胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2蛋白的表達(dá)

陳 浩，許 浪

1)荊州市中心醫(yī)院胃腸外科 荊州 434100 2)武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室 武漢 430064

胃癌是消化道常見惡性腫瘤之一，在我國(guó)胃癌呈高發(fā)狀態(tài)，每年新發(fā)病例占全球的40%[1]。1，25-二羥維生素D3既是一種維生素，也是一種類固醇激素，其通過與免疫細(xì)胞中的維生素D受體結(jié)合，特異性作用于靶組織而發(fā)揮作用，與多科疾病有關(guān)[2-3]。作為一種全新的抗腫瘤藥物，1，25-二羥維生素D3在肺、乳腺、前列腺、結(jié)腸等腫瘤的化療中有重要價(jià)值[4]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 (transforming growth factor β1，TGF-β1)是一種多功能的細(xì)胞因子，其介導(dǎo)的TGF-β/Smads信號(hào)通路與多種腫瘤的發(fā)生及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。作者對(duì)胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1及Smad2蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，初步探討1，25-二羥維生素D3及TGF-β/Smads信號(hào)通路與胃癌的關(guān)系，以期為胃癌的治療提供新的方向。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本收集荊州市中心醫(yī)院病理實(shí)驗(yàn)室手術(shù)切除的凍存胃癌標(biāo)本93例。患者年齡41～76(50.1±7.2)歲，其中男56例，女37例；按2010年WHO標(biāo)準(zhǔn)，高、中分化 53例，低分化和未分化40例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期 41例，Ⅲ、Ⅳ期52例；未浸及漿膜層48例，浸及漿膜層45例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例?；颊咝g(shù)前未進(jìn)行任何放、化療。另取30例正常胃黏膜組織作為對(duì)照。

1.2主要試劑與儀器1，25-二羥維生素D3免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海研吉生物科技有限公司；TGF-β1及Smad2免疫組化檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；FITC-IgG、兔抗人TGF-β1多克隆抗體、兔抗人Smad2多克隆抗體、PBS緩沖液均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。M388834酶標(biāo)儀購(gòu)自西化儀北京科技有限公司。

1.3 1，25-二羥維生素D3、TGF-β1及Smad2蛋白的檢測(cè)用免疫組化 SP 法檢測(cè)。將組織標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片，脫蠟水化，在EDTA緩沖液中修復(fù)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固，鏡下觀察。細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片觀察5個(gè)以上視野(×400)，共計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。按陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)評(píng)分，≤10%為 1分，>10%且≤50%為 2分，>50%且≤75%為3分，>75%為4分；同時(shí)根據(jù)染色程度評(píng)分，無(wú)染色為1分，弱染色為2分，中度染色為3分，強(qiáng)染色為4分。以兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)的乘積表示目標(biāo)蛋白表達(dá)水平[5]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，胃癌與正常胃黏膜組織及不同臨床病理特征胃癌組織中3種蛋白表達(dá)水平的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)分析對(duì)胃癌組織中3種蛋白表達(dá)水平的關(guān)系進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1正常胃黏膜和胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)1，25-二羥維生素D3、TGF-β1陽(yáng)性信號(hào)定位于胞質(zhì)和胞核，為粗細(xì)不一的棕黃色深染顆粒；Smad2蛋白陽(yáng)性信號(hào)主要位于胞質(zhì)，少數(shù)位于胞核，為棕黃色深染顆粒，見圖1。1，25-二羥維生素D3在胃癌組織中的表達(dá)水平低于正常胃黏膜組織，TGF-β1和Smad2在胃癌組織中的表達(dá)水平高于正常胃黏膜組織，見表1。

圖1 正常胃黏膜和胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)(SP，×200)

2.2 1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)與胃癌的分化程度、臨床分期、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，見表2。

2.3胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)Pearson相關(guān)分析，胃癌組織中1，25-二羥維生素D3與TGF-β1、Smad2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.583、-0.462，P<0.001)，TGF-β1與Smad2的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.425，P<0.001)。

表1 正常胃黏膜和胃癌組織中1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)

表2 1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

細(xì)胞內(nèi)游離鈣和需鈣蛋白酶在細(xì)胞分化中起著重要作用。作為維生素D最主要的活性形式，1，25-二羥維生素D3在鈣、磷代謝中起重要作用。因此1，25-二羥維生素D3可能與腫瘤的發(fā)生與分化轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。盧娟等[6]研究認(rèn)為1，25-二羥維生素D3可明顯抑制胃癌細(xì)胞分化，促進(jìn)凋亡，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。作者觀察到，胃癌組織中1，25-二羥維生素D3的表達(dá)水平低于正常胃黏膜組織，同時(shí)低分化胃癌組織中1，25-二羥維生素D3的表達(dá)水平低于高分化胃癌組織，由此推測(cè)1，25-二羥維生素D3的表達(dá)下降導(dǎo)致體內(nèi)鈣代謝紊亂，從而抑制了腫瘤細(xì)胞的分化。

TGF-β/Smads信號(hào)通路在腫瘤發(fā)生的開始階段具有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的功能，而在進(jìn)展期則起著促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的作用，此信號(hào)通路中任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常都可導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的紊亂，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。Smads 蛋白是 TGF-β信號(hào)通路中的重要成員，是將 TGF-β信號(hào)從細(xì)胞外轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)的關(guān)鍵因素。已有文獻(xiàn)[8]報(bào)道，TGF-β1在胃癌組織中呈高表達(dá)，并能增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲力和惡性程度。該研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中TGF-β1和Smad2表達(dá)水平均高于正常胃黏膜組織，低、未分化胃癌組織中TGF-β1和Smad2的表達(dá)水平高于高、中分化胃癌組織，與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致。

作者還觀察到，胃癌組織中1，25-二羥維生素D3與TGF-β1、Smad2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，TGF-β1與Smad2的表達(dá)呈正相關(guān)；1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2的表達(dá)水平與胃癌的分化程度、臨床分期、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；提示1，25-二羥維生素D3、TGF-β1和Smad2參與了胃癌的分化、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。有研究[9-10]報(bào)道，1，25-二羥維生素D3可以抑制TGF-β1的表達(dá)及其生物活性。由此推測(cè)，1，25-二羥維生素D3表達(dá)下調(diào)，通過調(diào)控TGF-β/Smads信號(hào)通路使TGF-β1及Smad2表達(dá)升高，3者共同參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，1，25-二羥維生素D3可能通過調(diào)控TGF-β/Smads信號(hào)通路參與胃癌的發(fā)生發(fā)展，這為胃癌的治療提供了新思路。

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