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      吳茱萸堿對S180荷瘤小鼠抑瘤作用及血常規(guī)的影響

      2013-11-20 08:31:18李立宏蔣麗娜石永威張曉麗賈天軍河北北方學(xué)院河北張家口075000
      中國老年學(xué)雜志 2013年1期
      關(guān)鍵詞:荷瘤吳茱萸環(huán)磷酰胺

      李立宏 蔣麗娜 石永威 張曉麗 孫 黎 羅 強 賈天軍 (河北北方學(xué)院,河北 張家口 075000)

      吳茱萸堿是傳統(tǒng)中藥吳茱萸的主要生物堿之一。近來發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿有很強的抗腫瘤作用,體外實驗發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿可抑制人乳腺癌細(xì)胞〔1〕、前列腺腫瘤細(xì)胞〔2〕、小鼠肝癌細(xì)胞〔3〕、人胃癌細(xì)胞〔4〕、人白血病細(xì)胞〔5〕等的腫瘤細(xì)胞株,并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,能抑制腫瘤血管生成及浸潤轉(zhuǎn)移。有關(guān)吳茱萸堿在動物整體抗腫瘤方面的研究很少見到。本實驗觀察了吳茱萸堿對S180荷瘤小鼠的抑瘤作用,以及對血細(xì)胞的影響,為吳茱萸堿的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。在實驗動物模型基礎(chǔ)上進行整體研究,進一步探討吳茱萸堿體內(nèi)的抑瘤作用及其抑瘤機制,這既是全面、客觀評價吳茱萸堿抗腫瘤作用的需要,也是將來應(yīng)用于臨床之前所必需提供的實驗依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 材料 吳茱萸堿均購自南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司(批號:ZL081012GC)。注射用環(huán)磷酰胺(200 mg/支,批號:06112020),購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司。小鼠肉瘤S180腹水型腫瘤細(xì)胞由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供,本院實驗中心凍存。昆明小鼠,體重18~22 g,清潔級,購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物室。BC-2000血液分析儀(深圳邁瑞公司)及配套試劑。

      1.2 小鼠S180肉瘤移植瘤模型建立 小鼠肉瘤S180腹水型腫瘤細(xì)胞株接種于小鼠腹腔,7 d后,脫頸椎處死,置于75%的乙醇浸泡5 min消毒,無菌抽取腹水瘤細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度為1.3×107/ml,于昆明種小鼠左后肢行無菌皮下接種0.2 ml細(xì)胞懸液,于30 min內(nèi)接種完成。接種后第6天全部出現(xiàn)瘤塊,小鼠移植瘤模型全部成功。

      1.3 實驗動物分組及處理 接種后將小鼠按體重隨機分為3組:模型組(0.5%羧甲基纖維素鈉,劑量10 ml/kg)、陽性對照組(給予環(huán)磷酰胺,劑量50 mg/kg)、吳茱萸堿組(給予吳茱萸堿,劑量50 mg/kg)。每組小鼠10只,雌雄各半。接種后第6天,腫瘤模型組和吳茱萸堿組每日灌胃一次,連續(xù)12次,陽性對照組隔日給藥一次,腹腔注射,連續(xù)6次。于停藥當(dāng)日從尾部采集血液,于2 h內(nèi)測試完畢。停藥后次日處死。

      1.4 實驗指標(biāo) 每日觀察各組實驗動物的生長情況。停藥后次日,處死全部動物,剝?nèi)×鰤K,稱重,按公式計算抑瘤率。各組瘤體組織標(biāo)本常規(guī)固定,脫水,透明,包埋,切片,HE染色觀察。于停藥當(dāng)日從尾部采集血液20 μl,預(yù)稀釋后于2 h內(nèi)測試完畢。按照儀器說明書操作,使用配套試劑,測試前先做室內(nèi)質(zhì)控,保證儀器質(zhì)控狀態(tài)良好。

      2 結(jié)果

      2.1 實驗動物生長情況 結(jié)果顯示,昆明小鼠接種S180后,模型組小鼠進食量明顯減少,精神狀態(tài)較差,行動欠靈活,皮毛發(fā)澀。而吳茱萸堿給藥組的小鼠,其進食量及運動狀態(tài)均好于模型組,皮毛順滑;在吳茱萸堿組,有1只小鼠的腫物出現(xiàn)明顯的破皮結(jié)痂現(xiàn)象。

      2.2 吳茱萸堿對小鼠S180肉瘤腫瘤模型生長的抑制作用。見表1。吳茱萸堿對腫瘤抑制率43.6%,且抑制率與模型對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),說明吳茱萸堿在體內(nèi)有較強的抗腫瘤作用。

      表1 吳茱萸堿對小鼠S180肉瘤腫瘤模型生長的抑制作用(n=10)

      2.3 小鼠S180肉瘤組織病理學(xué)變化 HE染色,顯微鏡觀察。腫瘤模型組腫瘤細(xì)胞生長旺盛,腫瘤細(xì)胞大小不一,胞核有明顯異型性,可見瘤組織呈巢狀或片狀生長,壞死不明顯,片狀壞死區(qū)面積較小,可見癌巢間微血管較豐富,周圍有程度不等的炎性細(xì)胞浸潤。環(huán)磷酰胺組有大片的腫瘤細(xì)胞壞死區(qū),甚至80%~90%的區(qū)域壞死,瘤組織呈片狀或團狀生長。吳茱萸堿組均可見不同程度的片狀壞死區(qū)域,瘤組織內(nèi)的微血管減少,周圍有程度不等的炎性細(xì)胞浸潤。

      2.4 吳茱萸堿對S180肉瘤荷瘤小鼠外周血血常規(guī)的影響見表2。吳茱萸堿(劑量50 mg/kg)能升高S180荷瘤小鼠外周血的白細(xì)胞(P<0.05),對其他血細(xì)胞(紅細(xì)胞和血小板)的影響不大。

      表2 吳茱萸堿對S180肉瘤荷瘤小鼠外周血血常規(guī)的影響( s ,n=10)

      表2 吳茱萸堿對S180肉瘤荷瘤小鼠外周血血常規(guī)的影響( s ,n=10)

      與模型組比較:1)P <0.05,2)P <0.01

      組別 白細(xì)胞(×109/L)血小板(×109/L)紅細(xì)胞(×1012/L)血紅蛋白(g/L)±23.10陽性對照組 7.40±2.252)1 071.75±315.94 6.90±1.44 125.20±21.44吳茱萸堿組19.45±4.751)模型組 15.19±4.51 1 315.00±120.91 7.67±1.53 130.50 1 077.70±175.14 8.80±1.69 152.60±29.00

      3 討論

      目前,臨床使用的抗腫瘤藥物大多存在毒副作用強、對機體損害大的不良反應(yīng),尋求安全有效、低毒的抗腫瘤藥物一直受到國內(nèi)外醫(yī)藥界專家學(xué)者的高度重視。最近發(fā)現(xiàn)吳茱萸堿有很強的抗腫瘤作用,但這些報導(dǎo)多為體外抗腫瘤作用研究,有關(guān)其在動物整體抗腫瘤方面的研究少見報道。本實驗顯示吳茱萸堿作用于S180荷瘤小鼠的抑瘤率為43.6%,抑制作用較強,但不及環(huán)磷酰胺的抑瘤作用,吳茱萸堿作為抗腫瘤藥有較大的開發(fā)潛力。宋穎等〔6〕也研究了吳茱萸堿對小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌腹水型HepA的影響,小鼠左腋部皮下分別接種S180和HepA,灌胃給藥,連續(xù)給藥10 d,結(jié)果顯示吳茱萸堿對S180和 HepA的生長均具有明顯的抑制作用,20、10和5 mg/kg吳茱萸堿,可使抑瘤率達(dá)到30% ~60%左右。

      眾所周知,環(huán)磷酰胺在臨床應(yīng)用中的副作用明顯,主要表現(xiàn)為骨髓抑制,導(dǎo)致白細(xì)胞和血小板減少以及貧血。本文也觀察到陽性對照組的白細(xì)胞數(shù)量明顯低于腫瘤模型組,而吳茱萸堿對S180荷瘤小鼠外周血的白細(xì)胞數(shù)不但無降低作用,而且有升高作用。提示吳茱萸堿抗腫瘤作用機制之一可能是通過增加荷瘤小鼠外周血白細(xì)胞的數(shù)量,從而抑制腫瘤的生長,達(dá)到抗腫瘤的目的。宋朝陽等〔7〕將8周齡雄性C57BL/6小鼠處死,取胸腺、脾組織研磨過濾為單細(xì)胞懸液,MTT顯示當(dāng)濃度≥0.5 μmol/L時,吳茱萸堿在24、48和72 h均明顯抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠胸腺、脾淋巴細(xì)胞增殖;吳茱萸堿處理的小鼠脾和胸腺細(xì)胞釋放IL-2、IL-12的功能較對照組明顯減低。因此,需進一步研究吳茱萸堿對荷瘤小鼠免疫能力的影響,以及吳茱萸堿與環(huán)磷酰胺聯(lián)合應(yīng)用,能否對抗環(huán)磷酰胺引起的白細(xì)胞數(shù)下降,從而達(dá)到減毒增效作用。

      1 Liao CH,Pan SL,Guh JH,et al.Antitumor mechanism of evodiamine a constituent from Chinese herb Evodiae fructus in human multiple-drug resistant breast NCI/ADR-RES cells in vitro and in vivo〔J〕.Carcinogen-esis,2005;26(5):968-75.

      2 Huang DM,Guh JH,Huang YT,et al.Induction of mitotic arrest and apoptosis in human prostate cancer pc-3 cells by evodiamine〔J〕.J Urol,2005;173(1):256-61.

      3 譚宇蕙,吳映雅,鐘富有,等.吳茱萸堿對小鼠肝癌細(xì)胞生長的抑制和誘導(dǎo)凋亡作用〔J〕.中國藥理與臨床,2006;22(3-4):33-5.

      4 譚宇蕙,陳蔚文,吳映雅,等.小檗堿、吳茱萸堿和靛玉紅對人胃癌細(xì)胞的作用比較〔J〕.世界華人消化雜志,2005;13(4):472-6.

      5 Lee TJ,Kim EJ,Kim S,et al.Caspase-dependent and caspase-independent apoptosis induced by evodiamine in human leukemic U937 cells〔J〕.Mol Cancer Ther,2006;5(9):2398-407.

      6 宋 穎,趙文杰,宋 宇,等.吳茱萸堿體內(nèi)抗腫瘤作用研究〔J〕.吉林中醫(yī)藥,2008;28(12):934-6.

      7 宋朝陽,鄧 蘭,胡海燕,等.吳茱萸堿對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用〔J〕. 中藥材,2008;31(6):885-8.

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