地中海貧血基因診斷對指導優(yōu)生優(yōu)育的價值分析

余燕飛

(重慶市永川區(qū)婦幼保健院檢驗科，重慶 402160)

地中海貧血(簡稱地貧)，是由于血紅蛋白的珠蛋白肽鏈中某一種或幾種合成受到抑制而引起的一組遺傳性溶血性貧血，其臨床表現(xiàn)不一，輕型可無明顯癥狀，重型出生數(shù)日即出現(xiàn)貧血、肝脾腫大進行性加重，黃疸，并有發(fā)育不良，嚴重影響患兒健康，常危及患兒生命［1］。據(jù)世界衛(wèi)生組織報告全世界大概有1.5億人為血紅蛋白病的基因攜帶者，每年出生的各類重癥血紅蛋白病患兒約30萬。由于地中海貧血目前尚無有效的治療方法，又直接影響我國人口素質，因此，地中海貧血的產前篩查工作顯得尤為重要。本文回顧性統(tǒng)計分析我院2012年行地中海貧血產前篩查的孕婦的篩查結果及其基因突變構成比，為我區(qū)地貧孕婦開展遺傳咨詢及產前診斷提供良好的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至12月到我院產前門診進行孕期保健孕婦7 996例，均做血常規(guī)篩查，其中Hb＜110 g/L，MCV＜80 FL的貧血孕婦，且經(jīng)鐵劑治療無效者110例。

1.2 方法

1.2.1 MCV的測定 用法國ABX-80全自動血細胞分析儀及其配套的稀釋液和溶血素試劑測定，實驗前嚴格按照標準操作規(guī)程進行質量控制，標本為EDTA-K2靜脈抗凝血2 ml。

1.2.2 地中海貧血的基因診斷 抽取枸櫞酸鈉靜脈抗凝血5 ml送重慶市金域檢驗醫(yī)學檢驗中心檢查。α-地貧基因診斷采用 GAP-PCR 法，檢測-α3.7、-α4.2、--SEA三種常見α珠蛋白基因缺失型。該醫(yī)學中心驗證過的基因型有(-α3.7/αα)(-α4.2/αα)(--/αα)(-α3.7/--)(-α4.2/--)，靈敏度為 100% ，特異性為100%。β-地貧基因診斷采用PCR結合反向斑點雜交法，檢測17個常見突變位點(β0包括 Int、CD41-42、CD31、CD14-15、CD17、CD71-72、IVS-I-1、CD43、CD27/28;β+包括 IVS-Ⅱ-654、-28、-29、-30、-32、CAP、IVS-I-5、βE)。該醫(yī)學中心驗證過的突變位點:CD41-42、CD14-15、IVS-Ⅱ-654、-28、-29、CD71-72、CD17、βE、CAP、Int、CD27/28 等常見位點，靈敏度為100%，特異性為100%。

2 結果

110例地貧基因診斷中，確診為地貧者79例，檢測陽性率為71.82%，占總產檢人數(shù)7 996例的0.99%，其中α地貧34例，占0.43%，β地貧45例(包括4 例 β-地貧合并 α-地貧)，占0.56%。

在34例α地貧中，α-地貧 1雜合子(--SEA/αα)21 例，占 61.76%;α-地貧 2 雜合子(3.7/4.2 型)12例，占35.29%(包括4例β地貧合并α-地貧2雜合子);α-地貧1和α-地貧2雙重雜合子(H病)1例，占 2.94%，見表 1。

表1 α地貧雜合子基因型

在45例 β地貧中，CD41-42雜合子18例，CD17雜合子11例，IVS-Ⅱ-654雜合子9例，CD43雜合子3例，CD71-72雜合子2例，CD27/28雜合子1例，βE雜合子1例，見表2。

表2 β珠蛋白基因突變位點及其構成比

3 討論

地中海貧血是一組由于珠蛋白肽鏈中某一種或幾種合成受到抑制而引起的溶血性貧血，按其珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，主要分為 α-和 β-地貧，按其臨床癥狀的輕重，α-地貧可分為:靜止型α-地貧(α-地貧2，缺失1個 α 基因);標準型 α-地貧(α-地貧1，缺失2個α基因);中間型α-地貧(又稱HbH病，缺失3個α基因);重型α-地貧(又稱Hb Bart’s胎兒水腫綜合征，缺失4個α基因)。β-地貧分為:單雜合子地貧及雙重雜合子或純合子地貧及α、β復合型地貧。Hb H病、β0雜合β+是癥狀比較嚴重的存活型地貧，雖大部分能適應基本社會生活，但由于長期慢性溶血性貧血，可致患者肝脾腫大，骨骼變形;Hb Bart’s胎兒水腫綜合征、β0純合子或雙重雜合子為致死性異常，可致胎兒宮內水腫及死胎，在孕中晚期易合并妊娠期高血壓、子癇及產后出血等嚴重并發(fā)癥，危及孕婦生命［2］。而產前篩查診斷的目的就是為了避免這些殘疾兒的出生，提高新生兒的出生質量，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。

在7 996例產檢孕婦中，確診為地貧者79例，占總產檢人數(shù)的 0.99%，其中 α地貧34例，占0.43%，β地貧45例(包括4例是β-地貧合并α-地貧)，占0.56%，低于包碧惠等［3］報道的重慶地區(qū)α地貧陽性率0.61%，β-地貧陽性率2.68%的結果，這是由于本實驗室尚未開展血紅蛋白電泳分析，僅依靠血常規(guī)MCV、Hb及臨床治療效果進行篩查，有很大程度上地漏檢。據(jù)容永忠等［4］研究發(fā)現(xiàn):經(jīng)基因確診的149例患者中，有21例患者MCV大于82 FL，因此，建議有條件的醫(yī)院，產前篩查最好直接進行血紅蛋白電泳分析或基因診斷，結合血常規(guī)、紅細胞滲透脆性試驗等指標，擴大篩查范圍，以減少漏診。

α-地貧的分子基礎主要是基因的缺失，而東南亞缺失型(--SEA/αα)是我國最常見的缺失類型，它是HbH病和Hb Bart’s胎兒水腫綜合征的分子基礎，據(jù)報道95%以上的α-地貧缺失類型為--SEA/αα，該缺失型在人群中的攜帶率為4%［5］。而Hb Bart’s胎兒水腫綜合征是由--SEA基因的純合子構成，如果夫妻雙方均為東南亞缺失型地貧時，其子女有25%的幾率患此病，而--SEA/αα 與靜止型 α-地貧(-α3.7/αα 或-α4.2/αα)組合都會構成缺失型 HbH 病，若夫妻一方為東南亞缺失型α-地貧，另一方為靜止型α-地貧時，他們的子女有25%的幾率患HbH病。本研究結果統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，永川地區(qū)東南亞缺失型的檢出率為61.76%，靜止型α-地貧即α-地貧2雜合子的檢出率為35.29%，可見 HbH病和 Hb Bart’s胎兒水腫綜合征在本地區(qū)都有很高的發(fā)生風險。因此，為控制HbH病和Hb Bart’s胎兒水腫綜合征患兒的出生，當孕產婦被確診為東南亞缺失型α-地貧時，其配偶也必須同時進行檢查，若雙方均為地貧陽性患者，其胎兒必須接受產前診斷，以證實胎兒是否屬于重型地中海貧血。在統(tǒng)計中我們發(fā)現(xiàn)，79例篩查陽性孕婦中，其配偶也同時接受地貧篩查的只有5例，由此可見大家對地中海貧血的認識及其重視程度不夠，這也為我們婦幼保健工作的更好開展提出了更高的要求。

絕大多數(shù)β-地貧是由于β珠蛋白發(fā)生點突變所致，世界范圍已發(fā)現(xiàn)有170多種引起β-地貧的基因突變，中國人中已發(fā)現(xiàn)有29種。本研究共檢出7種β-地貧的基因突變類型，其中，CD41/42是最常見的β-地貧基因突變類型，與國內的其他報道［6］相同。但由于實驗方法的局限性，不排除其它缺失及突變的發(fā)生，α-地貧的余值風險為 3.97%，β-地貧的余值風險為2.02%。

永川每年到沿海的務工人員較多，而沿海地區(qū)又是地中海貧血的高發(fā)區(qū)域，如果婚配生育前未經(jīng)過相關篩查，那么勢必會使地貧患兒的出生陽性率增加。重型地中海貧血嚴重威脅著患兒的生命，極大影響家庭和兒童的生活質量。由于目前地中海貧血尚無有效的根治方法，因此，加強遺傳咨詢、婚前及產前篩查可以預先發(fā)現(xiàn)重度地中海貧血患兒，從而減少地中海貧血患兒的出生率，提高人口素質，實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。

［1］盧玖世.2009年某院產前篩查地中海貧血情況分析［J］.中外醫(yī)療，2011，09(25):174.

［2］趙祖英.Hb Bart’s胎兒水腫綜合征30例臨床分析［J］.海南醫(yī)學，2012，17(23):51-52.

［3］包碧惠，胡 華，姚 宏，等.地中海貧血的產前篩查和基因診斷［J］.第三軍醫(yī)科大學學報，2008，30(5):453-455.

［4］容永忠，李 斌，賴兆新，等.地中海貧血產前篩查及基因診斷研究［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006，14(5):7-9.

［5］XU X M，Zhou Y Q，Luo G X，et al.The prevalence and spectrum of alpha and beta thalassaemia in Guangdong Province:implications for the future health burden and population screening［J］.J Clin Pathol，2004，57(5):517-522.

［6］周玉球，李文典，吳麗蓉，等.婚前地中海貧血的大人群篩查及預測性產前診斷［J］.中國優(yōu)生優(yōu)育，1999，10(2):67-69.