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    左、右歸丸及其拆方對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響*

    2013-12-01 02:28:52何文智王智民任艷玲
    中國(guó)病理生理雜志 2013年7期
    關(guān)鍵詞:右歸丸含藥成骨

    宋 囡, 何文智, 王智民, 任艷玲△

    (遼寧中醫(yī)藥大學(xué)1基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,2藥學(xué)院,3第一臨床學(xué)院,遼寧沈陽(yáng)110032)

    骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一種多潛能細(xì)胞,可分化為多種細(xì)胞,通過誘導(dǎo)其分化為成骨細(xì)胞后,促進(jìn)骨形成,是骨組織工程中的重要部分[1]。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,腎藏精,精生髓,髓養(yǎng)骨,而BMSCs主要來自于骨髓中,與中醫(yī)學(xué)“腎主骨”理論有相似之處[2-3]。左、右歸丸為中醫(yī)補(bǔ)腎經(jīng)典方劑,分別具有滋補(bǔ)腎陰和溫補(bǔ)腎陽(yáng)之功,雖然既往有左、右歸丸均能促進(jìn)BMSCs成骨分化的研究[4-5],但未見到兩方對(duì)BMSCs成骨誘導(dǎo)的比較研究。本文旨在通過觀察左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs成骨分化的影響,探討以“滋補(bǔ)腎陰”和“溫補(bǔ)腎陽(yáng)”立法的方藥對(duì)BMSCs成骨分化的影響機(jī)制。

    材料和方法

    1 動(dòng)物

    SPF級(jí)SD大鼠70只,2月齡,體重(210±10)g,雌雄各半,購(gòu)買于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司,許可證號(hào)為SCXK(遼)2010-0001,用于制備含藥血清。提取和培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用上述同種雄性大鼠2只。

    2 藥物

    中藥飲片購(gòu)買于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,左歸丸(成分:熟地黃24 g、炒山藥12 g、枸杞子12 g、山茱萸12 g、鹿角膠12g、菟絲子12 g、牛膝9 g、龜板膠12 g)、右歸丸(成分:熟地黃24 g、炒山藥12 g、枸杞子12 g、山茱萸12 g、鹿角膠12 g、菟絲子12 g、當(dāng)歸 9 g、肉桂 6 g、杜仲 9 g、附子 6 g)、共同藥方(成分:熟地黃24 g、炒山藥 12 g、枸杞子12 g、山茱萸12 g、鹿角膠12 g、菟絲子12 g)、滋陰藥方(熟地黃24 g、炒山藥 12 g、枸杞子 12 g、山茱萸 12 g、龜板膠12 g)和補(bǔ)陽(yáng)藥方(肉桂6 g、杜仲9 g、附子6 g、鹿角膠12 g、菟絲子12 g),以上5種藥方自制成水煎劑,生藥量為1 g·mL-1;戊酸雌二醇片(補(bǔ)佳樂;Delpharm Lille S.A.S,國(guó)藥準(zhǔn)字 J20080036)。

    3 試劑與儀器

    改良型α-MEM培養(yǎng)液和胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS)(HyClone);胰酶(Sigma);CD29抗體、CD45抗體、CD11b/c抗體和CD90抗體(Biolegend);Anti-CollagenⅠ抗體(博奧森);Anti-GAPDH抗體(中杉金橋);Anti-Cbfα1/Runx2抗體(Abcam);realtime RT-PCR試劑盒(TaKaRa);引物委托TaKaRa公司設(shè)計(jì)合成,Cbfα1上游引物5'-ATGACGGTAACCACAGTCCCATC-3',下游引物 5'-ATGACGGTAACCACAGTCCCATC-3',擴(kuò)增長(zhǎng)度為86 bp;ColⅠ上游引物5'-AGCAGACGGGAGTTTCACCTC-3',下 游 引 物 5'-TGTCTTCTTGGCCATGCGTCA-3',擴(kuò) 增長(zhǎng)度為 193 bp;GAPDH上游引物5'-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3',下游引物 5'-TTGCTGTTGAAGTCGCAGGAG-3',擴(kuò)增長(zhǎng)度為150 bp。3111二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermo),F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀(BD),BioSpec-nano型紫外可見分光光度計(jì)(島津),Mx3000P型Real-Time PCR儀(Agilent)。

    4 主要方法

    4.1 含藥血清制備與實(shí)驗(yàn)分組 將70只大鼠隨機(jī)分為7組:左歸丸組(ZGW)、右歸丸組(YGW)、共同藥組(GTY)、滋陰藥組(ZYY)、補(bǔ)陽(yáng)藥組(BYY)、補(bǔ)佳樂組(BJL)和空白對(duì)照組,每組10只,雌雄各半。按每kg體重大鼠的給藥量為人的6.3倍計(jì)算,并且每天給大鼠灌胃量為正常人用藥量的2倍,每天早晚各灌胃1次,空白對(duì)照組灌服蒸餾水。于第4天給藥2 h后,腹腔注射10%水合氯醛麻醉,采用大鼠腹主動(dòng)脈取血,靜置2 h 后,2 500 r·min-1、4 ℃離心20 min,收集血清,56℃水浴滅活30 min,分裝后,-86℃保存。實(shí)驗(yàn)分為8組:ZGW+YDJ組、YGW+YDJ組、GTY+YDJ組、ZYY+YDJ組、BYY+YDJ組、BJL+YDJ組、YDJ組和 control組,見表1。

    表1 實(shí)驗(yàn)分組Table 1.Experimental groupsing

    4.2 BMSCs分離培養(yǎng) 將2月齡大鼠脫頸處死后,75%乙醇浸泡15 min后,移入超凈臺(tái),在無菌條件下取下雙側(cè)股骨和脛骨,剪掉骨的兩端,暴露骨髓腔后,用5 mL含青、鏈霉素的α-MEM培養(yǎng)液反復(fù)沖洗骨髓腔至平皿中,直至骨的顏色變白,收集平皿中液體到離心管中,1 000 r·min-1離心 3 min,倒掉上清液,用含10%FBS的α-MEM培養(yǎng)液重懸細(xì)胞后,轉(zhuǎn)入25 cm2培養(yǎng)瓶,再移到CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),傳至第4代細(xì)胞,用于以下實(shí)驗(yàn)。

    4.3 BMSCs鑒定 第4代細(xì)胞經(jīng)PBS洗3遍,胰酶消化,再用1 mL PBS重懸后轉(zhuǎn)入1.5 mL EP管中,1 500 r·min-1離心 5 min,1 mL PBS 重懸,細(xì)胞濃度為1×109cells·L-1,分別加入 CD29抗體、CD45 抗體、CD11b/c抗體和 CD90抗體,避光,4℃孵育30 min,再用PBS清洗1次,0.3 mL PBS再次重懸,上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

    4.4 堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色采用改良鈣鈷法,P4細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后,以5×107cells·L-1接種于 24 孔培養(yǎng)板(1 mL/well),4 d(根據(jù)前期繪制生長(zhǎng)曲線的情況)后饑餓培養(yǎng),24 h后棄饑餓液,分別加入8種干預(yù)液1 mL,每組3復(fù)孔,繼續(xù)培養(yǎng)9 d后,棄原培養(yǎng)液,95%乙醇固定15 min,干燥后;加入ALP孵育液,于37℃孵育4 h;流水洗10 min;2%硝酸鈷作用5 min;蒸餾水洗片刻;1%硫化銨水溶液(現(xiàn)配用)處理1 min;蒸餾水沖洗。顯微鏡觀察。

    4.5 礦化結(jié)節(jié)觀察 采用茜素紅染色法,接種細(xì)胞同方法4.4項(xiàng),培養(yǎng)14 d(每3d換液1次)后棄孔中的培養(yǎng)液,PBS洗2次,95%乙醇固定10 min;PBS洗3次;0.1%茜素紅-Tris-HCl 37℃孵育30 min;自來水沖洗,室溫干燥。顯微鏡觀察。

    4.6 核心結(jié)合因子α1(core binding factor alpha 1,Cbfα1)和Ⅰ型膠原(collagen typeⅠ,ColⅠ)mRNA檢測(cè) 采用RT-PCR法,第4代BMSCs接種于8個(gè)25 cm2培養(yǎng)瓶,4 d后饑餓,24 h后加各組培養(yǎng)液6 mL,9 d(每3 d換液1次)后將細(xì)胞用 PBS洗3遍后,每瓶中加入500μL RNAiso Plus,刮取細(xì)胞,吸入預(yù)冷的1.5 mL EP中,用RNAiso Plus試劑盒提取細(xì)胞總RNA,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度A260/A280在1.8~2.2之間。去除基因組DNA,反轉(zhuǎn)錄RT反應(yīng)和染料法(SYBR Green I)相對(duì)定量分析,反轉(zhuǎn)錄按如下條件反應(yīng):37℃ 15 min,85℃ 5 s,4℃保存。實(shí)時(shí)定量PCR儀中按如下條件反應(yīng):95℃ 2 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,40個(gè)循環(huán)。

    4.7 Cbfα1和ColⅠ蛋白檢測(cè) 采用 Western blotting法,細(xì)胞接種及含藥血清干預(yù)同方法4.6項(xiàng),9 d后,棄培養(yǎng)液,4℃預(yù)冷的PBS洗3遍,甩干;每瓶細(xì)胞加入裂解液100μL,細(xì)胞刮至瓶底一角,冰上靜置30 min;收集至預(yù)冷的離心管中,12 000 r·min-1、4℃ 離心10 min,取上清;BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度,蛋白變性后,每孔上樣20μL,電泳后轉(zhuǎn)膜3 h,Ⅰ抗孵育1 h后,4℃過夜,次日Ⅱ抗孵育1 h后,暗室中加入ECL發(fā)光液,曝光30 min,掃描圖像并分析結(jié)果,計(jì)算目的蛋白與內(nèi)參照GAPDH條帶的吸光度比值,再各組比較。

    5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 13.0軟件處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,組間均數(shù)比較用One-way ANOVA,方差齊采用LSD檢驗(yàn),方差不齊采用 Tamhane's方法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 BMSCs形態(tài)學(xué)觀察

    細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶后,24 h后可見部分細(xì)胞貼壁,呈圓形較多,透亮,3 d后可見大部分細(xì)胞已貼壁,有突觸伸出,細(xì)胞多呈菱形或多角形,可進(jìn)行首次換液,10~12 d細(xì)胞達(dá)80%融合,可進(jìn)行首次傳代,第4代細(xì)胞多呈紡錘形生長(zhǎng),排列為漩渦狀,見圖1。

    Figure 1.Morphology of BMSCs(×100).A:P0 BMSCs at 10 d;B:P4 BMSCs at 5 d.圖1 BMSCs的形態(tài)

    2 BMSCs的流式細(xì)胞術(shù)鑒定

    經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè),CD90(70.61%)和 CD29(98.38%)表達(dá)為陽(yáng)性,CD11b/c(11.23%)和 CD45(7.64%)表達(dá)為陰性,見圖2。

    3 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs ALP活性的影響

    與control組比較,其它組ALP活性均增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與YDJ組比較,ZGW+YDJ和ZYY+YDJ組ALP活性增強(qiáng),BYY+YDJ和BJL+YDJ組ALP活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與 ZGW+YDJ組比較,YGW+YDJ、GTY+YDJ、BYY+YDJ和 BJL+YDJ組 ALP活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖3。

    Figure 2.Identification of BMSCs by flow cytometry.A:PerCP/Cy5.5 anti-CD90;B:APCanti-CD29;C:PE anti-CD11b/c;D:PE anti-CD45.圖2 BMSCs的流式細(xì)胞術(shù)鑒定

    Figure 3.The ALP activity in BMSCs induced by sera containing Zuogui pill,Yougui Pill and their disassembled prescriptions(×100).A:ZGW+YDJ;B:YGW+YDJ;C:GTY+YDJ;D:ZZY+YDJ;E:BYY+YDJ;F:BJL+YDJ;G:YDJ;H:control.Mean ±SD.n=3.*P <0.05 vs control;▲P <0.05 vs YDJ;★P <0.05 vs ZGW+YDJ.圖3 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs ALP活性的影響

    4 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs礦化結(jié)節(jié)的影響

    與control組比較,其它組礦化結(jié)節(jié)均有增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與YDJ組比較,ZGW+YDJ和ZYY+YDJ組礦化結(jié)節(jié)均有增加,BYY+Y DJ和BJL+YDJ組礦化結(jié)節(jié)減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與 ZGW+YDJ組比較,YGW+YDJ、GTY+YDJ、BYY+YDJ和 BJL+YDJ組礦化結(jié)節(jié)均有減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖4。

    5 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs Cbfα1 mRNA表達(dá)的影響

    與control組比較,其它組Cbfα1 mRNA表達(dá)均上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與YDJ組比較,ZGW+YDJ、YGW+YDJ、GTY+YDJ 和 ZYY+YDJ組Cbfα1 mRNA表達(dá)均上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與ZGW+YDJ組比較,YGW+YDJ、GTY+YDJ、BYY+YDJ和 BJL+YDJ組 Cbfα1 mRNA表達(dá)均下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖5。

    Figure 5.Cbfα1 mRNA expression in BMSCs induced by sera containing Zuogui pill,Yougui pill and their disassembled prescriptions.A:ZGW+YDJ;B:YGW+YDJ;C:GTY+YDJ;D:ZZY+YDJ;E:BYY+YDJ;F:BJL+YDJ;G:YDJ;H:control.Mean ± SD.n=3.*P <0.05 vs control;▲P <0.05 vs YDJ;★P <0.05 vs ZGW+YDJ.圖5 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs Cbfα1 mRNA表達(dá)的影響

    6 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs ColⅠmRNA表達(dá)的影響

    與control組比較,除BYY+YDJ組外,其它組均能上調(diào)ColⅠmRNA表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與YDJ組比較,ZGW+YDJ和ZYY+YDJ組能上調(diào)ColⅠmRNA表達(dá),BBY+YDJ和 BJL+YDJ組下調(diào)ColⅠmRNA表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與 ZGW+YDJ組比較,YGW+YDJ、GTY+YDJ、BYY+YDJ和 BJL+YDJ組下調(diào) ColⅠmRNA 表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖6。

    7 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì) BMSCs的Cbfα1蛋白表達(dá)的影響

    與control組比較,除 BYY+YDJ組外,其它組Cbfα1蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與YDJ組比較,ZGW+YDJ和 ZYY+YDJ組Cbfα1蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與 ZGW+YDJ組比較,YGW+YDJ、GTY+YDJ、BYY+YDJ和 BJL+YDJ組 Cbfα1 蛋白表達(dá)降低,而ZYY+YDJ組Cbfα1蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖7。

    Figure 6.ColⅠmRNA expression in BMSCs induced by sera containing Zuogui pill,Yougui pill and their disassembled prescriptions.A:ZGW+YDJ;B:YGW+YDJ;C:GTY+YDJ;D:ZZY+YDJ;E:BYY+YDJ;F:BJL+YDJ;G:YDJ;H:control.Mean ±SD.n=3.*P <0.05 vs control;▲P <0.05 vs YDJ;★P <0.05 vs ZGW+YDJ.圖6 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs ColⅠmRNA表達(dá)的影響

    Figure 7.Cbfα1 protein expression in BMSCs induced by sera containing Zuogui pill,Yougui pill and their disassembled prescriptions.A:ZGW+YDJ;B:YGW+YDJ;C:GTY+YDJ;D:ZZY+YDJ;E:BYY+YDJ;F:BJL+YDJ;G:YDJ;H:control.Mean ± SD.n=3.*P <0.05 vs control;▲P <0.05 vs YDJ;★P <0.05 vs ZGW+YDJ.圖7 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs Cbfα1蛋白表達(dá)的影響

    8 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs ColⅠ蛋白表達(dá)的影響

    與control組比較,除 BYY+YDJ組外,其它組Col 1蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與YDJ組比較,ZGW+YDJ和ZYY+YDJ組Col 1蛋白表達(dá)升高,BYY+YDJ組ColⅠ蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與ZGW+YDJ組比較,GTY+YDJ、BYY+YDJ和 BJL+YDJ組 ColⅠ蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖8。

    Figure 8.ColⅠprotein expression in BMSCs induced by sera containing Zuogui pill,Yougui pill and their disassembled prescriptions.A:ZGW+YDJ;B:YGW+YDJ;C:GTY+YDJ;D:ZZY+YDJ;E:BYY+YDJ;F:BJL+YDJ;G:YDJ;H:control.Mean ± SD.n=3.*P <0.05 vs control;▲P <0.05 vs YDJ;★P <0.05 vs ZGW+YDJ.圖8 左、右歸丸及其拆方含藥血清對(duì)BMSCs ColⅠ 蛋白表達(dá)的影響

    討 論

    中醫(yī)理論認(rèn)為,“腎生骨髓”,“腎充則髓實(shí)”(《素問·陰陽(yáng)應(yīng)象大論》)。腎藏精,精生髓,髓養(yǎng)骨,這是“腎主骨”的理論基礎(chǔ)[6]。精是構(gòu)成人體生命活動(dòng)的有形精微物質(zhì),是構(gòu)成人體和維持人體生命活動(dòng)的最基本物質(zhì)。BMSCs是一種多潛能細(xì)胞,主要存在于骨髓中,在個(gè)體發(fā)育成熟過程的特定狀態(tài)下及組織修復(fù)過程中起著重要的作用,其功能不足則會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)發(fā)育障礙。目前研究認(rèn)為腎精與BMSCs存在一定的相關(guān)性[7],BMSCs對(duì)骨的生長(zhǎng)發(fā)育及功能的維持起著非常重要的作用。左、右歸丸是中醫(yī)補(bǔ)腎益精法經(jīng)典代表方,均出自《景岳全書·新方八陣》。左歸丸用于肝腎精血虛損,從《內(nèi)經(jīng)》“精不足者,補(bǔ)之以味”而立法,《素問·陰陽(yáng)應(yīng)象大論》云:“形不足者,溫之以氣;精不足者,補(bǔ)之以味?!狈街惺斓攸S、山藥、山茱萸補(bǔ)肝腎益陰血,龜板膠、鹿角膠合用可峻補(bǔ)精血,調(diào)和陰陽(yáng),再加菟絲子、枸杞子平補(bǔ)肝腎,牛膝以壯腰膝;右歸丸治命門火衰,真陽(yáng)虛弱,在附子、肉桂、鹿角膠、菟絲子、杜仲等溫補(bǔ)腎陽(yáng)之中,又用大量的熟地黃配合山藥、山茱萸、枸杞子滋陰補(bǔ)腎,填精補(bǔ)髓,于陰中求陽(yáng),滋陰生氣。同時(shí),現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)左、右歸丸可以作為“補(bǔ)腎”的代表方促進(jìn)BMSCs的成骨分化。但由于2方補(bǔ)腎填精的機(jī)制不同,所以2方在促進(jìn)BMSCs成骨分化方面是否有不同之處值得探討。補(bǔ)佳樂戊酸雌二醇片是臨床常用的一種雌激素,可以抑制骨的吸收以促進(jìn)骨的形成[8],而現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)左、右歸丸也可以通過發(fā)揮其類雌激素樣的作用促進(jìn)骨形成[9-10],故本實(shí)驗(yàn)選用補(bǔ)佳樂為陽(yáng)性對(duì)照藥,與左、右歸丸及其拆方分別誘導(dǎo)BMSCs成骨分化。

    本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)體外分離培養(yǎng)的BMSCs進(jìn)行鑒定,BMSCs因其有貼壁性的特點(diǎn),傳至第4代后細(xì)胞純化,表達(dá)多種細(xì)胞的表面標(biāo)志[11-13],如 CD29、CD90、CD71、CD44、CD105、CD106 等,以上均是 BMSCs的重要表面標(biāo)志物,同時(shí)又由于它屬于非造血類細(xì)胞,不表達(dá) CD34、CD45、CD11b、CD14 等表面抗原,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD29和CD90表達(dá)陽(yáng)性,CD11b/c和CD45表達(dá)陰性,故 BMSCs得以鑒定。目前對(duì)于BMSCs的成骨分化研究很多,這一過程受諸多因素的影響[14-15],如ALP是成骨細(xì)胞所分泌的一種酶蛋白,ALP活性的高表達(dá)是成骨細(xì)胞分化的標(biāo)志,礦化結(jié)節(jié)的形成也是成骨的另一標(biāo)志[16-17],Cbfα1是間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,它的表達(dá)是成骨細(xì)胞開始分化的標(biāo)志[18-19]。ColⅠ是礦化骨中唯一的膠原類型,代表成骨過程中有機(jī)基質(zhì)的形成[20-21]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明左歸丸組和滋腎陰藥組均可協(xié)同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)BMSCs成骨分化,顯著促進(jìn) ALP生成,礦化結(jié)節(jié)的形成,上調(diào)Cbfα1 和 ColⅠmRNA,促進(jìn) Cbfα1 和 ColⅠ蛋白的高表達(dá),且優(yōu)于誘導(dǎo)劑組,而左歸丸組和滋腎陰藥組之間無顯著差異;同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)右歸丸組、2方共同藥組、補(bǔ)腎陽(yáng)藥組和補(bǔ)佳樂組對(duì)于以上的成骨指標(biāo)的檢測(cè)均不如左歸丸組。由此可見,左歸丸組和滋腎陰藥組協(xié)同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)BMSCs成骨分化為佳,進(jìn)一步說明了其對(duì)BMSCs成骨分化的協(xié)同作用,以“滋補(bǔ)腎陰”立法的左歸丸組和滋腎陰藥組優(yōu)于以“溫補(bǔ)腎陽(yáng)”立法的右歸丸組和補(bǔ)腎陽(yáng)藥組,但二者對(duì)于BMSCs成骨分化過程中是否作用于不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有待進(jìn)一步研究。

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    乳病消片含藥血清對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:40:44
    左歸丸、右歸丸對(duì)自然衰老大鼠海馬組織及齒狀回NGF、FGF-2蛋白水平的影響
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    左、右歸丸對(duì)去卵巢大鼠BMSCs成骨、成脂分化后Caspase-3/Bcl-2的影響
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:49:52
    糖尿病大鼠Nfic與成骨相關(guān)基因表達(dá)的研究
    HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定右歸丸中6種成分
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:21
    液晶/聚氨酯復(fù)合基底影響rBMSCs成骨分化的研究
    30例Ⅰ型成骨不全患者股骨干骨折術(shù)后康復(fù)護(hù)理
    針刺、艾灸聯(lián)合右歸丸治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎102例
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