三種日糧添加物對灘羊血液抗氧化性能的影響

張培松，周玉香，王 潔

(寧夏大學 農(nóng)學院動物科學系，寧夏 銀川 750021)

動物的健康狀況與其抗氧化功能密不可分。日常管理過程中造成不同程度的應激會導致免疫和抗氧化功能的降低，最終影響動物生產(chǎn)性能的發(fā)揮。因此，研究提高動物的免疫和抗氧化功能，促進其健康生長，具有十分重要的意義。目前，研究的熱點是利用一些生物活性物質(zhì)，如酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙等，以優(yōu)化飼料的營養(yǎng)價值、改善動物的健康狀態(tài)，提高飼料的消化率和轉化率，最終起到提高動物的生產(chǎn)性能的作用[1-3]。本研究通過在灘羊日糧中，分別添加不同比例的酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙，研究三種日糧添加物對灘羊抗氧化功能的影響，為提高灘羊生產(chǎn)性能和免疫提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

飼養(yǎng)試驗于2011年5月7日到2011年7月14日，在寧夏農(nóng)墾暖泉魯寧小尾寒羊種羊繁育中心進行，試驗期67 d，其中預試期7 d，正試期60 d。

1.2 試驗材料

酵母培養(yǎng)物益康“XP”由美國達農(nóng)威生物發(fā)酵工程技術(深圳)有限公司提供。益生酵母1026由奧特奇生物制品(中國)有限公司提供。苜蓿皂甙(紫花苜蓿全株提取物，皂甙含量20%)購于河北寶恩生物技術有限公司。

1.3 試驗設計

選擇健康、生長發(fā)育狀況良好，年齡相近的周歲灘羊羯羊12只、周歲母羊12只進行試驗。將試驗羊隨機分為4組，即對照組、試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組，每組6只。對照組飼喂基礎日糧，試驗Ⅰ組在對照組日糧的基礎上添加2.0%的酵母培養(yǎng)物，試驗Ⅱ組在對照組日糧的基礎上添加0.3%的益生酵母，試驗Ⅲ組在對照組日糧的基礎上添加3.0%的苜蓿皂甙。基礎日糧配方設計見表1。

1.4 試驗方法

1.4.1 血樣采集與處理 在正試期開始的第0天、第20天、第40天、第60天早晨晨飼前，頸靜脈采集血液20 mL，其中10 mL用肝素抗凝，3 500 r/min離心10 min，取血漿保存于-20 ℃冰箱中待測；另外10 mL在恒溫箱中溫育30 min后，3 500 r/min離心15 min，取血漿保存于-20 ℃冰箱中待測。

1.4.2 測定指標與方法 抗氧化指標包括血漿丙二醛(MDA)、血漿超氧化物歧化酶(SOD)活性和血漿總抗氧化能力(T-AOC)。

表1 日糧配方設計Table 1 Ration formulation

注：①每千克預混料提供：維生素A 25 000 IU，維生素D 325 000 IU，維生素E 300 IU，鎂 3.25 g,銅 0.7 g，鐵 1.7 g，錳 0.8 g，鋅 2 g，硒 15 g，碘 20 g，鈷 30 g，鈣 75 g，磷 55 g；②營養(yǎng)水平除代謝能為計算值，其余為實測值。

Note：①The premix provided per kilogram of diet：vitamin A 25 000 IU， vitamin 325 000 IU， vitamin E 300 IU，Mg 3.25 g，F(xiàn)e 1.7 g，Mn 0.8 g，Zn 2.0 g，Se 15.0 g，I 20.0 g，Co 30.0 g，Ca 75.0 g，P 55.0 g；②Nutrient levels were the determined values except for ME which was calculated.

MDA測定用硫代巴比妥酸(TBA)法。測定原理是過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的MDA可與TBA縮合，形成紅色產(chǎn)物，在532 nm處有最大吸收峰。

血漿超氧化物歧化酶活性采用黃嘌呤氧化酶法。通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用可見光分度度計測其吸光度。當被測樣品中含SOD時，則對超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時測定管的吸光度值低于對照管的吸光度值，通過公式計算可求出被測樣品中的SOD活性。

SOD(U/mL)=(對照管吸光度-樣品管吸光度)/對照管吸光度/0.5×反應體系的稀釋倍數(shù)×樣本測試前的稀釋倍數(shù)血漿總抗氧化能力測定的原理是由于機體中有許多抗氧化物質(zhì)，能使Fe3+還原成Fe2+，后者可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡合物，通過比色可測出其抗氧化能力的高低。

所有試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，具體操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SAS 6.12軟件包中的ANOVA過程進行方差分析，多重比較用Duncan法。

2 結果與分析

2.1 不同日糧添加物對血漿MDA含量的影響

試驗各組羊血漿中MDA的含量變化如表2所示。在試驗開始后的第0天，試驗Ⅰ、Ⅱ組和試驗Ⅲ組分別與對照組的血漿MDA含量差異不顯著(P>0.05)。在試驗第20天、第60天時，試驗Ⅰ組與對照組的血漿MDA含量差異極顯著(P<0.01)，試驗Ⅱ、Ⅲ組與對照組血漿MDA含量差異不顯著(P>0.05)；試驗第40天時各試驗組之間血漿MDA含量差異不顯著(P>0.05)。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組血漿MDA含量在試驗第40天時開始呈現(xiàn)下降趨勢，說明添加酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙后，均能使機體MDA含量下降。

表2 不同日糧添加物對灘羊血漿MDA 含量的影響Table 2 Effects of different additives of diet on plasma MDA in stabling Tan sheep nmol/L

注：同列肩標不同大寫字母為差異極顯著(P<0.01),同列肩標不同小寫字母的為差異顯著(P<0.05)。下同。

Note:Values with different capitalized superscripts in the same column mean extreme difference(P<0.01),and those with different lowercase superscripts mean significant difference(P<0.05).The same below.

2.2 不同日糧添加物對灘羊血漿SOD含量的影響

不同日糧添加物對灘羊血漿SOD含量的影響如表3所示。在試驗開始后第0天，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組分別與對照組的血漿SOD含量差異不顯著(P>0.05)。試驗Ⅱ組在試驗第20天、第40天時血漿SOD含量極顯著高于與對照組(P<0.01)，在其他時期均無顯著差異(P>0.05)，但血漿SOD含量均略高于對照組。試驗Ⅲ組與對照組血漿SOD含量在試驗開始后的第20天差異顯著(P<0.05)，第40天時差異極顯著(P<0.01)，同時也在試驗開始后第60天時其含量達到峰值，為85.62 U/mL，在試驗開始后第40天、第60天時較對照組高了33.93%、2.92%。

2.3 不同日糧添加物對灘羊血漿T-AOC的影響

試驗開始后的0、20、60 d各處理組之間T-AOC含量差異不顯著(P>0.05)，但40 d時試驗I、II組顯著高于對照組(P<0.05)。灘羊血漿的總抗氧化能力隨著飼養(yǎng)時間而發(fā)生了變化，對照組、試驗Ⅱ組羊只的血漿T-AOC持續(xù)逐漸降低，而試驗Ⅰ組、試驗Ⅲ組的血漿T-AOC均呈現(xiàn)先增加，后下降的趨勢，但試驗組的血漿T-AOC均不同程度的略高于對照組，如表4所示。在試驗開始后的第0天，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組分別與對照組的血漿T-AOC差異不顯著(P>0.05)。各試驗組在試驗開始后第20天時其血漿T-AOC達到峰值，試驗Ⅰ組為4.44 U/mL，試驗Ⅱ組為5.02 U/mL，試驗Ⅲ組為4.10 U/mL。

表3 不同日糧添加物對灘羊血漿SOD含量的影響Table 3 Effects of different additives ofdiet on plasma SOD in Tan sheep U/mL

表4 不同日糧添加物對灘羊血漿T-AOC的影響Table 4 Effects of different additives ofdiet on serumT-AOC in Tan sheep U/mL

3 討 論

動物機體防御體系抗氧化能力的強弱與健康程度密切相關。作為抗氧化酶之一的SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用，能清除超氧陰離子自由基，保護細胞膜免受損傷，維持機體的健康。SOD的高低間接反應了機體清除氧自由基的能力。正常情況下生物機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生，利用和消除保持著動態(tài)平衡。否則，自由基的產(chǎn)生和增加，或機體清除自由基的能力減弱，都會對機體造成損傷[4]。氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應，并因此形成脂質(zhì)過氧化物，如MDA。MDA的含量可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細胞受損的程度。作為重要抗氧化劑之一的SOD，其測定常常與MDA的測定相結合，以反映機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度和機體清除氧自由基的能力。

張愛忠等[5]報道，在精粗比為2∶8的絨山羊日糧中添加2%的酵母培養(yǎng)物，可有效清除自由基，防止活性氧對機體造成損傷，具有提高機體抗氧化酶活性的作用。在肉雞生產(chǎn)方面，在飼料中添加酵母培養(yǎng)物，有提高肉雞機體抗氧化功能和降低血漿、肌肉總膽固醇含量的趨勢[3,6-8]。關于添加苜蓿皂甙對動物機體抗氧化功能的影響的報道也有很多。潘俊良[9]選擇給1日齡健康海蘭褐蛋雛雞飼喂不同劑量的苜蓿皂甙后發(fā)現(xiàn)，當添加量為200 mg/kg時，試驗雞血漿和肝臟中的SOD活力均較對照組高；當添加量為400 mg/kg時，試驗雞血漿SOD活力均較對照組高，同時其肝臟MDA顯著下降；當添加量為400 mg/kg時，試驗雞的血漿MDA顯著下降，說明苜蓿皂甙對改善蛋雛雞抗氧化機能有幫助。張勇[10]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加苜蓿總甙，不同程度地提高了肉仔雞血漿和肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平，降低MDA水平，保護機體免受脂質(zhì)過氧化物的損傷，增加機體抗氧化能力。胡明等[11]在精粗比為2∶8日糧條件下，給綿羊日糧添加不同水平的苜蓿皂甙后，可提高綿羊機體的抗氧化能力：綿羊血漿GSH-Px酶活(P>0.05)、血漿總SOD酶活(P<0.05)及血漿抑制羥自由基能力增加(P>0.05)；降低血漿中MDA含量(P>0.05)。本試驗中，在灘羊日糧中添加酵母培養(yǎng)物、益生酵母和苜蓿皂甙后，均在一定程度上降低了機體血漿MDA含量，說明酵母培養(yǎng)物、益生酵母、苜蓿皂甙可減輕機體的脂質(zhì)過氧化作用，能有效增加機體抗氧化能力，有利于機體健康作用。

4 結 論

精粗比為3∶7日糧條件下，在基礎日糧中添加2.0%酵母培養(yǎng)物、0.3%益生酵母和3.0%苜蓿皂甙后，降低了試驗羊血漿的MDA的含量，同時提高了其血漿SOD含量和血漿T-AOC，說明，以上三種營養(yǎng)物質(zhì)均可以增強灘羊的抗氧化功能。

參考文獻：

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