氨咖黃敏膠囊中2種組分質(zhì)量控制方法的建立及9廠家產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)

丁蘇蘇，王威，王玉，李倚云，聞琍毓（.江蘇省揚(yáng)州藥品檢驗(yàn)所，江蘇揚(yáng)州225009；2.中國藥科大學(xué)，南京 20009；3.江蘇省藥品檢驗(yàn)所，南京 20008）

氨咖黃敏膠囊，原名速效傷風(fēng)膠囊，為臨床常用的抗感冒藥。其為復(fù)方制劑，每粒含對(duì)乙酰氨基酚250 mg、咖啡因15 mg、馬來酸氯苯那敏1 mg、人工牛黃10 mg。

目前全國共有554家企業(yè)生產(chǎn)本品，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[1]中采用滴定法分別測定其中對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因的含量，測定方法較為煩瑣、專屬性差。另質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中亦無溶出度檢查項(xiàng)，對(duì)處方中藥物的溶出過程未能實(shí)施監(jiān)控。為滿足全面控制藥品質(zhì)量的要求，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測定該制劑中對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因的含量，并在此基礎(chǔ)上建立了溶出度檢查方法，考察了9個(gè)廠家生產(chǎn)的該制劑的質(zhì)量情況。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AB HPLC儀，包括SPD-20A紫外檢測器、LC Solution色譜工作站（日本島津公司）；RCZ-8M溶出試驗(yàn)儀，包括RZQ-8D自動(dòng)取樣收集系統(tǒng)（天大天發(fā)科技有限公司）；AB135-S電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥品

對(duì)乙酰氨基酚（批號(hào)：100018-200408，純度：100%）、咖啡因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：171215-20809，純度：99.9%）來源于中國食品藥品檢定研究院；氨咖黃敏膠囊（原研廠為廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號(hào)：C11206，均為江蘇省2011年評(píng)價(jià)性抽樣品種，其余產(chǎn)品來自9個(gè)廠家，編號(hào)為A～I(xiàn)）；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定[2-4]

2.1.1 色譜條件。色譜柱：菲羅門Gemini-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫銨11.5 g，加水溶解后，加H3PO41 ml，加水至1 000 ml）-乙腈（82∶18，V/V），流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：262 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

取“2.1.3～2.1.5”項(xiàng)下3種溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果各組分的分離度符合要求，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；1.對(duì)乙酰氨基酚；2.咖啡因Fig1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；1.acetaminophen；2.caffeine

2.1.2 對(duì)照品貯備液的制備。分別精密稱取對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因?qū)φ掌?50.40、15.83 mg，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，即得。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品約15 mg，置于50 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲使溶解；另取咖啡因?qū)φ掌芳s18 mg，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml至上述含有對(duì)乙酰氨基酚的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即得。

2.1.4 供試品溶液的制備。取膠囊20粒的內(nèi)容物，混勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚125 mg），置于50 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理20 min，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過；取續(xù)濾液3 ml，置于25 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.5 陰性對(duì)照溶液的制備。按處方工藝，取降對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因以外的其他藥物制成陰性對(duì)照樣品，按“2.1.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法操作，即得。

2.1.6 線性關(guān)系考察。（1）對(duì)乙酰氨基酚。分別精密量取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 ml，置于25 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以峰面積（A×106）對(duì)其質(zhì)量濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A＝40.537c+0.938 6（r＝0.999 9），結(jié)果表明對(duì)乙酰氨基酚檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.100 2～0.500 8 mg/ml。（2）咖啡因。分別精密量取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 ml，置于25 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以咖啡因的峰面積（A×105）對(duì)其質(zhì)量濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A＝0.417 9c+0.012 6（r＝0.999 9），結(jié)果表明咖啡因檢測質(zhì)量濃度線性范圍為6.332～63.320 μg/ml。

2.1.7 精密度試驗(yàn)。取同一批號(hào)樣品，制備供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，對(duì)乙酰氨基酚色譜峰峰面積的RSD＝0.13%（n＝6），咖啡因RSD＝0.06%（n＝6）。

2.1.8 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)樣品，制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測定。結(jié)果，對(duì)乙酰氨基酚平均含量為99.90%，RSD＝0.9%（n＝6）；咖啡因平均含量為93.23%，RSD＝0.3%（n＝6）。表明方法重復(fù)性較好。

2.1.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一批號(hào)樣品，制備供試品溶液1份，室溫放置，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣分析。結(jié)果，對(duì)乙酰氨基酚峰面積的RSD＝0.5%（n＝5）；咖啡因峰面積的RSD＝0.4%（n＝5）。表明供試品溶液室溫放置8 h穩(wěn)定。

2.1.10 加樣回收率試驗(yàn)。稱取供試品9份，每份約0.285 g，精密稱定，置于200 ml量瓶中，精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品約200、250、300 mg各3份，咖啡因?qū)φ掌芳s12、15、18 mg各3份，分別加入上述9個(gè)200 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理20 min，取出，冷卻至室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過。取續(xù)濾液5 ml，置于25 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。結(jié)果，對(duì)乙酰氨基酚平均回收率為100.81%，RSD＝1.4%（n＝9）；咖啡因平均回收率為101.10%，RSD＝0.7%（n＝9）。

2.1.11 樣品含量測定。取9個(gè)廠家的樣品依法制備成供試品溶液，進(jìn)樣，記錄峰面積；按外標(biāo)法計(jì)算2種組分含量，結(jié)果見表1。

表1 9廠家樣品含量測定結(jié)果Tab1 Content determination of samples from 9 manufacturers

2.1.12 含量測定結(jié)果分析。本文涉及樣品均為江蘇省2011年評(píng)價(jià)性抽樣樣品，筆者分別采用滴定法和本文建立的HPLC法對(duì)95批樣品進(jìn)行了含量測定，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。通過總體方差分析得出：對(duì)乙酰氨基酚的F＝0.863 521，P＝0.353 864，P＞0.05；咖啡因的F＝0.010 971，P＝0.916 683，P＞0.05。表明2種含量測定方法統(tǒng)計(jì)結(jié)果差異無顯著性意義，詳見表2。

表2 2種含量測定方法結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析Tab2 Statistics analysis of 2 kinds of methods

對(duì)HPLC法含量測定的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚含量的頻數(shù)分布圖呈正態(tài)分布，咖啡因含量的頻數(shù)分布圖呈偏態(tài)分布。不同廠家樣品中的對(duì)乙酰氨基酚含量的方差分析結(jié)果：F＝6.394 2，P＝1.82×10－8，P＜0.05；咖啡因含量的方差分析結(jié)果：F＝47.215 0，P＝9.26×10－31，P＜0.05。可認(rèn)為各生產(chǎn)廠家的樣品中2種組分含量測定結(jié)果具有顯著性差異。

95批樣品中，對(duì)乙酰氨基酚含量的平均值為97.93%，其中3.9%的樣品含量在93.0%～94.9%之間，96.1%的樣品含量在95.0%～102.9%之間；咖啡因含量的平均值為94.41%，其中15%的樣品含量在88.0%～89.9%之間（均為A廠生產(chǎn)），49%的樣品含量在90.0%～94.9%之間，只有36%的樣品含量在95.0%～101.9%之間。分析咖啡因含量偏低的主要原因可能是一些廠家存在低限投料的情況。

2.2 溶出度試驗(yàn)[5]

2.2.1 溶出方法。采用籃法：轉(zhuǎn)速為100 r/min，介質(zhì)體積900 ml，溫度為（37±0.5）℃，取樣后照“2.1”項(xiàng)下方法測定。

2.2.2 溶出介質(zhì)的選擇。選擇原研廠生產(chǎn)的1批樣品，從中隨機(jī)抽取4份，每份6粒，分別在水、鹽酸溶液（0.1 mol/L）、磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）和醋酸鹽緩沖液（pH 4.0）4種介質(zhì)中，按“2.2.1”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，分別在5、10、15、20、25、30、40 min定點(diǎn)取樣5 ml，過濾，同時(shí)補(bǔ)充等量同溫度的介質(zhì)，進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法分別計(jì)算累積溶出百分率，繪制溶出曲線，見圖2。

圖2 4種溶出介質(zhì)中2種組分的溶出曲線A.對(duì)乙酰氨基酚；B.咖啡因Fig2 Dissolution curves of 2 components in 4 dissolution mediumsA.acetaminophen；B.caffeine

根據(jù)圖2結(jié)果，并參考《中國藥典》中膠囊劑[3]的溶出介質(zhì)，最后選擇水作為溶出介質(zhì)。

2.2.3 溶出曲線的比較。以水為溶出介質(zhì)，對(duì)9廠家的樣品進(jìn)行體外溶出試驗(yàn)，分別計(jì)算在5、10、15、20、25、30、40 min時(shí)2種組分的累積溶出百分率，繪制溶出曲線，見圖3。

圖3 9廠家樣品溶出曲線A.對(duì)乙酰氨基酚；B.咖啡因Fig3 Dissolution curves of samples from 9 manufacturersA.acetaminophen；B.caffeine

圖3 結(jié)果表明，各廠樣品中對(duì)乙酰氨基酚在15 min時(shí)累積溶出百分率均達(dá)到80%以上，20 min時(shí)均達(dá)到85%以上。除A廠外，其他各廠樣品中咖啡因累積溶出百分率在15 min時(shí)均達(dá)到85%以上，A廠樣品中咖啡因在25 min時(shí)達(dá)到80%。

2.2.4 相似因子（f2）的比較。以原研廠的樣品為參比，計(jì)算各廠間溶出曲線f2值。f2值大于50則認(rèn)為相似，結(jié)果見表3、表4。

從表3、表4結(jié)果可以看出，對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因的f2值低于50者分別占60%和56%，說明各產(chǎn)品溶出曲線存在差異。

3 討論

表3 對(duì)乙酰氨基酚的f2值比較Tab3 Comparison of f2of acetaminophen

表4 咖啡因的f2值比較Tab4 Comparison of f2of caffeine

預(yù)試驗(yàn)時(shí)，筆者分別對(duì)樣品中2種組分進(jìn)行紫外吸收波長掃描。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)乙酰氨基酚約為10 μg/ml時(shí)，在212、243 nm波長左右均有合適的吸光度；咖啡因約為10 μg/ml時(shí)，在220、262 nm波長左右均有合適的吸光度。由于該樣品每粒含對(duì)乙酰氨基酚250 mg、咖啡因15 mg，二者的量相差很大，故吸收波長選擇在咖啡因吸收較大處；再根據(jù)掃描的結(jié)果，初步確定2個(gè)檢測波長：216、262 nm。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在216 nm波長處，2種組分的吸光度均稍大于262 nm波長處，但由于216 nm波長處溶劑峰的影響較大，最終確定以262 nm為檢測波長。

比較該制劑2種組分含量測定的2種方法，雖然二者測定結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異，但當(dāng)采用滴定法測定時(shí)，A廠樣品含量均≥90.0%；而采用HPLC法測定時(shí)，約15%樣品中的咖啡因含量在88.0%～89.9%之間。因此對(duì)于檢出廠家低限投料樣品的不合格率，HPLC法更具優(yōu)勢。

從溶出度曲線和f2值比較的結(jié)果看，不同廠家氨咖黃敏膠囊的溶出存在差異，有必要在標(biāo)準(zhǔn)中增加溶出度檢查項(xiàng)目，以全面控制該制劑的質(zhì)量。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局.WS-10001-（HD-0276）-2002-2006[S].2006.

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[4]蓋軻，鄭阿利.高效液相色譜法同時(shí)測定氨咖黃敏膠囊中對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J].中國藥房，2006，17（6）：456.

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