骨橋蛋白與基質(zhì)金屬蛋白酶9在子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)

張巖，王雪飛，徐楓，那飛，趙巍

（中國醫(yī)科大學(xué)1.附屬第四醫(yī)院婦科，沈陽110032；2.第95期臨床醫(yī)療系，沈陽110001）

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種分泌型磷酸化糖蛋白，在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用［1］，國外有研究報(bào)道OPN在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)［2］?；|(zhì)金屬蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9，MMP9）能水解基膜和細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ型膠原，與腫瘤的演進(jìn)相關(guān)。目前研究認(rèn)為OPN可能作為上游基因，使腫瘤細(xì)胞表達(dá)MMP9增高。本研究檢測OPN和MMP9在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)情況，探討OPN和MMP9與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系及其在子宮內(nèi)膜腺癌診療及預(yù)后判斷等方面的潛在價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象：2003年12月至2011年2月于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦科就診的患者因診治原因獲取子宮內(nèi)膜標(biāo)本112例，均經(jīng)病理學(xué)診斷證實(shí)。其中正常增殖期子宮內(nèi)膜組織（normal endometrium，NE）15例，不典型增生子宮內(nèi)膜組織（atypical hyperplasia，AH）22例，子宮內(nèi)膜腺癌（endometrial adenocarcinoma，EC）75例。所有患者獲取標(biāo)本前均未接受過放、化療或激素治療。子宮內(nèi)膜腺癌患者根據(jù)2000年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）手術(shù)病理分期，Ⅰ～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期30例；組織學(xué)分級(jí)，G128例，G221例，G326例。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑：鼠抗人OPN單克隆抗體及鼠抗人MMP9單克隆抗體、DAB顯色液試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法：所有標(biāo)本均在同一條件下采用免疫組化SP法進(jìn)行染色。用PBS替代一抗為陰性對(duì)照，用已知陽性片為陽性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判定：OPN和MMP9染色陽性定位主要在細(xì)胞質(zhì)，染色為棕黃色。采用雙盲法：隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍鏡視野共計(jì)1000個(gè)腺上皮及腫瘤細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)。評(píng)分方法：⑴按細(xì)胞顯色有無及深淺對(duì)染色強(qiáng)度評(píng)分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；⑵按陽性細(xì)胞所占的百分比評(píng)分：0分為陰性，1分為陽性細(xì)胞≤10%，2分為陽性細(xì)胞11%～50%，3分為陽性細(xì)胞51%～75%，4分為陽性細(xì)胞≥75%。每例染色積分為兩種評(píng)分相乘，進(jìn)行半定量分析，積分≥3為免疫反應(yīng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 OPN、MMP9在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

OPN、MMP9在正常增殖期子宮內(nèi)膜組織中為陰性或弱陽表達(dá)，在不典型增生組織及子宮內(nèi)膜腺癌組織中表達(dá)增加明顯（圖1、圖2）。本研究在正常增殖期子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜腺癌中，OPN的陽性表達(dá)率分別為26.67%、72.73%和80.00%，MMP9的陽性表達(dá)率為20.00%、63.64%和70.67%。2者在不典型增生子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)均明顯高于正常增殖期子宮內(nèi)膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 OPN、MMP9與子宮內(nèi)膜腺癌臨床病理特征的關(guān)系

OPN、MMP9均與子宮內(nèi)膜腺癌組織分級(jí)及肌層浸潤程度相關(guān)，其中低分化腺癌中表達(dá)明顯高于高分化腺癌（P<0.05）。OPN的表達(dá)與臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)（P<0.05），MMP9的表達(dá)在臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移方面差異不顯著（P>0.05）。見表1。

2.3 OPN與MMP9子宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)的相關(guān)分析

OPN和MMP9在子宮內(nèi)膜腺癌中均呈高表達(dá)，二者的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.287 9，P<0.05）。

3 討論

OPN 是細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）中的一種重要的功能性非膠原蛋白。在腫瘤的發(fā)展過程中，OPN通過其分子N端的精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（RGD）結(jié)構(gòu)域，經(jīng)磷酸化后可以和腫瘤細(xì)胞表面的整合素受體結(jié)合；C端與黏附分子CD44結(jié)合，能強(qiáng)化腫瘤細(xì)胞的黏附、趨化和遷移，從而促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。此外，OPN還可促進(jìn)腫瘤血管生成、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起促進(jìn)作用。OPN在惡性腫瘤組織及血清中的過度表達(dá)，與多種腫瘤的發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)［3～4］。本研究結(jié)果表明，OPN在不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜腺癌中陽性表達(dá)率均明顯高于正常對(duì)照組（P<0.05），因此推測OPN參與子宮內(nèi)膜細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程。同時(shí)OPN的陽性表達(dá)與腫瘤的組織分級(jí)、肌層浸潤、臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），證實(shí)了OPN與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)。

MMP9以酶原形式分泌，被激活后可降解腫瘤表面ECM中Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向周圍組織侵襲及侵入淋巴及血管向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。目前通過分子生物學(xué)等研究認(rèn)為MMP9參與了腫瘤發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移的多個(gè)階段［5］。王香平等［6］檢測發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌患者血清中MMP9活性形式的表達(dá)高于對(duì)照組，而其酶原形式的表達(dá)沒有差異，表明MMP9活性形式在子宮內(nèi)膜癌的組織中起主要作用。本研究顯示MMP9在子宮內(nèi)膜不典型增生及子宮內(nèi)膜腺癌組織中高表達(dá)，并與子宮內(nèi)膜腺癌的組織分級(jí)及肌層侵潤正相關(guān)（P<0.05）?？梢娫趦?nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中MMP9的陽性表達(dá)及酶原激活增加，MMP9的高表達(dá)預(yù)示著內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為惡劣，預(yù)后差。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)OPN、MMP9在子宮內(nèi)膜病變及內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示2者在子宮內(nèi)膜癌變過程中有相關(guān)性。在內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程中OPN可通過激活絲裂原激活的蛋白激酶（motigen-activated protein kinase，MAPK）/核因子 κB抑制劑激酶（I kappaB alpha kinase，IKK）信號(hào)通路，使腫瘤細(xì)胞分泌MMP9等基質(zhì)金屬蛋白酶及尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）等［1］，促進(jìn)細(xì)胞的黏附和遷移，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移［7］。體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)OPN可通過ERK/IKKα/β途徑激活核因子誘導(dǎo)激酶而活化核轉(zhuǎn)錄因子κB，增強(qiáng)其調(diào)控uPA分泌和uPA依賴性蛋白MMP9的活化［8］。同時(shí)MMP9可作用于OPN分子中的MMP的酶切位點(diǎn)，正向調(diào)節(jié)OPN與細(xì)胞表面的整合素結(jié)合。此外2者均可促進(jìn)腫瘤血管生成［9，10］，參與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，有關(guān)2者在此方面是否具有關(guān)聯(lián)性及協(xié)同作用，有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究認(rèn)為OPN和MMP9與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系，能夠反映腫瘤的惡性程度，通過對(duì)2者的檢測將有助于判斷患者的預(yù)后，同時(shí)也為臨床診治子宮內(nèi)膜癌提供依據(jù)。

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