高致病性豬藍(lán)耳病的組織病理學(xué)研究

張秀亮 李麗（山東省濰坊市寒亭區(qū)畜牧獸醫(yī)局 261100 山東省萊陽(yáng)市沐浴店獸醫(yī)站）

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高致病性豬藍(lán)耳病的組織病理學(xué)研究

張秀亮①李麗②（①山東省濰坊市寒亭區(qū)畜牧獸醫(yī)局 261100 ②山東省萊陽(yáng)市沐浴店獸醫(yī)站）

采集具有典型高致病性豬藍(lán)耳病病變特征的心、肝、脾、肺、腎、小腸和淋巴結(jié)等制作成石蠟切片，經(jīng)H.E染色后觀察，顯示腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落減少、腎臟局部出血、腎小球見有萎縮；肺的病例變化差異較大，可見到肺氣腫、出血、肺泡壁增厚、單核淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞滲出和肺泡內(nèi)充滿纖維素樣蛋白滲出物等；肝臟見液化性壞死灶、肝小葉間結(jié)締組織增生；脾臟的動(dòng)脈鞘部位淋巴細(xì)胞減少，噬酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，脾小體周圍出血；淋巴結(jié)中見有合胞體等。

高致病性豬藍(lán)耳病 組織病理學(xué) 研究

2001年7月開始，在浙江省和周邊地區(qū)大面積爆發(fā)了一種主要表現(xiàn)為病豬持續(xù)高溫、皮膚發(fā)紅、食欲廢絕、呼吸綜合癥為主要特征的豬病，有極高的發(fā)病率和死亡率。給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了極大的破壞。2006年南方多省均有發(fā)生，目前該疾病已成為影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的主要疾病之一，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了極大地?fù)p失。余旭平等[1]對(duì)浙江省幾個(gè)不同規(guī)模、不同發(fā)病情況的豬場(chǎng)的空氣細(xì)菌含量進(jìn)行了測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該病的嚴(yán)重程度與豬舍內(nèi)空氣的細(xì)菌含量存在明顯的正相關(guān)性。朱軍莉等[2]設(shè)計(jì)了3條引物進(jìn)行PCV-1和PCV-2的檢測(cè)，結(jié)果表明，PCV-2的陽(yáng)性率為36.17%，PCV-1單獨(dú)感染陽(yáng)性率為34.04%。張秀亮等[3]針對(duì)豬鏈球菌的谷氨酸脫氫酶基因設(shè)計(jì)了分型PCR的引物，對(duì)常見血清型的豬鏈球菌進(jìn)行鑒定。袁佳杰等[4]從患病豬中分離到了多種細(xì)菌。農(nóng)業(yè)部于2007年5月研制成功疫苗并廣泛應(yīng)用，并取得了不錯(cuò)的免疫效果。本試驗(yàn)采集具有典型高致病性豬藍(lán)耳病病變特征的心、肝、脾、肺、腎、小腸和淋巴結(jié)等制作成石蠟切片，觀察其病理變化特點(diǎn)。

1 材料與試劑

1.1 病料 選取具有高致病性豬藍(lán)耳病典型癥狀的病豬，采集心、肝、脾、肺、腎、小腸和淋巴結(jié)等組織，取材部位為病灶與正常組織的結(jié)合部位。

1.2 主要試劑 10%甲醛溶液、50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精、酒精二甲苯、二甲苯石蠟、石蠟I、石蠟II、蘇木精染色液、伊紅染色液。

2 試驗(yàn)方法

2.1 組織固定 小塊病料采集后迅速放入10%甲醇溶液中進(jìn)行固定，固定時(shí)間在24h以上。

2.2 水洗 固定好的組織塊用流水沖洗12~24h，把福爾馬林清洗出來(lái)，防止福爾馬林殘留于組織中影響切片。

2.3 脫水 采用逐級(jí)提高酒精濃度進(jìn)行脫水。脫水在室溫下進(jìn)行，順序?yàn)?0%酒精(1h)→50%酒精(1h)→70%酒精(2h)→80%酒精(2h)→90%酒精(2h)→95%酒精過(guò)夜→100%酒精I(xiàn)(1.5h)→100%酒精I(xiàn)I(1.5h)。

2.4 透明 采用二甲苯在室溫下進(jìn)行透明組織塊。過(guò)程是二甲苯酒精(15min)→二甲苯I(10min)→二甲苯II(15min)，使組織達(dá)到透明。

2.5 浸蠟 此步驟是在溫箱內(nèi)進(jìn)行，溫度調(diào)至58℃左右，使它恰好熔化石蠟。浸蠟過(guò)程為：二甲苯石蠟(1:1) (15min)→石蠟I(30min)→石蠟II(1h-2h)。

2.6 包埋、修塊 包埋盒用光亮且厚的紙折疊成紙盒并進(jìn)行編號(hào)。采用的石蠟熔點(diǎn)為54~56℃。包埋方法是把預(yù)熱的包埋盒放平，將溫箱中熔化好的石蠟倒進(jìn)包埋盒內(nèi)，迅速用預(yù)熱的鑷子輕輕將組織放人包埋盒內(nèi)，將要切的面朝下擺正位置，等到石蠟表面凝固之后，將包埋盒輕輕放人冷水內(nèi)，經(jīng)30min后取出，剝開包埋盒，取出蠟塊，把組織蠟塊的上下兩端修平。

2.7 切片、貼片 將燒熱的解剖刀平烙蠟塊底面，迅速粘貼在一個(gè)小方形的木塊上，然后將其固定在切片機(jī)上。裝上鋒利的切片刀(刀的斜度為15°)，調(diào)整蠟塊切面使之與刀口平行。把厚度調(diào)節(jié)器調(diào)在5mm左右。左手平持毛筆，右手旋動(dòng)切片機(jī)把，切片帶出來(lái)之后，用毛筆輕輕托起，切片切取一定長(zhǎng)度之后，用毛筆或鑷子輕輕取出至40~45℃的恒溫水箱中展片。等切片展開后用清潔的載玻片從水中撈出，撥正位置；把貼好切片的載玻片放在染色架上豎立排水，然后烤片。

2.8 烤片 把貼有切片的載玻片直立放在烤片架上，送入45℃左右的溫箱中烘烤2~4h，直到蠟片成半透明狀。

2.9 染色 采用蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(曙紅，Eosin)染色法(H.E染色法)。具體步驟為：脫蠟[二甲苯I(15min)→二甲苯II(15min)→酒精二甲苯(2min)]，入水[100%酒精(2min)→100%酒精(2min)→95%酒精(2min)→90%酒精(2min)→80%酒精(2min)→70%酒精(2min)→50%酒精(2min)→蒸餾水水洗(2min)]，染色[蘇木精(10min)→水洗(2min)→1%鹽酸(2min)→水洗(2min)→50%酒精(2min)→70%酒精(2min)→80%酒精(2min)→90%酒精(2min)→95%酒精(2min)→1%伊紅酒精(5min)→95%酒精(2min)→100%酒精(2min)→100%酒精(2min)]，透明[酒精二甲苯(2min)→二甲苯I(2min)→二甲苯II(2min)]。

2.10 封片 由二甲苯中取出切片，辨別正反面，用紗布迅速擦凈組織周圍多余的二甲苯，在組織上面滴加適量(1~2滴)中性樹膠，再將潔凈蓋玻片傾斜放下，封片后即制成永久性玻片標(biāo)本。

3 結(jié)果

采集的臨床典型病例的病料，經(jīng)切片觀察，顯示腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落減少、腎臟局部出血、腎小球見有萎縮；肺的病例變化差異較大，可見到肺氣腫、出血、肺泡壁增厚、單核淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞滲出和肺泡內(nèi)充滿纖維素樣蛋白滲出物等；肝臟見液化性壞死灶、肝小葉間結(jié)締組織增生；脾臟的動(dòng)脈鞘部位淋巴細(xì)胞減少，噬酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，脾小體周圍出血；淋巴結(jié)中見有合胞體等。

3.1 肺臟的病理組織學(xué)變化 肺臟切片可見肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張，可見紅細(xì)胞；見肺泡破裂，見肺氣腫表現(xiàn)(圖1)。還見到肺泡紅色漿液滲出，淤血、水腫，間質(zhì)增生性肺炎(圖2)。

圖1 肺臟切片(HE, ×640)

圖2 肺臟切片(HE, ×640)

3.2 腎臟的病理組織學(xué)變化 腎臟切片可見腎小球萎縮，腎小管變性壞死(圖3)。腎臟出血，腎小管破裂，表現(xiàn)慢性間質(zhì)性腎炎(圖4)

圖3 腎臟切片(HE，×640)

圖4 腎臟切片(HE，×640)

3.3 淋巴結(jié)的病理組織學(xué)變化 淋巴結(jié)中出現(xiàn)合胞體(圖5)。

圖5 淋巴結(jié)切片(HE，×400)

3.4 脾臟的病理組織學(xué)變化 脾小體周圍出血(圖6)。脾臟動(dòng)脈鞘缺少淋巴細(xì)胞，噬酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(圖7)。

圖6 脾臟切片(HE，×160)

圖7 脾臟切片(HE，×400)

3.5 肝臟的病理組織學(xué)變化 肝臟中可見肝小葉間結(jié)締組織增生(圖8)，還可見肝臟的液化性壞死灶(圖9)。

圖8 肝臟切片(HE，×160)

圖9 肝臟切片(HE，×400)

4 結(jié)論

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病豬的肺臟組織病理學(xué)變化非常明顯，可見肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張，有的肺泡破裂，見肺氣腫表現(xiàn)。還見到肺泡紅色漿液滲出、淤血、水腫，間質(zhì)增生性肺炎。腎臟在該病中的眼觀病變同樣非常明顯，可見腎小球萎縮，腎小管變性壞死，腎臟出血，腎小管破裂，表現(xiàn)慢性間質(zhì)性腎炎。

[1] 余旭平, 何世成, 吳海波等. 豬場(chǎng)空氣細(xì)菌數(shù)量與豬高熱綜合征的相關(guān)性研究[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2005, 31(1): 102-108.

[2] 朱軍莉, 余旭平, 時(shí)晗等. 豬圓環(huán)病毒復(fù)合PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科技.2004(2): 38-42.

[3] 張秀亮, 沈琴芳, 鄭新添等. 豬鏈球菌的鑒定及其PCR分型方法的建立[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005(9): 86-87.

[4] 袁佳杰, 張秀亮, 胡涵奎等. 豬高熱綜合癥的細(xì)菌分離鑒定[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2008, 20(6): 475-479.

（2012–10–23）

S852.16+6

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1007-1733(2013)01-0016-02