附子理中湯對(duì)脾陽(yáng)虛證模型大鼠心肌電生理的影響*

盧 蘭 陳 樺 唐漢慶

（1.廣東省惠州市第四人民醫(yī)院，廣東 惠州 516055；2.惠州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東 惠州 516025；3.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000）

脾為后天之本，脾陽(yáng)虛會(huì)累及心陽(yáng)、腎陽(yáng)出現(xiàn)心臟的病理改變，本實(shí)驗(yàn)嘗試建立脾陽(yáng)虛動(dòng)物模型，采用“方-證”對(duì)應(yīng)藥物附子理中湯為干預(yù)藥物，討論其對(duì)心律失常的動(dòng)作電位時(shí)程、動(dòng)作電位0相幅值、動(dòng)作電位50%復(fù)極化時(shí)程和90%復(fù)極化時(shí)程的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar大鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量（320±20）g，北京維通利華公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)為 SCXX（京）2012-0004 。

1.2 藥物與儀器 水合氯醛（批號(hào)20090025，北京化學(xué)試劑公司）；附子理中湯由炮附子、黨參、白術(shù)、干姜、炙甘草按照原方 3∶5∶4∶3∶2 的比例組成， 諸藥均先經(jīng)蒸餾水浸泡30 min，炮附子先煎1 h，后納入其余藥物，煎煮兩次 （每次40 min），期間將兩次藥液紗布過(guò)濾，合并，水浴加熱濃縮至含生藥量為2 g/mL質(zhì)量濃度的藥液，殺菌，貯存于4℃冰箱內(nèi)備用。實(shí)驗(yàn)所用單味藥由本校藥理教研室提供，經(jīng)本院藥理教研室鑒定。電子天平（AE160型，瑞士Mettler公司）；生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（BL-420 E+，泰盟，成都）；MedLab-U生物信號(hào)采集系統(tǒng)（上海欣曼公司）。

1.3 分組與造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，分為對(duì)照組、模型組、附子理湯低、中、高劑量組，每組10只，對(duì)照組予普通飼料，自由飲水，常態(tài)環(huán)境喂養(yǎng)。其余大鼠以10%水合氯醛按3 mL/kg腹腔注射麻醉，俯臥位，背部肩胛骨間備皮，碘伏、酒精消毒皮膚，鋪消毒孔巾，在肩胛骨中間切開(kāi)皮膚，往背部切約4 cm切口，鈍性分離皮膚、皮膚下組織和肌肉，找到BAT（其組織細(xì)胞內(nèi)含有大量血紅蛋白和高水平的血紅素卟啉，細(xì)胞呈棕色）并分離，7號(hào)線縫合，碘伏、酒精消毒皮膚切口。無(wú)菌紗布覆蓋切口并包扎牢固，送回動(dòng)物房喂養(yǎng)。術(shù)后飼以高脂飼料 （83%基本飼料，15%甘油三酯，2%膽固醇），隔日將大鼠置于19℃恒溫實(shí)驗(yàn)室，模擬寒冷刺激，連續(xù)3周。

1.4 給藥方法 高劑量組3周后第1日起在模型組基礎(chǔ)上，附子理中湯按20 g/kg體質(zhì)量灌胃。中劑量組：附子理中湯按10 g/kg體質(zhì)量灌胃。低劑量組：附子理中湯按5 g/kg體質(zhì)量灌胃。對(duì)照組和模型組按0.9%氯化鈉注射液5 g/kg體質(zhì)量灌胃。每日1次，連續(xù)灌胃4周。灌胃4周后第1日檢測(cè)指標(biāo)。全部大鼠納入統(tǒng)計(jì)分析，沒(méi)有死亡脫失

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 大鼠用10%水合氯醛按3mL/kg腹腔麻醉后，仰位固定。開(kāi)胸暴露心臟，小心剪開(kāi)心包膜，采用乏極化電極接觸心外膜記錄單相動(dòng)作電位（MAP），記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，MAP和Ⅱ?qū)?lián)心電圖由MedLab-U生物信號(hào)采集系統(tǒng)同步描記。每隔6min記錄MAP，連續(xù)測(cè)量10個(gè)頻率穩(wěn)定波形的單相動(dòng)作電位數(shù)值，取其平均值為記錄結(jié)果。記錄心率（HR），動(dòng)作電位時(shí)程（APD），動(dòng)作電位 0相幅值（APA），動(dòng)作電位 50%復(fù)極化時(shí)程 （APD50），90%復(fù)極化時(shí)程（APD90）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 術(shù)后動(dòng)物行為學(xué)觀察 施行肩胛骨BAT切除術(shù)后1周，大鼠出現(xiàn)畏冷寒戰(zhàn)、喜扎堆、拱背少動(dòng)、體毛不榮等癥狀或體征。高脂飼料3周后，大鼠出現(xiàn)食欲不振、倦怠、消瘦、肛周污穢等癥狀或體征。

2.2 各組大鼠心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的比較 見(jiàn)表1。與對(duì)照組比較，模型組 HR、APD50均降低（P<0.05）；APD、APD90、APA 均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，中劑量組 HR、APD、APD50均升高（P<0.05）；與模型組比較，高劑量組 HR 升高（P<0.05）而 APD、APD50、APD90、APA均顯著升高（P<0.01）。

表1 各組大鼠心肌細(xì)胞動(dòng)作電位比較（）

表1 各組大鼠心肌細(xì)胞動(dòng)作電位比較（）

與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

3 討 論

動(dòng)物模型的構(gòu)建是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的重要環(huán)節(jié)，以復(fù)合因素建立病證結(jié)合、適合中醫(yī)科研特點(diǎn)的動(dòng)物模型值得探討，在本實(shí)驗(yàn)工作中，筆者嘗試建立脾陽(yáng)虛大鼠模型。脾陽(yáng)虛證中脾虛癥狀表現(xiàn)為納少、消瘦、乏力、脘腹脹痛、便溏及腹瀉等；陽(yáng)虛癥狀為畏寒喜溫、形寒肢冷等。又考慮到BAT為大鼠最主要的產(chǎn)熱物質(zhì)［1-2］，施行肩胛骨BAT切除術(shù)減少其產(chǎn)熱物質(zhì)來(lái)源，大幅度衰減其陽(yáng)氣，使陽(yáng)虛癥狀群突出，因此采用“BAT切除術(shù)+高脂飼料喂養(yǎng)+隔日寒冷環(huán)境刺激”的復(fù)合因素方法并結(jié)合大鼠行為學(xué)觀察評(píng)價(jià)建立脾陽(yáng)虛證動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)中，筆者觀察到模型大鼠大便稀，肛門(mén)周?chē)形畚铮防浜畱?zhàn)、喜扎堆、拱背少動(dòng)、體毛不榮等，參考脾陽(yáng)虛證兩大癥狀群的文獻(xiàn)評(píng)價(jià)［3-4］，建立脾陽(yáng)虛大鼠模型，這一方法有待同仁指正。

在本實(shí)驗(yàn)工作中，筆者觀察到，和對(duì)照組比較，模型組 HR、APD50、APD、APD90、APA 均降低 （P<0.05 或0.01），提示脾陽(yáng)虛模型動(dòng)物發(fā)生心臟電生理病理改變?！端貑?wèn)·生氣通天論》指出“陽(yáng)氣者，若天與日，失其所則折壽而不彰”，陽(yáng)氣衰弱，無(wú)力鼓動(dòng)心脈而出現(xiàn)病變，盡管心臟病變與心陽(yáng)關(guān)系最密切，但以臨床為例，單純的心陽(yáng)虛少見(jiàn)，以心脾或心腎陽(yáng)虛等多見(jiàn)。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷，脾陽(yáng)虛也可能累及心陽(yáng)，從側(cè)面再次提示臨床以整體觀念進(jìn)行辨證的重要性。

附子理中湯具有溫陽(yáng)健脾功效，主治脾陽(yáng)虛重證或心脾陽(yáng)虛證。本實(shí)驗(yàn)觀察到，與模型組比較，附子理中湯中劑量組、高劑量組HR提高（P<0.05），提示附子理中湯在一定程度上恢復(fù)脾陽(yáng)虛動(dòng)物心臟的正常自律性或傳導(dǎo)性。同時(shí)，附子理中湯能延長(zhǎng)APD和升高APA，使之趨向于對(duì)照組，和模型組比較差異明顯（P<0.01），附子理中湯的干預(yù)作用和濃度有關(guān)，表現(xiàn)為隨濃度增高，APD和APD50明顯延長(zhǎng)，推測(cè)是通過(guò)改變心肌細(xì)胞膜鉀、鈣和鈉離子通道特性，一定程度上提高心肌應(yīng)激性所致［5］。改善心臟電生理病理變化可能是附子理中湯溫陽(yáng)健脾功效的體現(xiàn)之一。

［1］Smith RE， Horwitz BA.Brown fat tissue and thermogenesis［J］.Physiol Rev，1969，49（2）：330-332，425.

［2］Nicholls DG，Locke RM.Thermogenic mechanisms in brown fat［J］.Physiol Rev，1984，64（1）：1-3.

［3］楊雪，楊文思，王勇，等.脾陽(yáng)虛證中陽(yáng)虛癥狀群的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2008，23（3）：244-246.

［4］楊雪，楊文思，王勇，等.脾陽(yáng)虛消化不良癥狀群客觀評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2008，14（4）：271-272.

［5］馬越，田瑤，姚小芹，等.石韋抗大鼠緩慢性心律失常作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.吉林中醫(yī)藥，2011，31（9）：915-916.