快速冷凍切片技術(shù)在門診活檢組織診斷中的應(yīng)用價值

羅慶豐 高 玟 詹名花 涂 侃 蔡 勇 黃傳生

本研究對我院923例患者門診活檢組織進行了快速冷凍切片診斷，現(xiàn)分析報告如下。

1 資料方法

1.1 一般資料

本組923例均為本院2006年3月至2008年10月的門診患者，男性496例，女性427例;年齡21～78歲，平均55.8歲。其中鼻咽組織382例，胃黏膜組織275例，食管黏膜組織114例，腸黏膜組織112例，宮頸組織40例。儀器與設(shè)備:德國生產(chǎn)microfreeze 550型低溫恒冷冷凍切片機。

1.2 方法

門診活檢的新鮮黏膜組織15 min內(nèi)送病理科，用OTC包埋劑包埋，冷凍固化后放入低溫恒冷冷凍切片機切片，連續(xù)切片4張，厚度為5 μm，AAF液固定，HE染色，樹膠封片，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察并做出診斷。冷凍切片剩余組織常規(guī)石蠟切片，最后將冷凍切片與標(biāo)本常規(guī)石蠟切片診斷結(jié)果對照［1］。

2 結(jié)果

923例門診活檢組織冷凍切片與常規(guī)切片診斷符合率分別為95.03%(363/382)、92.10%(105/114)、90.91%(250/275)、91.07%(102/112)、97.50%(39/40)。鼻咽組織漏診腫瘤例數(shù)為13例，其漏診率為3.40%;胃黏膜組織漏診腫瘤例數(shù)為13例，其漏診率為4.73%;食管黏膜組織漏診腫瘤例數(shù)為9例，其漏診率為7.89%;腸黏膜組織漏診腫瘤例數(shù)為10例，其漏診率為8.93%;宮頸組織漏診腫瘤例數(shù)為1例，其漏診率為2.5%，見表1。

表1 923例門診活檢組織冷凍切片的冷凍診斷結(jié)果

3 討論

門診活檢組織快速冷凍切片診斷時間短，能迅速提供準確的信息，既滿足患者及家屬迫切了解疾病情況的心理要求，又能快速為臨床決定手術(shù)方式提供依據(jù)。常規(guī)門診活檢標(biāo)本一般都要在72 h才能做出診斷報告，而快速冷凍切片檢查一般在30 min內(nèi)能做出診斷，這顯著縮短患者等待診斷結(jié)果的時間，同時診斷準確率達92.14%，能夠滿足臨床初步診斷的要求。

質(zhì)量良好的冷凍切片和有經(jīng)驗的病理診斷醫(yī)師是門診活檢組織冷凍切片診斷較高準確率的關(guān)鍵［2］。活檢小組織塊用OTC包埋劑支撐其底部(起墊高組織的作用)，包埋時注意將黏膜垂直包埋，以更好顯示病變，待其凝固后修平，然后將微細組織的待切面朝上放入墊高的OTC包埋劑中，再涂上適量OTC包埋劑，放入冷凍切片機內(nèi)繼續(xù)冷凍，使用吸熱錘壓平組織，使組織均勻快速下降溫度。由于各種組織的結(jié)構(gòu)不同，切片最適宜的溫度也不同，不能一概而論。對于活檢小組織一般溫度在-16℃至-18℃之間，冷凍時間相對短一些，肉眼觀察周圍全發(fā)白時及時修整，一般為5 min左右，避免冷凍時間過長，組織變脆，影響切片的完整性，切片時速度可相對慢且要勻速切片，過快會出現(xiàn)跳刀現(xiàn)象，制片出現(xiàn)裂痕。制作冷凍切片的另一個關(guān)鍵就是防止切片皺折，首先調(diào)節(jié)好防卷板，要求準確地調(diào)整至適當(dāng)?shù)奈恢?，調(diào)節(jié)固定好后，再不要輕易扭動。另外，要細心地使用毛筆將切片攤平。同時要注意清潔防卷板，防止污染和切片皺折。切片切好后要及時固定，適合冷凍切片的固定液也有多種(乙醇、甲醇、丙酮及混合固定液等)。我們使用AAF混合固定液(冰乙酸∶甲醛∶95%乙醇為8∶12∶80)，甲醛對組織起固定作用，乙醇收縮組織，冰乙酸起核蛋白沉淀作用，同時使組織膨脹，抵抗乙醇的收縮作用，保持組織的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。這樣染色后組織結(jié)構(gòu)清晰，細胞收縮小，染色鮮艷，核漿對比鮮明。

病理診斷醫(yī)生要充分了解患者基本情況，掌握臨床病史資料，聯(lián)合內(nèi)鏡下的大體情況，例如患者有無潰瘍及腫塊［3］，同時要充分了解冷凍切片下的組織學(xué)形態(tài)特征。顯微鏡下冷凍切片質(zhì)量與石蠟切片相比，有著細胞結(jié)構(gòu)模糊變形、核變大，容易變形、排列致密，有水腫，胞漿豐富等特征。如果診斷困難，應(yīng)立即科內(nèi)會診，并保持客觀、冷靜，從嚴掌握診斷標(biāo)準，把握病理性核分裂像、腫瘤組織浸潤等惡性特征，切忌主觀及片面，如有疑問應(yīng)重新活檢或等待石蠟切片，不可過度診斷［4］。本研究各種活檢組織中出現(xiàn)一定程度的漏診，其漏診率為鼻咽組織3.4%，胃黏膜組織4.7%，食管黏膜組織7.9%，腸黏膜組織8.1%，子宮頸組織為0。因為診斷指標(biāo)控制嚴格，本研究無腫瘤誤診比例出現(xiàn)，而且漏診率比例較低，同時有常規(guī)切片診斷的補救措施，能夠快捷地解決診斷中的問題。該研究結(jié)果與Winther C［5］及 Stewart等［6］結(jié)果相一致。

門診黏膜活檢組織快速冷凍切片診斷符合率高，可縮短診斷時間，減少患者就診等待時間，在我院的臨床病理工作中取得了良好效果，值得推廣應(yīng)用。

［1］羅慶豐，謝 梅，高 玟，等.冰凍切片及免疫組織化學(xué)技術(shù)在胸腹水細胞診斷中的應(yīng)用〔J〕.實用癌癥雜志，2007，22(4):363.

［2］侯巧燕，何 雯，張美艷.不同組織的快速冷凍切片技術(shù)探討〔J〕.廣西醫(yī)學(xué)，2008，30(10):1159.

［3］金鐵臣，邱建學(xué)，曹 軍.內(nèi)鏡活檢標(biāo)本冷凍切片在消化道癌快速診斷中的應(yīng)用〔J〕.安徽醫(yī)學(xué)，2004，25(4):330.

［4］葉 瓊，胡寶春，謝小云.冷凍切片在門診活組織檢查中的應(yīng)用及體會〔J〕.實用醫(yī)學(xué)雜志，2006，22(21):2536.

［5］Winther C，Graem N.accuracy of frozen section diagnosis:a retrospective analysisi of 4785 cases〔J〕.APMIS，2001，119(4):259.

［6］Stewart CJ，Brennan BA，Koay E，et al.value of cytology in the intraoperative asseeement of ovarian tumors:a review of 402 cases and comparison with frozen section diagnosis〔J〕.Cancer Cytopathol，2010，118(3):127.