Glut-1的表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者同步放化療預(yù)后的關(guān)系

樊銳太，宋 銳，王 鑫，吳 競，孫銀銀，劉 云

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院放療科 鄭州450052

有研究[1-2]報道，食管鱗狀細(xì)胞癌(食管鱗癌)單純手術(shù)切除的患者5 a生存率約為20%；對于絕大多數(shù)中晚期患者，同步放化療5 a生存率可達(dá)30%。尋找一個可靠的指標(biāo)來預(yù)測同步放化療的療效對提高腫瘤控制率有重要價值。研究[3]表明，葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(glucose transporter-1，Glut-1)在食管鱗癌組織中高表達(dá)，且與外科術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)及預(yù)后不良密切相關(guān)，然而Glut-1對于食管鱗癌患者同步放化療預(yù)后影響的相關(guān)報道較少。為此，作者分析了Glut-1蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其與放化療療效的關(guān)系，報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象收集2008年1月至2010年1月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院放療科收治的接受同步放化療的42例食管癌患者，均經(jīng)纖維食管鏡活檢病理確診為食管鱗癌，全部病例均為初治。其中男30例，女12例，年齡38～82歲，中位年齡63歲。病變部位：食管頸段、胸上段、胸中段、胸下段分別為10例、11例、15例、6例。卡氏評分均≥70分，無明顯的放化療禁忌證及嚴(yán)重的心腦血管疾病病史，預(yù)計生存時間≥6個月。所有患者放療前行胸部CT、食管鋇餐造影，腹部、淋巴結(jié)B超及血常規(guī)生化檢查，按照陳建洲等[4]關(guān)于非手術(shù)治療食管鱗癌臨床分期的標(biāo)準(zhǔn)，42例患者中T1-2期20，T3-4期22例；N0期17例，N1-2期25例；M0期35例，M1期7例。治療前簽署放化療同意書。所有患者均取纖維食管鏡活檢病變組織制作石蠟標(biāo)本，另取20例正常食管黏膜組織標(biāo)本作對照。

1.2放射治療采用三維適形放療(3D-CRT)?；颊呷⊙雠P位，雙手抱頭，以熱塑體膜固定體位，增強(qiáng)CT下模擬定位，病變區(qū)域CT掃描層厚3 mm，將掃描圖像傳輸至Brain Lab治療計劃系統(tǒng)，進(jìn)行三維重建，根據(jù)CT掃描圖像、食管鋇餐及胃鏡顯示的病變長度及縱隔淋巴結(jié)大小勾畫大體腫瘤體積(GTV)，以GTV四周外放1 cm、上下外放2～3 cm構(gòu)成臨床靶體積(CTV)，計劃靶體積(PTV)為CTV外放0.5 cm，以95%的等劑量曲線包括PTV作為處方劑量，同時勾畫出危及器官(OAR)和鄰近組織，計劃要求[5]脊髓劑量<40 Gy，肺V20[即全肺(扣除靶區(qū)PTV)接受20 Gy以上治療的肺體積的百分比]<25%。采用西門子直線加速器6 MV X線，5～8個共面野照射，常規(guī)分割1.8～2.0 Gy/次，1次/d，5次/周，總劑量54～70 Gy。

1.3化學(xué)治療42例患者中，除2例T1N0M0患者未行同步化療外，其余40例均從放射治療開始前5 d給予順鉑75 mg/m2(第1天或分割為第1～4天)+5-FU 800 mg/m2(第1～5天)，21 d為1個周期，至少應(yīng)用2周期。應(yīng)用順鉑時給予大量水化、利尿，應(yīng)用阿扎司瓊、胃復(fù)安預(yù)防消化道反應(yīng)，應(yīng)用粒細(xì)胞集落刺激因子改善骨髓抑制造成的白細(xì)胞減少，同時給予充分的支持治療。治療期間每周行血常規(guī)檢查1次，每2周行肝腎功能及生化檢查1次。所有患者平均化療3.97個周期。

1.4Glut-1蛋白表達(dá)的免疫組化檢測全部標(biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片, 采用免疫組化SP法染色。兔抗人Glut-1多克隆抗體(即用型)和SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司，按照說明書步驟操作，DAB顯色，用已知陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。Glut-1以胞膜或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。判定標(biāo)準(zhǔn)：無色得0分，淺黃色得1分，棕黃色得2分，棕褐色得3分；按照陽性細(xì)胞百分比打分(在高倍光學(xué)顯微鏡下選擇5個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞)，<10%得0分，10%～得1分，25%～得2分，>50%得3分。兩項得分相乘為最終得分，≤2分定義為低表達(dá)，≥3分為高表達(dá)。

1.5療效評價放療結(jié)束時及結(jié)束后3個月內(nèi)行胸部CT增強(qiáng)掃描、食管鋇餐造影及頸部淋巴結(jié)、腹部彩超檢查評價療效，參照RECIST標(biāo)準(zhǔn)[6]進(jìn)行療效評價：完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，無效(NR)。局部控制時間：從開始治療至疾病的局部復(fù)發(fā)的時間。生存時間：從開始治療至死亡的時間。

1.6隨訪患者放療后1 a內(nèi)每3個月復(fù)查1次，1 a以后每6個月復(fù)查1次，通過查閱病歷、電話、郵件等方式隨訪至2012年10月，全部患者中28例死亡，其中1例死于突發(fā)腦血管意外；14例仍在隨訪中。

1.7統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行分析，應(yīng)用χ2檢驗比較不同臨床病理特征人群Glut-1表達(dá)率的差異。應(yīng)用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，用log-rank檢驗比較Glut-1高、低表達(dá)組放化療療效的差異，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1食管鱗癌組織中Glut-1的表達(dá)Glut-1的表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞膜，著色深度不等，呈現(xiàn)連續(xù)或顆粒狀的棕黃色。42例食管鱗癌組織中Glut-1蛋白高表達(dá)17例(40.5%)，20例正常食管黏膜組織中高表達(dá)2例(10.0%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.921，P=0.015)，見圖1。

圖1 食管鱗癌組織(A)和正常食管黏膜組織(B)中Glut-1蛋白的表達(dá)(SP，×400)

2.2Glut-1的表達(dá)與食管鱗癌各臨床病理特征的關(guān)系見表1。Glut-1高表達(dá)與臨床T、N、M分期有關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、性別、腫瘤病變部位無關(guān)(P>0.05)。

表1 Glut-1表達(dá)與食管鱗癌各臨床病理特征的關(guān)系 例

*校正χ2檢驗。

2.3Glut-1的表達(dá)與食管鱗癌放化療療效的關(guān)系

42例患者均順利完成放療。放療結(jié)束后3個月評價療效，Glut-1蛋白高表達(dá)和低表達(dá)組近期CR率分別為52.9%(9/17)和88.0%(22/25)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.748，P=0.029)。2組1、2、3 a局部控制率分別為58.8%、29.4%、17.6%和80.0%、64.0%、36.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.736，P=0.028)(圖2)；2組中位生存期分別為19個月和35個月，1、2、3 a生存率分別為64.7%、35.3%、17.6%和88.0%、68.0%、44.0%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.542，P=0.016)(圖3)。

圖2 Glut-1的表達(dá)與食管鱗癌放化療的關(guān)系(局部控制曲線)

圖3 Glut-1的表達(dá)與食管鱗癌放化療的關(guān)系(生存曲線)

3 討論

腫瘤細(xì)胞的主要特點[7]是持續(xù)生長、快速增殖，對葡萄糖的攝取和代謝處于持續(xù)增高狀態(tài)，這種高代謝狀態(tài)使細(xì)胞耗氧量不斷增加，造成腫瘤微環(huán)境缺氧，為適應(yīng)缺氧微環(huán)境，腫瘤細(xì)胞通過無氧酵解來滿足腫瘤生長對能量的高需求。糖代謝增強(qiáng)過程由葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白家族介導(dǎo)[8]，其中以Glut-1分布最廣。Glut-1是哺乳動物葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運的主要載體，隨著代謝的增加，腫瘤組織中Glut-1蛋白進(jìn)一步增加，Glut-1的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞缺氧和葡萄糖代謝的增加密切相關(guān)。國內(nèi)外許多學(xué)者研究[9-12]發(fā)現(xiàn)，在乳癌、頭頸部腫瘤、胃癌和非小細(xì)胞肺癌等許多惡性腫瘤中，Glut-1蛋白表達(dá)均明顯增高，并且認(rèn)為Glut-1過表達(dá)是預(yù)后不良的標(biāo)志。

該研究結(jié)果顯示食管鱗癌組織中Glut-1蛋白高表達(dá)率高于正常食管黏膜組織，與Hiyoshi 等[3]研究結(jié)果近似，說明Glut-1蛋白與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。作者根據(jù)免疫組化染色結(jié)果將全部患者分為Glut-1蛋白高表達(dá)組和低表達(dá)組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Glut-1高表達(dá)與食管鱗癌臨床T、N、M分期有關(guān)，與患者年齡、性別、腫瘤病變部位無關(guān)，這與許潔等[13]的研究結(jié)果一致。

作者觀察同步放化療后Glut-1蛋白高低表達(dá)患者的預(yù)后，發(fā)現(xiàn)Glut-1蛋白高表達(dá)者近期CR率、中位生存期、局部控制率和生存率均低于低表達(dá)組，表明Glut-1蛋白對于食管鱗癌患者局部控制和預(yù)后均有重要影響。組織乏氧和細(xì)胞增殖活性的不斷增加是導(dǎo)致放化療抵抗的主要原因，腫瘤微環(huán)境缺氧和葡萄糖攝取量的增加導(dǎo)致Glut-1表達(dá)增加，致使同步放化療效果不佳。

總之，該研究初步探討了Glut-1蛋白對食管鱗癌患者同步放化療預(yù)后的影響，Glut-1高表達(dá)患者的放化療效果不佳，但其具體作用機(jī)制以及較為針對性的治療措施還需進(jìn)一步研究。

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