋耐藥病例，且量子效價(jià)檢測(cè)值最高（11.00±1.83），進(jìn)而說(shuō)明了恩替卡韋具有更高的耐藥基因屏障。詳見(jiàn)表1。

表1 52例乙肝患者量子藥物效價(jià)檢測(cè)值（±s）

表1 52例乙肝患者量子藥物效價(jià)檢測(cè)值（±s）

*與對(duì)照組比較P<0.01；**與對(duì)照組比較P>0.05

組別 LAM ADV LAM+ADV ETV對(duì)照組（n=10） 5.50±1.08 5.60±1.34 6.00 ±1.05 6.10 ±1.10 HBV DNA 陰性組（n=38） 8.75±1.01* 9.44±0.89* 9.71±1.20* 11.00±1.83*HBV DNA陽(yáng)性組（n=14） 5.80±0.84** 6.00±0.71** 6.25±0.96** -

3 討論

1958年，德國(guó)的Voll醫(yī)生發(fā)明了最初形態(tài)的QRS（EAV）用于臨床診斷和治療，取得了很好的效果，之后在儀器中加入了藥物效價(jià)檢測(cè)功能。筆者根據(jù)現(xiàn)有的研究文獻(xiàn)，推斷藥物敏感試驗(yàn)可以利用電磁波檢測(cè)其共鳴程度原理，從而作出判斷。至今，藥物效價(jià)檢測(cè)成為這類儀器最具有代表性的功能。本研究表明，HBV DNA陽(yáng)性組與對(duì)照組比較量子效價(jià)值無(wú)明顯差別，而HBV DNA陰性組量子效價(jià)值明顯增高，與HBV DNA檢測(cè)具有一致性且呈反相關(guān)。本研究中，未發(fā)現(xiàn)恩替卡韋耐藥病例，且量子效價(jià)檢測(cè)值最高，進(jìn)而說(shuō)明了恩替卡韋具有更高的耐藥基因屏障，與相關(guān)報(bào)道相一致[3]。

HBV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制繁殖，致敏T淋巴細(xì)胞在殺傷靶細(xì)胞的同時(shí)造成肝細(xì)胞損傷，因此，選擇合理的治療方案和有效的抗病毒藥物是防止病情加劇的基本條件。目前在我國(guó)獲得批準(zhǔn)并應(yīng)用臨床的口服抗乙肝病毒藥物主要有核苷（酸）類似物，由于這些藥物不能清除病毒，只能抑制其復(fù)制，因此要長(zhǎng)期服用。服用過(guò)程中，病毒可能出現(xiàn)基因變異，導(dǎo)致耐藥[4]。拉米夫定是一種L型核苷類藥物，是第一個(gè)批準(zhǔn)用于乙肝治療的口服藥。目前認(rèn)為，HBV對(duì)拉米夫定耐藥性的產(chǎn)生與HBV P基因變異有關(guān)，并且HBV P基因變異是多位點(diǎn)的，以C區(qū)酪氨酸-蛋氨酸-天門(mén)冬氨酸-天門(mén)冬氨酸（YMDD）基序的變異最為重要。YMDD位于C區(qū)第549-552aa（即Y549M550D551D552），YMDD中蛋氨酸（M）被纈氨酸（V）或異亮氨酸（I）替代，變成YVDD或YIDD，新的命名法為rtM204V/I（C區(qū)）±rtL180M（B區(qū)），這兩種變異均導(dǎo)致拉米夫定與HBV DNA聚合酶的親和力下降或消失，HBV對(duì)其敏感性均降低超過(guò)1000倍。目前報(bào)道發(fā)現(xiàn)的與拉米夫定相關(guān)的主要耐藥突變有rtM204V、rtM204I和rtL180M[5]。阿德福韋酯是阿德福韋的親脂性口服前體，其腸道吸收率和生物利用度都較高，口服后在非特異性酯酶水解作用下迅速轉(zhuǎn)化為阿德福韋。阿德福韋是一種無(wú)環(huán)單磷酸脫氧腺苷類似物在體內(nèi)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為有活性的雙磷酸阿德福韋而起抗病毒作用[6]。阿德福韋酯耐藥變異位點(diǎn)主要存在于聚合酶逆轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域（RT區(qū)）的D區(qū)和B區(qū)。D區(qū)耐藥突變主要是rtN236T和rtI233V，可引起阿德福韋酯敏感性下降，單對(duì)拉米夫定仍然敏感；B區(qū)耐藥變異有rtA181T/V，對(duì)阿德福韋酯耐藥，且對(duì)拉米夫定敏感性也明顯下降[7]。阿德福韋酯是目前國(guó)內(nèi)上市的口服抗HBV藥物中唯一一種核苷酸類似物，也是唯一一種與其他抗HBV藥物沒(méi)有交叉耐藥位點(diǎn)的藥物。拉米夫定與阿德福韋酯聯(lián)合治療可持續(xù)抑制病毒，起效迅速，長(zhǎng)期耐藥率低，HBeAg血清轉(zhuǎn)換率高[8]。但單藥還是聯(lián)合孰優(yōu)孰劣尚無(wú)定論，本研究可以對(duì)此有一定的參考價(jià)值。恩替卡韋為鳥(niǎo)嘌呤核苷酸類似物，能選擇抑制HBV DNA多聚酶的啟動(dòng)，進(jìn)而抑制前基因組mRNA逆轉(zhuǎn)錄負(fù)鏈及正鏈的合成，具有很強(qiáng)的抗病毒作用，耐藥率極低[9]。本研究中未發(fā)現(xiàn)恩替卡韋耐藥病例。

用QRS檢測(cè)抗HBV藥物效價(jià)，不僅能避免體內(nèi)藥敏實(shí)驗(yàn)，還能根據(jù)量子藥物效價(jià)值的高低合理篩選藥物，這樣即避免了無(wú)效藥物的毒副作用，又不會(huì)耽誤疾病治療的最佳時(shí)機(jī)[10]。本研究還具有以下特點(diǎn)：（1）能動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)抗HBV藥物效價(jià)衰減程度，在藥物效價(jià)降至一定閾值時(shí)，密切觀察肝功能及HBV DNA檢測(cè)結(jié)果，提前做好換藥銜接，從而避免病情進(jìn)一步惡化。（2）可以同時(shí)檢測(cè)兩種或兩種以上抗HBV藥物的效價(jià)，進(jìn)而觀察它們的相互作用，便于聯(lián)合用藥治療。（3）QRS可以用于HBV的體外藥敏試驗(yàn)，但它反映的不是孤立的體外環(huán)境，而是體內(nèi)復(fù)雜的整體環(huán)境。

綜上所述，應(yīng)用QRS檢測(cè)抗HBV的藥物效價(jià)，具有一定的準(zhǔn)確性、科學(xué)性和先進(jìn)性，且操作簡(jiǎn)單，成本低廉、無(wú)創(chuàng)傷，無(wú)交叉感染危險(xiǎn)，適合各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也初步證明了這一推定，但由于標(biāo)本量還不夠大，所以有待進(jìn)一步的深入研究論證。相信隨著科技的進(jìn)步，會(huì)帶動(dòng)量子醫(yī)學(xué)不斷地向前發(fā)展，量子醫(yī)學(xué)在藥物敏感實(shí)驗(yàn)研究領(lǐng)域中定會(huì)開(kāi)辟出一條嶄新的途徑。

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