復元膠囊對氣虛血瘀證模型大鼠血液高凝狀態(tài)的影響

李學榮 李榮亨 徐 丹 (重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院中西醫(yī)結合科，重慶 400016)

氣虛血瘀證是一組復雜的臨床癥候群，涉及多系統(tǒng)疾病。中醫(yī)理論認為：氣為血之帥，氣之與血，如影隨形，氣行則血行，氣虛則血瘀?！秲?nèi)經(jīng)》開創(chuàng)了氣血理論，王清任《醫(yī)林改錯》提出了氣虛血瘀學說，近年來通過對臨床研究、實驗動物模型、生物學基礎的研究，提出氣虛血瘀證存在血液濃、黏、凝、聚傾向，微循環(huán)障礙，凝血功能亢進，血管內(nèi)皮細胞受損和血栓栓塞性等病理特點〔1〕。本文從分子水平觀察血漿纖維蛋白原(Fg)、P-選擇素(P-sel)、D-二聚體(D-D)與氣虛血瘀證的關系以及具有益氣活血、補肝益腎的復元膠囊對凝血與纖溶功能的調節(jié)和改善作用，為補腎活血中藥防治氣虛血瘀證提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 動物 SD大鼠，16月齡，雌雄各半，體重600～800 g，重慶醫(yī)科大學動物實驗中心提供，動物合格證號：SCXK(渝)2007-0001。

1.2 藥物 復元膠囊，由黃芪、淫羊藿、川芎、當歸、枸杞等組成，具有補腎益氣活血的功效，由重慶希爾安藥廠生產(chǎn)。芪參膠囊，由黃芪、丹參、人參、三七、水蛭等組成，具有益氣活血，化瘀止痛之功效，由河南省新誼藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號：20103354。

1.3 試劑與儀器 ELISA試劑盒由上海源葉生物制劑公司提供。生產(chǎn)批號：20101227。ACL 200型自動凝血分析儀。

1.4 方法

1.4.1 造模、分組與給藥 將90只大鼠隨機分出20只為空白對照組。其余70只為模型組。空白對照組正常飲食，模型組按照氣虛血瘀模型建立大鼠模型〔2〕。方法是：①游泳：將大鼠置于涼水(14～16℃)中游泳，疲勞時撈出水面(疲勞標準以大鼠第一次自然下沉為度)，每日1次。②饑餓和高脂飲食：每只鼠按照大鼠體重40 g/kg標準〔3〕提供高脂飼料(每5 kg普通飼料加豬油l kg)，每天早上8：00點給予全天量的2/3，晚上8：00給予全天量的1/3。③寒濕：大鼠游泳完后，放置在通風的環(huán)境中自然晾干，不給予保溫措施和擦拭水跡。連續(xù)4 w，即出現(xiàn)精神萎頓、嗜睡、毛發(fā)枯黃脫落、輕度稀便、尾尖至根部出現(xiàn)輕度瘀血點等癥狀。1個月后隨機抽取10只空白對照組和10只模型組大鼠下腔靜脈血測定血液流變學，見表1。將剩余的60只模型組大鼠隨機分為復元膠囊低、中、高劑量組、芪參膠囊組及模型組，每組10只。根據(jù)Meeh-Rubner氏公式計算給藥劑量，芪參膠囊組給予 515.7 mg·kg－1.d－1，復元膠囊高、中、低劑量按 3∶1∶1/3〔4〕，分別給予 0.15、0.45 和 1.35 g·kg－1.d－1。模型組和空白組均給予生理鹽水10 ml/d灌胃，1次 d，連續(xù)4 w。

1.4.2 觀察指標 給藥1個月后，取大鼠下腔靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，離心后取血漿置于－20℃的冰箱里保存。有ELISA雙抗體夾心法檢測血漿P-sel和D-D的含量，嚴格按照試劑盒說明書操作。用凝血酶法(ACL 200型自動凝血分析儀)測定血漿Fg的含量。指標測定在重慶醫(yī)科大學眼科實驗室完成。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，計量資料用s表示，采用LSD-t檢驗進行兩兩比較。

2 結果

2.1 各組大鼠大鼠Fg、P-sel及D-D的變化 表1可見，復元膠囊低、中、高劑量組，芪參膠囊組治療1個月后與模型組相比較，血漿Fg，P-sel，D-D含量均偏低(P＜0.05)。其中復元膠囊中、高劑量組與復元膠囊低劑量組比較，血漿Fg，P-sel，D-D含量差異顯著(P＜0.05)，但是復元膠囊中劑量和高劑量組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，各組大鼠大鼠Fg、P-sel及D-D的變化。

表1 各組大鼠Fg、P-sel及D-D的變化( s ，n=10)

表1 各組大鼠Fg、P-sel及D-D的變化( s ，n=10)

與模型組比較：1)P＜0.05;與芪參膠囊組比較：2)P＜0.05，與復元膠囊低劑量組比較：3)P＜0.05

組別 Fg(g/L)P-sel(pg/ml)D-D(mg/L)1.59±0.11 25.48±0.16 1.40±0.13模型組 3.41±0.14 40.42±0.14 3.57±0.10芪參膠囊組 2.80±0.101) 36.44±0.171) 2.49±0.161)復元膠囊低劑量組 2.23±0.142) 34.30±0.122) 2.03±0.152)復元膠囊中劑量組 1.96±0.133) 28.95±0.433) 1.83±0.133)復元膠囊高劑量組 1.90±0.143) 28.75±0.123) 1.81±0.143)空白對照組

2.2 兩組大鼠血液流變學變化 模型組與空白對照組比較，血液流變學各項指標均偏高(P＜0.05)，模型組大鼠血液流變學變化見表2。

表2 兩組大鼠血液流變學的變化( s ，n=10)

表2 兩組大鼠血液流變學的變化( s ，n=10)

與空白對照組比較：1)P＜0.05

組別 全血黏度高切200/s 全血黏度中切100/s 全血黏度低切3/s 血漿黏度(mpas)紅細胞聚集指數(shù)(Arbc)紅細胞電泳時間(s)空白對照組 5.04±0.15 6.58±0.18 9.63±0.10 1.41±0.10 6.30±0.34 18.29±0.47模型組 6.40±0.121) 8.67±0.131) 12.34±0.141) 1.87±0.121) 8.71±0.381) 26.20±0.721)

3 討論

高凝狀態(tài)是指多種病理因素引起的機體血管內(nèi)皮細胞損傷、血小板、凝血、纖溶以及體內(nèi)抗凝系統(tǒng)等功能失調，血液的凝固性增高，有利于血栓形成的病理狀態(tài)〔5，6〕。已有研究表明，氣虛血瘀證的病理生理變化與促凝因子增加，抗凝因子及纖溶活性物質減少有關〔7〕。Fg是血中含量豐富的一種糖蛋白，在凝血、止血過程中有重要的作用〔8〕，F(xiàn)g主要是通過以下途徑參與凝血調節(jié)：①在凝血酶的作用下，肽鏈離解，分子結構改變導致聚合反應，形成網(wǎng)狀結構的纖維蛋白多聚體。②與血小板膜糖蛋白的Ⅱb/Ⅲa結合，介導血小板聚集反應而影響血流黏滯度〔9〕。血小板活化與血管內(nèi)皮細胞的損傷是血栓形成的始發(fā)環(huán)節(jié)，P-sel則是一種富含半胱氨酸、高度糖化的整合蛋白質，它只在活化的血小板表面上表達，并可釋放到血漿中，這是血漿P-sel的主要來源?，F(xiàn)在認為P-sel可作為體內(nèi)血小板活化程度和血栓形成的標志物〔10〕。D-D是交聯(lián)纖維蛋白纖溶酶水解后降解的終末產(chǎn)物中的一種特殊碎片，其含量的增高可作為體內(nèi)血栓形成的分子標志之一〔11〕，提示體內(nèi)存在繼發(fā)性纖溶活性的增高。已有研究表明，氣虛血瘀患者血漿D-D含量高于正常人〔12〕。

本研究揭示了氣虛血瘀證大鼠存在高凝狀態(tài)和繼發(fā)性纖溶亢進，復元膠囊低、中、高劑量組，芪參膠囊組都能降低血漿Fg，P-sel，D-D含量，但是復元膠囊中、高劑量組的效果更為明顯。復元膠囊高劑量組與中劑量組差別無統(tǒng)計學意義，故治療量為中劑量即可，以免引起胃腸道不適及毒副作用。

中醫(yī)認為，“諸臟之陽，全賴腎陽以熙之，諸臟之陰，全賴腎陰以濡之”，故腎為人之根本。腎精不足可導致腎氣虧虛，無力溫煦，臟腑四肢百骸失其濡養(yǎng)，功能失調，并影響氣血運行，進一步加重血瘀〔13〕。復元膠囊由黃芪、淫羊藿、川芎、當歸、枸杞等組成，具有補腎益氣活血的功效，能從根本上改善氣虛血瘀證大鼠血液高凝狀態(tài)，降低血漿Fg、P-sel及D-D的含量。但是由于本實驗的局限性，藥物作用在哪些靶點等問題有待進一步研究。

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