奧氮平有關(guān)物質(zhì)的HPLC檢查法研究

林 潔，程煜鳳，康秋梅，李祖琨，李 丹，康天懌，徐小平

（1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610041；2.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011）

0 引 言

奧氮平（olanzapine）化學(xué)名為 2-甲基-4-（4-甲基-1-哌嗪基-）-10H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜卓，是一種非典型抗精神病藥，可有效改善精神分裂的陽(yáng)性及陰性癥狀，錐體外系反應(yīng)[EPS]發(fā)生率低[1]，具有神經(jīng)保護(hù)作用[2]，可改善老年期癡呆的精神行為癥狀，廣泛用于治療多種精神疾病[3-6]。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于美國(guó)藥典（USP34-NF29）及國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS1-（X-181）-2004Z）中。針對(duì)其有關(guān)物質(zhì)研究的文獻(xiàn)資料較少，且主要采用高效液相色譜法[7]進(jìn)行檢查，所報(bào)道的色譜條件及限度有較大差異。本文在對(duì)比驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)方法和實(shí)驗(yàn)室建立的方法基礎(chǔ)上，根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的分離個(gè)數(shù)、分離度、峰高和分析時(shí)間，篩選并優(yōu)化出奧氮平有關(guān)物質(zhì)檢查的HPLC條件，為奧氮平質(zhì)量研究提供快速、簡(jiǎn)便、靈敏的方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 儀器

Shimadzu LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司），色譜工作站（日本島津公司）；純水儀（成都品成科技有限公司）；BP211D型十萬(wàn)分之一電子分析天平；KL10260D超聲波清洗器。

1.2 試劑

奧氮平對(duì)照品（批號(hào)：100948-200801，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；奧氮平原料藥（批號(hào)：ODOON1206001，浙江新華制藥有限公司）；乙腈為色譜純（廣東光華科技股份有限公司）；甲醇為色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），純化水，其他試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 奧氮平有關(guān)物質(zhì)研究的3種HPLC方法比較

參照奧氮平在美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)（USP34-NF29，以下簡(jiǎn)稱USP法）、國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS1-（X-181）-2004Z，以下簡(jiǎn)稱WS法）和實(shí)驗(yàn)室參照文獻(xiàn)建立的方法（以下簡(jiǎn)稱自建法）中所收載的3種HPLC有關(guān)物質(zhì)檢查法（均采用主成分自身稀釋對(duì)照法定量），分別對(duì)奧氮平中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了分離考察，記錄了色譜峰，并就有關(guān)物質(zhì)的個(gè)數(shù)、檢測(cè)限、分離度、對(duì)稱性和柱效等方面進(jìn)行了比較。分析條件見(jiàn)表1。

表1 奧氮平有關(guān)物質(zhì)分析方法色譜條件比較

表2 USP法梯度洗脫程序

檢出限：取適量供試品，用流動(dòng)相溶解并逐級(jí)稀釋成不同濃度的供試品溶液，分別取20μL進(jìn)樣，最小雜質(zhì)峰高的信噪比≥3時(shí)，確定雜質(zhì)檢出限。

1.3.2 測(cè)定方法的優(yōu)化

根據(jù)上述3種色譜法的特點(diǎn)，本文設(shè)計(jì)了不同類型固定性、柱長(zhǎng)和洗脫形式，以?shī)W氮平原料藥中有關(guān)物質(zhì)的檢出個(gè)數(shù)、分離度、峰高、分析時(shí)間和基線漂移等作為優(yōu)化其HPLC條件的指標(biāo)，評(píng)價(jià)條件見(jiàn)表3。

2 結(jié)果與討論

2.1 3種測(cè)定奧氮平有關(guān)物質(zhì)方法比較

由圖1可知，USP法采用的是梯度洗脫法，分離得到USP法指定的奧氮平5個(gè)主要雜質(zhì)峰，但是基線漂移較嚴(yán)重，奧氮平主峰后的另一個(gè)雜質(zhì)峰（1，4-二（2-甲基-10H-苯并（b）噻吩并[2，3-e][1，4]二氮雜-4-基）哌嗪）體現(xiàn)不明顯，且分析時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，可能與固定相類型（C8）和柱長(zhǎng)（250mm）有關(guān)；WS法采用恒比例洗脫法，分離得到4個(gè)主要的雜質(zhì)峰，響應(yīng)值高，相對(duì)分析時(shí)間最短，基線平穩(wěn)，但幾乎沒(méi)有完全分離的峰；自建法用比例洗脫得到6個(gè)主要雜質(zhì)峰，主峰后的雜質(zhì)峰體現(xiàn)明顯，峰分離度均大于1.5，基線平穩(wěn)，但靈敏度相對(duì)較低。因3種方法各自的固定相類型，柱長(zhǎng)、流動(dòng)相和洗脫類型的差異，直接比較尚有不足，需要進(jìn)一步優(yōu)化。

表3 不同優(yōu)化條件表

圖1 3種方法的色譜圖比較

2.2 測(cè)定方法的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)采用不同類型、不同柱長(zhǎng)3種色譜柱，分別參照上述3種奧氮平有關(guān)物質(zhì)檢查方法的HPLC條件，測(cè)定奧氮平原料藥中有關(guān)物質(zhì)，測(cè)定主要結(jié)果如圖2所示。

圖2 不同色譜柱參照不同色譜方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，相同色譜柱下比較不同洗脫方法，USP法采用的是梯度洗脫，且流動(dòng)相中存在SDS緩沖鹽，所以基線漂移較大，分析時(shí)間也較長(zhǎng)，而采用WS法和自建法的等度洗脫程序的基線較平穩(wěn)。在使用 C18柱（150mm×4.6mm×5μm）和C8柱（150mm×4.6mm×5 μm）時(shí)，自建法分離雜質(zhì)峰相對(duì)較多，峰分離度大，分析時(shí)間合適，因此自建法較WS法以及USP法在雜質(zhì)分析上具有一定優(yōu)勢(shì)。在采用C8柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）情況下，USP 法分離得到雜質(zhì)多，峰分離度均大于1.5，靈敏度高，分析時(shí)間短，因此，C8柱（250mm×4.6mm×5μm）情況下，參照USP法梯度洗脫程序雜質(zhì)分離更好。在不同柱子情況下比較，等度和梯度各具有優(yōu)勢(shì)，但考慮分析時(shí)間及對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備的要求，以及基線漂移對(duì)雜質(zhì)分離影響的情況，自建法的等度洗脫更具實(shí)用性和合理性。

在相同方法下比較不同柱子，參照USP法梯度洗脫程序，采用的 C8柱（250mm×4.6 mm×5 μm），分離雜質(zhì)峰數(shù)多，分離度高，基線漂移相對(duì)較小，分離情況最為理想。參照WS法的等度洗脫程序，C18柱（150mm×4.6mm×5 μm）靈敏度最高，分離情況相對(duì)理想。自建法的等度洗脫程序，考慮分析時(shí)間，峰分離個(gè)數(shù)及響應(yīng)值，C18柱（150mm×4.6mm×5μm）分離分析情況理想。一般情況下洗脫程序相同，同一類型色譜柱雜質(zhì)峰分離個(gè)數(shù)應(yīng)一致，但自建法的C8（250mm）柱比C8（150mm）分離雜質(zhì)數(shù)少，原因是柱長(zhǎng)增加，采用等度洗脫時(shí)譜帶展寬嚴(yán)重，導(dǎo)致含量很低的雜質(zhì)峰高過(guò)小，所以能積分的雜質(zhì)峰變少。根據(jù)以上分析可知，美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中收載的方法，以及實(shí)驗(yàn)室自建的方法，在柱子的類型及柱長(zhǎng)選擇上具有明顯優(yōu)勢(shì)，因此在分別采用各方法進(jìn)行分析時(shí)，推薦采用原方法中的色譜柱。

圖3 實(shí)驗(yàn)室自建方法奧氮平有關(guān)物質(zhì)HPLC圖

3 結(jié)束語(yǔ)

結(jié)果表明，固定相的類型在分離中影響不明顯，柱長(zhǎng)增加有利于分離度的改善，但是分析時(shí)間會(huì)明顯增長(zhǎng)。綜上可知，自建法具有檢出雜質(zhì)個(gè)數(shù)多、分析時(shí)間較短、分離度較高、靈敏度較高和基線平穩(wěn)等特點(diǎn)，是奧氮平有關(guān)物質(zhì)限量檢查的較好方法。

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