STAT3與雌、孕激素受體在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性

黃 裕 姜青明 王 冬

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，近年來(lái)其發(fā)病率呈世界性持續(xù)上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡降低，呈現(xiàn)年輕化［1］。子宮內(nèi)膜癌在分子水平上的致癌機(jī)理尚不完全清楚，它的發(fā)生發(fā)展是多因素參與的結(jié)果，涉及多種癌基因的激發(fā)和抑癌基因的失活。STAT3是新發(fā)現(xiàn)的核轉(zhuǎn)錄因子，能介導(dǎo)機(jī)體中多種生長(zhǎng)因子信號(hào)及細(xì)胞因子信號(hào)向細(xì)胞核中傳導(dǎo)，從而影響腫瘤細(xì)胞的增殖及分化［2-5］。雌、孕激素是女性生殖系統(tǒng)中的重要激素，當(dāng)兩者水平紊亂時(shí)可刺激子宮內(nèi)膜，從而誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生［4］。本文將對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者中 ER、PR、STAT3表達(dá)情況進(jìn)行分析，并探討三者的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2012年1月至2013年3月收治的子宮內(nèi)膜癌患者30例為研究對(duì)象，患者經(jīng)病理組織學(xué)及影像學(xué)診斷證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌，所有患者均行手術(shù)治療且術(shù)前未接受放化療。患者年齡為36～76歲，平均年齡為(49.6 ±3.8)歲，患者腫瘤大小為0.8～5.9 cm，平均大小為(2.8±1.4)cm。病理學(xué)分級(jí):G1級(jí)10例，G2級(jí)12例，G3級(jí)8例。FIGO臨床分期(2009年):Ⅰ期11例，Ⅱ期10例，Ⅲ期8例，Ⅳ期1例;其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例。選取同期行普通查體的健康婦女30例為對(duì)照組，年齡為21～78歲，平均年齡為(48.8±4.2)歲。

1.2 方法

采用免疫熒光組化法檢測(cè)2組子宮內(nèi)膜組織中ER、PR、STAT3的表達(dá)。兔抗人STAT3多克隆體購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)公司，ER、PR鼠抗人多克隆抗體購(gòu)于北京金橋生物技術(shù)公司。以1∶150的濃度將兔抗體STAT3多克隆體稀釋，ER、PR鼠抗體多克隆抗為即用型。ER、PR采用EDTA熱修復(fù)處理20 min，STAT3采用檸檬酸緩沖液于高壓鍋中熱修復(fù)處理2 min后采用冷水洗滌，并采用PBS緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行沖洗，隨后依次在試樣板中加入一抗、二抗以及DAB進(jìn)行顯色反應(yīng)。經(jīng)蘇木精復(fù)染后采用乙醇對(duì)樣本脫水并制成中性樹膠封片，并與已知的陽(yáng)性切片進(jìn)行對(duì)比，陰性對(duì)照則采用PBS緩沖液替代一抗的樣本進(jìn)行參照。

1.3 免疫組化結(jié)果的判斷

①ER、PR陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒見(jiàn)于細(xì)胞核內(nèi)，STAT3陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒見(jiàn)于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)。②在倍數(shù)為100的顯微鏡下觀察細(xì)胞著色情況，根據(jù)著色程度由輕至重可分別記為0、1、2、3。隨機(jī)選取5個(gè)視野點(diǎn)，采用倍數(shù)為400的顯微鏡分別對(duì)5個(gè)視野進(jìn)行觀察，每個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并計(jì)算細(xì)胞的陽(yáng)性百分比(以500個(gè)細(xì)胞作為一組計(jì)算單位)，細(xì)胞陽(yáng)性百分率:1為＜10%，2為≥10%～50%，3為 ＞50%。積分計(jì)算:①與②計(jì)算所得的分值相乘。積分:0分為陰性“－”，1～3分為弱陽(yáng)性“+”，4～6分為中度陽(yáng)性“++”，7～9分為強(qiáng)陽(yáng)性“+++”［5］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示;組間計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用單因素分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR、STAT3 陽(yáng)性表達(dá)情況分析

子宮內(nèi)膜癌組織中ER、PR、STAT3陽(yáng)性表達(dá)率分別為 73.33%(22/30)、80.00%(24/30)、76.66%(23/30)，顯著高于對(duì)照組的 10.00%(3/30)、26.67%(8/30)、16.67%(5/30)，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 ER、PR、STAT3陽(yáng)性表達(dá)情況分析(例，%)

2.2 子宮內(nèi)膜臨床病理特征與ER、PR、STAT3陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌中STAT3、ER表達(dá)均與腫瘤臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05);而PR則與臨床分期及病理分級(jí)有關(guān)(P均＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 STAT3與ER及PR相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析可知，STAT3與ER激素呈正相關(guān)(γ =0.452，P=0.000)，與 PR 激素?zé)o相關(guān)(γ =0.1378，P=0.071)。

3 討論

研究表明，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生及進(jìn)展與原癌基因的激活、抑癌基因失活及受體異常有關(guān)，這些異常因素可導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路受阻，使得正常細(xì)胞的血管生成受到影響，促進(jìn)癌細(xì)胞血管生成，從而促進(jìn)癌細(xì)胞分化、生長(zhǎng)［6］。

STAT3具有促進(jìn)細(xì)胞增生、抑制細(xì)胞凋亡的作用，參與機(jī)體腫瘤的生成、發(fā)展及凋亡。研究證實(shí)細(xì)胞因子信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)主要是通過(guò)JAK/STAT途徑完成的，JAK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及STAT3途徑在細(xì)胞因子傳導(dǎo)過(guò)程中起重要作用［7］。STAT3是重要的核轉(zhuǎn)錄因子，主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)機(jī)體腫瘤被激活后，其與腫瘤DNA結(jié)合，并通過(guò)酪氨酸磷酸化途徑誘導(dǎo)絲氨酸激酶及YAK，調(diào)控靶基因，最終調(diào)控細(xì)胞的增生、分化、凋亡。在正常生理狀況下，STAT3的激活狀態(tài)持續(xù)的時(shí)間非常短，但對(duì)正常細(xì)胞生理功能起到重要的作用。大量研究表明腫瘤細(xì)胞中STAT3的活性顯著高于正常組織細(xì)胞，在胃癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤等惡性腫瘤中均可見(jiàn)STAT3的表達(dá)，提示STAT3表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。朱麗霞等［8］采用免疫組化法測(cè)定子宮內(nèi)膜組織中STAT3的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌患者中STAT3陽(yáng)性表達(dá)率為64%，而對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織中STAT3僅表達(dá)20%。

表2 臨床病理特征與ER、PR、STAT3陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系(例，%)

本研究中30例子宮內(nèi)膜癌患者中共發(fā)現(xiàn)23例患者STAT3表達(dá)為陽(yáng)性，總陽(yáng)性表達(dá)率為76.67%，顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織，與腫瘤臨床分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，而與患者年齡、腫瘤大小相關(guān)性不顯著，提示STAT3可能參與子宮內(nèi)膜癌的生成及轉(zhuǎn)移過(guò)程。

目前研究表明［9］，雌孕激素的過(guò)度分泌可刺激子宮內(nèi)膜增生，通過(guò)測(cè)定ER、PR水平可有效判斷子宮內(nèi)膜增生程度，ER、PR水平的上升與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生有密切關(guān)系。雌、孕激素受體傳導(dǎo)信號(hào)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展過(guò)程中有重要調(diào)控作用，ER屬于激素核受體家族中的一員，而PR則屬于類固醇激素受體家族成員。類固醇激素可直接通過(guò)核膜及細(xì)胞膜與細(xì)胞核內(nèi)受體結(jié)合，并能通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)癌基因進(jìn)行調(diào)控及表達(dá)［10］。周虹等［11］認(rèn)為，在激素的作用下可刺激子宮內(nèi)膜增生，萎縮性子宮內(nèi)膜盡管失去激素作用基礎(chǔ)，但在低激素水平刺激下可導(dǎo)致腺體活性過(guò)度，從而促使子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。廖化梅等［12］認(rèn)為ER、PR缺乏是引起子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，ER、PR可作為判斷子宮內(nèi)膜癌惡性程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。本研究中子宮內(nèi)膜癌組織中 ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率分別為73.33%、80.00%，ER 表達(dá)與腫瘤臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而PR則與臨床分期及病理分級(jí)有關(guān)，研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，ER、PR表達(dá)水平越低，腫瘤惡性程度越高，分化程度越低，患者預(yù)后越差。

近年相關(guān)研究表明［13］，雌激素可激活子宮內(nèi)膜癌患者中ER表達(dá)，并能通過(guò)非核轉(zhuǎn)導(dǎo)激活STAT3表達(dá)。本研究中STAT3與ER激素呈正相關(guān)(γ=0.452，P=0.000)，而與 PR 激素?zé)o相關(guān)(γ =0.1378，P=0.071)。通過(guò)上述研究可推測(cè)雌激素(ER)的調(diào)控與STAT3的表達(dá)關(guān)系密切，雌激素通過(guò)促進(jìn)胞質(zhì)中STAT3發(fā)生磷酸化激活，轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞核內(nèi)發(fā)揮生物功能。而這一過(guò)程與PR無(wú)相關(guān)性，提示PR陰性表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌患者還可能通過(guò)其他靶底物以不同機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，尚需探索新的研究方向。

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