耐高溫耐酸耐酒精酵母的篩選與鑒定

娜日蘇,蘇亞拉圖,高鳳芹

(1.內(nèi)蒙古師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010022； 2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010； 3.農(nóng)業(yè)部草原資源與生態(tài)重點開放試驗室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

后生物生產(chǎn)層

耐高溫耐酸耐酒精酵母的篩選與鑒定

娜日蘇1,2,蘇亞拉圖1,高鳳芹2,3

(1.內(nèi)蒙古師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010022； 2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010； 3.農(nóng)業(yè)部草原資源與生態(tài)重點開放試驗室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

從不同樣品中經(jīng)富集、分離、純化和篩選，得到對高溫、酸度、酒精耐受性較好的4株酵母菌，分別編號為JM-1、JM-2、JM-3和JM-4。對4株酵母菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)和生理學(xué)特征鑒定以及26S rDNA序列分析后得出，4個菌株的最適五碳糖濃度為12 g·L-1，最適生長酒精度為14%(體積分?jǐn)?shù))，最適生長pH在2.5～3.0，最適生長溫度為37 ℃；經(jīng)26S rDNA序列分析鑒定出菌株JM-1、JM-2、JM-4屬于Meyerozyma屬，而菌株JM-3屬于Pichia屬；以上篩選到的菌種在耐高溫、耐酸和耐酒精度中表現(xiàn)出良好的生長性能，具有一定的研究意義。

酵母菌；篩選；鑒定

近年來，隨著能源安全和環(huán)境污染問題的日益加重，生物燃料乙醇以其燃燒更安全、CO2排放量低、具可持續(xù)性等優(yōu)良特性，被譽為21世紀(jì)的“綠色能源”，它的開發(fā)利用受到了世界各國的普遍關(guān)注和重視。目前，解決世界能源危機(jī)的一條理想的途徑是將甘蔗(Saccharumofficinarum)、玉米(Zeamays)、木薯(Manihotesculenta)和纖維類廢棄物等轉(zhuǎn)化為燃料乙醇，而提高燃料乙醇轉(zhuǎn)化效率的關(guān)鍵在于篩選到優(yōu)良菌種。微生物發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時，菌株(一般為酵母)耐高溫、耐乙醇和耐酸等特性的高低直接影響生產(chǎn)效率和原料利用率[1]。高溫通常會引起酵母細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸、磷脂、麥角固醇等成分的變化，從而影響細(xì)胞本身正常生理活動[2]。而高濃度乙醇對酵母生長繁殖有延滯作用，會抑制酵母菌的發(fā)酵活性。因此，酵母的發(fā)酵能力在很大程度上取決于它們自身對乙醇耐受力的大小[3]。同時乙醇發(fā)酵也容易被一些不耐酸微生物污染，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。因此，生產(chǎn)中需要加強耐高溫耐酸耐酒精酵母的篩選。除此之外發(fā)酵菌種對五碳糖的利用和發(fā)酵能力也非常重要，因為纖維素原料經(jīng)最終的降解得到的可發(fā)酵糖的成分是纖維素和半纖維素，而最終獲得的單體糖類有五碳糖和六碳糖，其中五碳糖主要有阿拉伯糖和木糖，六碳糖主要有甘露糖和葡萄糖[4]。纖維素類物質(zhì)中大多含有木質(zhì)素和半纖維素，在一般情況下，原料預(yù)處理過程中絕大部分都會被除去，但半纖維素中降解的木糖等戊糖仍存留在反應(yīng)液中，且當(dāng)濃度達(dá)到5%時，木糖對纖維素酶的抑制率就可達(dá)10%[5]。如要消除木糖抑制，最好的辦法是利用能轉(zhuǎn)化木糖為乙醇的酵母菌株，例如:管囊酵母(Pachysolentannophilus)，假絲酵母 (Candidatropicalis)等[6-7]，而且將能利用葡萄糖發(fā)酵乙醇的酵母和利用木糖發(fā)酵乙醇的酵母進(jìn)行混合發(fā)酵可提高乙醇產(chǎn)率30%～38%[5]。本試驗從土壤、污水和微腐爛水果等不同樣品中篩選分離到具有較強耐高溫耐酸的酵母菌，并以這幾個菌為出發(fā)菌株，初步研究了一些發(fā)酵特性，為下一步的相關(guān)研究提供有效依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1樣品來源 樣品采集于內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市酒廠酒槽廢液及就近地的土壤、臨河市藥廠廢棄液及就近地的土壤和呼和浩特市蔬菜市場的微腐爛水果。

1.1.2培養(yǎng)基

富集培養(yǎng)基：YPD液體培養(yǎng)基，酵母提取物10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 000 mL，自然pH。

平板分離培養(yǎng)基：YPD瓊脂；YPX培養(yǎng)基，酵母提取物10 g、蛋白胨20 g、木糖20 g、蒸餾水1 000 mL，自然pH。

初選培養(yǎng)基：2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)上層培養(yǎng)基，TTC 0.5 g、蒸餾水1 000 mL、葡萄糖5 g、瓊脂18 g；TTC下層培養(yǎng)基，葡萄糖10 g、蛋白胨2 g、KH2PO41 g、酵母膏1.5 g、MgSO4·7H2O 0.4 g、瓊脂30 g、蒸餾水1 000 mL，pH值5.5～5.7；保存液為脫脂奶粉10 g、蔗糖1 g、100 mL蒸餾水。

1.2試驗方法

1.2.1酵母菌的分離和純化

土壤樣品：稱取土壤樣品5 g加入到45 mL無菌水中，在37 ℃ 、130 r·min-1下， 震蕩30 min。取不同稀釋度的懸液20 μL，涂布于分離純化培養(yǎng)基中，在37 ℃下培養(yǎng)48 h。待長出菌落后，挑選具有典型酵母菌菌落特征的菌落進(jìn)行鏡檢，確認(rèn)為酵母菌后進(jìn)一步進(jìn)行劃線分離，直至得到純種。

污水樣品：取5 mL污水樣品加到45 mL無菌水中，在37 ℃ 、130 r·min-1下， 震蕩30 min。其余處理步驟同土壤樣品。

水果樣品：稱取微腐爛水果表面果肉樣品5 g 樣品加入到45 mL 已滅菌的富集培養(yǎng)基中，置于37 ℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。其余處理步驟同土壤樣品。

1.2.2菌株的篩選

第1步：將分離到的酵母菌株分別涂布于YPX平板，在45 ℃下，培養(yǎng)48 h。選出生長相對較快、菌落較大的酵母菌進(jìn)行下一步篩選。

第2步：將上一步分離得到的酵母菌株分別接種到將pH已調(diào)為2.0的液體YPD培養(yǎng)基里，37 ℃培養(yǎng)72 h，選出生長相對較快、菌落較大的酵母菌。

第3步：將以上兩步篩選到的菌株在YPD固體培養(yǎng)基上37 ℃培養(yǎng)48 h后轉(zhuǎn)接到TTC下層培養(yǎng)基上，等長出菌落后覆蓋上一層TTC顯色劑，TTC顯現(xiàn)不同顏色，產(chǎn)乙醇能力強的酵母菌會顯現(xiàn)深紅色，次之顯粉紅色，微紅色或者不顯色的為野生酵母菌[8]。

第4步：采用杜氏管發(fā)酵法，將篩選到的酵母菌接種于液體YPD培養(yǎng)基中，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h后，測定酵母菌株產(chǎn)氣泡的快慢及在規(guī)定時間內(nèi)產(chǎn)氣泡的多少，比較各株酵母菌的起酵能力及發(fā)酵能力，從而篩選出發(fā)酵性能優(yōu)良的酵母菌[9]。

1.2.3發(fā)酵特性的測定

高溫試驗：經(jīng)復(fù)選出的酵母接入液體YPD培養(yǎng)基中，分別置于20、25、30、35、40和45 ℃恒溫培養(yǎng)48 h，以初始培養(yǎng)基為對照，測不同溫度下酵母菌的OD600與發(fā)酵力。

耐酒精試驗：將復(fù)選出的酵母菌接種到酒精濃度已分別調(diào)為8%、10%、12%、14%、16%、18% (體積比)的液體YPD培養(yǎng)基中，37 ℃ 培養(yǎng)72 h，測不同酒精度下酵母菌的OD600和發(fā)酵力。

耐酸試驗：將篩選到的酵母菌接種到pH已分別調(diào)為1.5、2.0、2.5、3.0和3.5的液體YPD培養(yǎng)基中，37 ℃ 培養(yǎng)72 d，測定不同pH條件下的酵母菌OD600和發(fā)酵力。

耐五碳糖試驗：將篩選到的酵母菌接種到不同五碳糖濃度(4、8、12、16和20 g·L-1)的液體YPD培養(yǎng)基中，即37 ℃ 培養(yǎng)48 h后測值。

1.2.4發(fā)酵速度的測定 采用杜氏管發(fā)酵法將活化后的酵母菌接到液體YPD培養(yǎng)基，于30 ℃，130 r·min-1搖床培養(yǎng)，每隔2 h觀察記錄氣泡的產(chǎn)生時間和大小，最后記錄下氣泡充滿小管的時間[10]。

1.2.5生長曲線測定 將活化好的酵母菌接種于液體YPD培養(yǎng)基中，在一定溫度下，200 r·min-1搖床培養(yǎng)，每隔2 h取樣一次，用未接種的液體YPD作空白對照，于600 nm測OD值，以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，繪制生長曲線[11]。

1.2.6菌株分子生物學(xué)鑒定 利用酵母菌基因組DNA提取試劑盒(北京天根生物科技公司)提取酵母菌的DNA，對酵母菌26S rDNA基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物利用瓊脂糖凝膠電泳檢測后，送至上海尼桑生物科技有限公司進(jìn)行測序。測序結(jié)果用BLAST軟件與GenBank中相關(guān)種屬的26S rDNA序列進(jìn)行比對， 用DNAMANV4.0軟件的Multiple Sequence Alignment進(jìn)行26S rDNA同源性分析，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。以同源性大于99%為種的分界閾值將待測的菌株鑒定到種[12]。

引物序列為NL1：5′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′和NL4：5′-GGTCCGTGTTTCAAGA-CGG-3′[13](由上海尼桑生物科技有限公司合成)。PCR反應(yīng)體系(50 μL)為：2×Tap PCR MasterMix(購自天根生化科技有限公司)25 μL，引物NL1和NL4各3 μL，加入酵母菌DNA模板2 μL于反應(yīng)體系中混合，加ddH2O補足至50 μL。PCR 擴(kuò)增條件[14]為： 94 ℃預(yù)變性10 min，94 ℃變性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸2 min，33個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。

2 結(jié)果與分析

2.1酵母菌的分離、純化與篩選 通過分離和純化，從不同樣品中初步分離得到128株酵母菌。再通過第1步的篩選得到82株酵母菌，即這些酵母菌可在45 ℃下，在五碳糖培養(yǎng)基上生長；經(jīng)第2步篩選得到24株酵母菌，即這些酵母菌可在pH為2.0的情況下生長；通過第3步篩選得到14株酵母菌，即這些菌在TTC培養(yǎng)基上顯深紅色；再經(jīng)后一步篩選得到了綜合性能最好的4株酵母菌，即這些菌的耐高溫耐酸產(chǎn)酒精能力較好，其形態(tài)特征如表1和圖1所示。

表1 耐高溫耐酸酵母菌的初選結(jié)果Table 1 The primary election results of high temperature resistant acid yeast

圖1 菌株的顯微照片F(xiàn)ig.1 The microphotograph of four strains

2.2酵母菌發(fā)酵特性的測定 通過分離、純化和篩選，最終得到4株耐高溫耐酸產(chǎn)酒精且發(fā)酵力較好的酵母菌。鑒于酵母菌的耐酸性、耐高溫性和對酒精的耐受性等特性對實際的纖維素發(fā)酵產(chǎn)乙醇等不同行業(yè)中的重要影響，進(jìn)一步測定了篩選到的4個菌株的相關(guān)發(fā)酵特性(圖2-圖5)。

圖2 五碳糖對酵母菌的影響 Fig.2 Effects of five-carbon sugar on cell growth

圖3 酒精對酵母菌的影響 Fig.3 Effects of alcohol on cell growth

圖4 pH值對酵母菌的影響Fig.4 Effects of pH on cell growth

圖5 溫度對酵母菌的影響Fig.5 Effects of temperature on cell growth

2.2.1初始糖濃度對酵母生長的影響 提高纖維素物質(zhì)轉(zhuǎn)化為乙醇的效率對半纖維素的利用是十分重要的[15-17]。半纖維素水解后的主要成分為木糖，一般的酒精酵母都不能直接發(fā)酵木糖生成酒精，但自然界中有包括酵母菌在內(nèi)的許多微生物可以代謝木糖生成酒精，且利用基因工程技術(shù)對酒精酵母進(jìn)行遺傳改造后使其同時具備發(fā)酵葡萄糖和木糖生成酒精的研究也已取得了重要進(jìn)展[18]。所以本研究首先將酵母菌接種到五碳糖YPX培養(yǎng)基中，其生長情況如圖2所示，即將酵母菌接種到含不同木糖濃度(4～20 g·L-1) 的液體YPX培養(yǎng)基中后，菌JM-4的生長受不同糖濃度的影響最小，耐糖性相對較好，而菌JM-1和菌JM-2在糖濃度高于8 g·L-1的情況下生長受到明顯的影響，生長有明顯的下降趨勢；菌JM-4隨糖濃度增高，OD600值增大，但是，當(dāng)糖濃度在16 g·L-1以上時出現(xiàn)抑制作用。這是因為高糖濃度下，滲透壓大，對酵母造成傷害。菌JM-1和菌JM-2初始糖濃度在12 g·L-1時生長明顯受抑制，4個菌株中菌JM-3在糖濃度12 g·L-1時耐糖性相對最好。

2.2.2酒精度對酵母菌生長的影響 將酵母菌接種到含不同酒精度(8%～16%)的YPD培養(yǎng)基中后(圖3)，4個菌株的最適生長酒精度為14%，酒精度大于14%時4個菌株的生長都受到明顯的抑制，酒精對酵母菌本身具有一定的毒性，當(dāng)達(dá)到一定的濃度時，就會抑制酵母菌的生長、細(xì)胞發(fā)育和酒精發(fā)酵的能力[19]。在酒精度大于14%時，生長明顯受到抑制的菌株為菌JM-3，酒精度小于14%時，在不同酒精度下生長情況最好的為JM-3，其次為菌JM-1和菌JM-4，菌JM-2生長情況最差。

2.2.3pH值對酵母菌生長的影響 酵母菌的正常生長pH值在4.5～5.5，但是較低的pH值可抑制雜菌的生長，因此篩選到耐酸的菌種對于發(fā)酵工藝來講有很大的意義[20]。出于此考慮將酵母菌接種到不同酸度(1.5～3.5) 的YPD培養(yǎng)基中后(圖4),菌JM-3和菌JM-4的耐酸性較好，而菌JM-1和菌JM-2的耐酸性較差。菌JM-3和菌JM-4在pH小于2.0時生長情況很差，pH大于2.0后生長有明顯改善，而菌JM-1和菌JM-2在pH為2.5～3.5時生長情況一直很差。

2.2.4高溫對酵母菌生長的影響 在低溫范圍內(nèi)，溫度越高，酶反應(yīng)越快，酵母菌的生長代謝加快，乙醇會提前生成。當(dāng)溫度升高到一定程度時，繼續(xù)升溫則酶失活增快，表現(xiàn)出酵母菌易衰老、發(fā)酵周期變短，從而影響發(fā)酵乙醇的產(chǎn)量[21]。將酵母菌接種到Y(jié)PD培養(yǎng)基中，在不同溫度的處理下，4個菌株的最適生長溫度在37 ℃左右，高于37 ℃ 4個菌株的生長都有所降低，且除了菌JM-3其他3個菌的生長都明顯降低，所以菌JM-3的耐高溫性相對最好，菌JM-2的耐高溫性最差(圖5)。

2.2.5菌株的發(fā)酵速率 菌JM-1，接種后20 h開始發(fā)酵，27 h后氣泡充滿整個杜氏管；菌JM-2，接種后26 h開始發(fā)酵，38 h后氣泡充滿整個杜氏管；菌JM-3，接種后16 h開始發(fā)酵，22 h后氣泡充滿整個杜氏管；菌JM-4，接種后14 h開始發(fā)酵，27 h后氣泡充滿整個杜氏管；從以上分析可初步得出，菌JM-2發(fā)酵性能相對最差，發(fā)酵周期最短的菌為JM-3，其次是菌JM-1，分別為4 h和7 h。

2.2.6菌株的生長曲線測定 菌JM-1的細(xì)胞繁殖速度較快，有明顯的對數(shù)生長期，且生長旺盛(圖6)；菌株JM-4雖有對數(shù)生長期，22 h時OD值最大，即菌體數(shù)最多，但22 h后OD值下降。而菌JM-2和菌JM-3的生長曲線呈現(xiàn)出不規(guī)律性，菌體細(xì)胞的繁殖速度不均勻。因此，菌株JM-1生長較快，繁殖力較強，使得酵母菌接入發(fā)酵料后能迅速增殖，很快能達(dá)到主發(fā)酵期，從而迅速發(fā)酵，縮短發(fā)酵時間，減少被雜菌感染的機(jī)率。

2.3菌株的分子鑒定 對4株酵母菌基因組DNA提取和26S rDNA PCR 擴(kuò)增，目的片段長度約600 bp。從瓊脂糖電泳檢測圖片的相應(yīng)亮度的條帶可看出菌株JM-3和JM-4有比較亮的目的條帶，菌株JM-1的目的條帶較模糊，而菌株JM-2除了一個較模糊的目的條帶外還有兩條較模糊的特異性條帶(圖7)。將PCR目的片段回收送上海尼桑生物科技有限公司測序，使用NCBI網(wǎng)站Blast在線軟件程序分析相似性，最終鑒定出目的菌株(表2)。

采用軟件Mega4.0構(gòu)建了包括4株試驗菌與相關(guān)菌種模式菌株在內(nèi)的26S rDNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹(圖8)，系統(tǒng)發(fā)育樹Caenorhabditiselegans菌株26S rDNA 序列為外群。基于26S rDNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖8)表明， JM-3以較高的置信度與P.kudriavzevii聚為一類，為同一物種； JM-1、JM-2和JM-4與M.guilliermondii和M.caribbica以較高的置信度聚為一類，其同源性都為100%，所以可能為M.guilliermondii或者M(jìn).caribbica。對于菌株JM-1、JM-2和JM-4的鑒定，需要更為細(xì)致的區(qū)分。

圖6 4個菌株的生長曲線圖Fig.6 The growth curve of four strains

圖7 膠回收前電泳圖Fig.7 Electrophoretogram before gel reclamation

編號Code序列長度Size/bp參考菌株Therelatedmembersofthefamilyyeast最大同源性Identity/%序列注冊號GeneBankNo.JM-1615Meyerozymaguilliermondii;Meyerozymacaribbica100FJ432597JM-2615Meyerozymaguilliermondii;Meyerozymacaribbica100FJ432597JM-3600Pichiakudriavzevii100FJ919397JM-4616Meyerozymaguilliermondii;Meyerozymacaribbica99FJ432597

圖8 分離菌株26S rDNA序列系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.8 Phylogenetic tree of 26S rDNA sequences of four strains

3 討論

3.1酵母菌的篩選與鑒定 本試驗初步分離到128株酵母菌，其中從土壤中分離到89株酵母菌，從污水中分離到33 株酵母菌，從微腐爛水果中分離到酵母菌6株。考慮到發(fā)酵工業(yè)用的發(fā)酵菌株的耐高溫耐酸性的重要性，本試驗是在45 ℃下，耐五碳糖培養(yǎng)基上初步篩選得到了82株菌株，又進(jìn)一步在低酸(pH=2.0)環(huán)境下篩得選到27株酵母菌，最終通過產(chǎn)酒精能力和發(fā)酵力的比較篩選出了較好的4個菌株，即菌株JM-1、JM-2、JM-3和JM-4；通過26S rDNA序列測定和系統(tǒng)發(fā)育分析后，對以上4個菌株進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定，其結(jié)果是，菌株JM-1、JM-2和JM-4屬于Meyerozyma屬，而菌株JM-3屬于Pichia屬。

3.2酵母菌的發(fā)酵特性研究 傳統(tǒng)的釀酒酵母乙醇發(fā)酵最適溫度范圍在28～33 ℃，一般不會超過36 ℃，應(yīng)用耐高溫酵母生產(chǎn)乙醇可節(jié)約能源、提高出酒率、縮短發(fā)酵周期和提高設(shè)備的利用率并維持夏季正常生產(chǎn)[22]。本試驗篩選出的4個菌株的最適生長溫度為37 ℃，都高于一般酵母菌的最適生長溫度。

研究表明，當(dāng)培養(yǎng)基中積累的酸性物質(zhì)使pH≤4.5后，酵母菌的生理代謝活動就會逐漸受到抑制，從而原料的發(fā)酵能力逐漸下降，甚至停止[23]。本試驗中4個菌的最適pH為2.5，即它們在低酸環(huán)境下可以正常生長和發(fā)酵，說明其對酸的耐受性較好，用于生產(chǎn)可以有效避免雜菌污染，提高得率。

在工業(yè)生產(chǎn)中起酵速度決定整個生產(chǎn)周期的長短。起酵速度快，能夠大大縮短生產(chǎn)周期，滿足工業(yè)生產(chǎn)需要。且菌株生長周期中如沒有延滯期，說明該菌株生命力旺盛，適應(yīng)環(huán)境能力強，從發(fā)酵速率試驗可看出，起酵時間最短的菌株為菌JM-4，為14 h。其次是菌JM-3，為16 h；從起酵到完成發(fā)酵利用時間最短的菌株為菌JM-3，為4 h；其次為菌JM-1，為7 h；篩選到的這4個菌，無論從延滯期的長短還是從起酵時間的長短看，都不是投到生產(chǎn)中理想的菌株，要投入到生產(chǎn)中，還需要進(jìn)一步對菌種進(jìn)行馴化和改良。

4 結(jié)論

本試驗中初步分離到128株酵母菌，其中從土壤中分離到89株，從污水中分離到酵母菌33株，從微腐爛水果中分離到酵母菌6株。

通過常規(guī)分類鑒定、26S rDNA序列測定和系統(tǒng)發(fā)育分析后，初步鑒定出菌株JM-1、JM-2和JM-4屬于Meyerozyma屬，而菌JM-3屬于畢赤酵母屬Pichia。

通過酵母菌的生長特性試驗發(fā)現(xiàn)，耐糖性最好的菌株為菌JM-3，在不同酒精度下生長情況最好的菌株為菌株JM-1，耐酸性好的菌株為菌株JM-3和JM-4，耐高溫最好的菌株為菌株JM-3，發(fā)酵周期最短的菌株也為菌株JM-3，所以綜合考慮菌株JM-3各方面的生長特性最好。

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Screeningandidentificationofyeastfortolerancetohightemperature,alcoholandlowacid

Narisu1,2, Suyalatu1, GAO Feng-qin2,3

(1.Inner Mongolia Normal University, Huhhot 010022, China;2.Grassland Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Huhhot 010010, China;3.Key Laboratory of Grassland Resources and Ecology, Ministry of Agriculture, Huhhot 010010, China)

Yeast from the different samples such as the polluted water, soil and slightly rot fruit and so on was enriched, separated, purified and selected, and 4 yeast strains for tolerance to high temperatures, low acid and alcohol, named JM-1,JM-2,JM-3 and JM-4, were obtained. The results showed that the best suitable to five-carbon sugar concentration, alcohol, acidity and temperature of 4 yeast strains were 12 g·L-1, 14% (volume ratio), between 2.5 to 3.0 as well as 37 ℃ by morphological and physiological characterization respectively. The results indicated that strains JM-1, JM-2 and JM-4 belonged to the genusMeyerozyma, and strain JM-3 belongedPichiausing sequence analysis of 26S rDNA D1/D2 region. Selected yeast strains expressed good quality and performance on behalf of tolerance to high temperature, alcohol, low acid, and had some research significance.

yeast; select; identify

GAO Feng-qin E-mail:gaofq1211@126.com

TS261.1+1

A

1001-0629(2013)10-1625-08

2013-01-24 接受日期：2013-07-16

中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金(1610332012204)作者簡介:娜日蘇(1988-)，女(蒙古族)， 內(nèi)蒙古赤峰人，在讀碩士生，主要從釀酒酵母菌種的篩選技術(shù)研究。E-mail:tenarisu@163.com

高鳳芹(1978-)，女，黑龍江龍江人，助理研究員，在讀博士生，主要從事生物質(zhì)能源轉(zhuǎn)化技術(shù)研究。E-mail:gaofq1211@126.com