HPLC法測定中藥炮制輔料醋中酸性成分的含量*

★ 龔飛鵬 王曉崴 龔千鋒*** 鐘凌云 易炳學 李嘯 陳泣

(1.江西省人民醫(yī)院 南昌 330006;2.江西中醫(yī)學院 南昌 330004;3.南昌大學 南昌 330004)

HPLC法測定中藥炮制輔料醋中酸性成分的含量*

★ 龔飛鵬1**王曉崴2龔千鋒2***鐘凌云2易炳學2李嘯3陳泣2

(1.江西省人民醫(yī)院 南昌 330006;2.江西中醫(yī)學院 南昌 330004;3.南昌大學 南昌 330004)

目的：對炮制輔料醋中總酸和乳酸含量進行測定，建立乳酸含量的測定方法。方法：采用酸堿滴定法測定15種醋的總酸的含量，采用樹脂基高效液相色譜柱對15種醋的乳酸含量進行HPLC色譜法測定。結(jié)果：測定15種醋中的總酸含量范圍是35.60-55.58mg/mL，乳酸的含量范圍是2.48-23.40mg/mL。其中“恒順鎮(zhèn)江香醋”的總酸含量最高，“山西陳世家老陳醋(三年釀)”的乳酸含量最高。結(jié)論：較以往的測乳酸前需將乳酸前處理相比較，本實驗的樹脂基高效液相色譜柱測定的乳酸含量的方法，重復性好，方便操作，可以作為測定乳酸含量的方法；也為優(yōu)選炮制輔料醋提供了一定的參考依據(jù)。

總酸；乳酸；醋；離子交換；含量測定；評價

醋,味酸苦、微溫，具有收斂、解毒、行水、散瘀、止痛等作用。醋的種類也有很多，陳醋、香醋、白醋等等。食醋有開胃、養(yǎng)肝、強筋、暖骨、醒酒、消食、下氣、辟邪、解魚蟹鱗等保健功效[1]?，F(xiàn)代食醋中有抗菌殺菌作用[2-3],抗衰老作用[4],防癌作用[5]等作用。陳嘉謨在《本草蒙筌》中歸納為“醋制注肝經(jīng)且資住痛”。藥物經(jīng)醋制后具有收斂，散瘀止痛的作用。醋制的目的是引藥入肝，增強活血止痛；降低毒性，緩和藥性；矯臭矯味；利于粉碎和溶出藥效成分等等。如醋制五靈脂，乳香，沒藥等，減少了不良氣味，且能增強活血散瘀的作用[6]。醋中酸性成分主要是乙酸，還含有乳酸等其他酸性成分。乙酸和乳酸的測定可以為市場上銷售的食用醋的質(zhì)量標準提供一定的參考。在以往的研究中測定乳酸時需要將食醋進行前期處理，較為繁瑣。本實驗建立了測定乳酸的樹脂基高效液相色譜柱的含量測定方法，該法重復性良好，便于操作，可以做為檢測乳酸含量的方法。該實驗也為選用醋制法炮制藥物的輔料醋提供一定的參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

μLtimate3000高效液相色譜儀(美國戴安),PAD檢測器,μLtimate3000自動進樣器,μLtimate3000柱溫箱；SZ-93A自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器有限公司)。PHS-25型數(shù)顯PH檢測儀(上海雷磁儀器廠)

1.2 試藥

乳酸對照品(上海阿拉丁試劑有限公司,純度≥98%,批號 J1208026)。甲醇、乙腈為色譜純；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。樣品見表 1。

表1 樣品來源及批號

2 方法與結(jié)果

2.1 不同醋樣中總酸(以乙酸計)的含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 稱取5g冰醋酸，精密稱定，用水定容至100mL，得50.12mg/mL乙酸溶液，做為對照品溶液[7]。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密吸取5mL供試醋樣，用水定容至100mL，做為供試品溶液。

2.1.3 測定方法 精密吸取供試品溶液20mL，置200mL錐形瓶中，加水50mL，用NaOH滴定液(0.1089mol/L)進行滴定，記錄滴定液消耗體積，每消耗1mLNaOH滴定液相當于6.539mg的乙酸。

2.1.4 精密度試驗 吸取供試品溶液，分別滴定5次，測總酸含量，測得的RSD值是1.4%，說明該方法精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗 吸取供試品溶液，分別在0,2,4,6,8,10，12 h用酸堿滴定法測得總算含量，測得的RSD值是2.1%，表明供試品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 重復性試驗 取5份同一醋樣，分別制成供試品溶液測定總酸含量。測得的總酸的平均含量是55.47mg/mL，RSD值為2.4%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.1.7 加樣回收率試驗 取醋樣2.5mL，加入對照品溶液2.5mL,制成供試品溶液，測定總酸含量，平行5份實驗，測得平均回收率為97.51，RSD=2.6%.

2.1.8 樣品測定結(jié)果 見表2。

表2 不同醋樣中總酸(以乙酸計)的含量測定結(jié)果

2.2 不同醋樣中乳酸的含量測定

2.2.1 色譜條件 BIO-RAD柱，進樣量：20μL；流動相：5mmol/L硫酸；流速：0.5mL/min;柱溫：40℃；紫外檢測器檢測波長：215nm。圖譜見圖1-3。

2.2.2 對照品溶液制備 精密量取乳酸對照品，用超純水依次配成5,2.5,1,0.5,0.25g/L溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 將15種食用醋樣品用0.22μL的微孔濾膜過濾，即得。

2.2.4 線性范圍考察 以乳酸的含量為橫坐標，乳酸的峰面積為縱坐標，得到的線性回歸方程是Y=1442.3X+215.9(r=0.9993)。

圖1 乳酸標準品HPLC圖

圖2 金山寺鎮(zhèn)江香醋的HPLC的指紋圖譜

圖3 恒順白醋(無乳酸)HPLC的指紋圖譜

2.2.5 精密度試驗 吸取樣品溶液注入液相色譜儀中，連續(xù)進樣5次，測得乳酸的峰面積的RSD值1.0%，說明精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 取樣品溶液，分別在0,2,4,6,8,10,12h進樣，測定的RSD值為0.6%，說明乳酸的含量在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復性試驗 取樣品溶液5份，分別進樣，測得食醋中乳酸的含量是19.43,19.22,19.76,19.03,20.14mg/mL，平均含量是19.516，RSD值為2.25%。

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品醋液，加入乳酸對照品溶液，平均實驗5次，測定其中乳酸含量，計算平均回收率為97.3%，RSD為1.4%。

2.2.9 樣品測定結(jié)果 見表3。

表3 不同醋樣中乳酸的含量測定結(jié)果

3 討論

按生產(chǎn)過程來分，食醋可以分為釀造醋、合成醋、再造醋三大類。釀造醋是用糧食等為原料,經(jīng)發(fā)酵而成。合成醋是用化學方法合成的醋酸配制而成。再造醋是以釀造醋為基料,經(jīng)進一步加工制成。[8]

前人對醋的運用給后人留下的十分寶貴的用藥經(jīng)驗，有很多學者也在不斷的整理研究食醋藥用的材料[9-10]。毛氏等[11]首次建立了醋的藥用質(zhì)量標準。做為炮制常用輔料的醋，味酸為肝臟所喜，藥物經(jīng)過醋制后能引藥入肝經(jīng)，增強活血止痛作用。醋中總酸除了含有乳酸，還含有其他的酸性成分。本實驗收集的15種醋樣中，除了白醋沒有檢測到乳酸外，其他的陳醋和香醋都已經(jīng)檢測到乳酸。

本實驗采用離子交換樹脂柱對乳酸進行的HPLC的檢測，建立了HPLC的方法，此方法重復性好，可以作為檢測乳酸含量的方法。同時，對不同種類的食用醋的總酸和乳酸含量的測定也為研究醋的炮制品種提供了一定的依據(jù)。

[1]蕭鳳歧. 釀造醋有益健康[J]. 中國釀造, 1989, 7-11.

[2]黃仲華. 論食醋與健康[J]. 中國調(diào)味品, 1998,(3)：2- 6.

[3]Entani - Etsuzo , Asai - Mito. Amtibacterial actionof vinegar against food- borne pathogenic bacteria including Escherirchia coli O157: H7[J].Journal of Food protection, 1998, 61(8)：953- 959.

[4]Shoko NISHIDAI , Yoshimasa NAKAMURA et al. Kurose, a Traditional Vinegar Produced from Unpolished Rice, Supresses Lipid Peroxidation in vitro and in Mouse Skin[J]. Biosci. Biotechnol. Biochem. ,2000, 64( 9)：1 909-1 924.

[5]Kondo S, Tayama K et al .Antihypertensive effects of acetic acid and vinegar on spontaneously hypertensive rats[J]. Biosci Biotechnol Biochem, 2001, 65( 12) ：2 690- 2 694.

[6]葉定江，原思通.中藥炮制學辭典[M].上海:上?？茖W出版社,2005：108.

[7]陳琳,吳 皓,王媚,等.中藥炮制輔料醋中總酸和乳酸的含量測定[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2010,17(9)：52-54.

[8]毛淑杰,李先端,馬志靜,等.中藥炮制輔料的規(guī)范化示范研究Ⅱ[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(8)：48.

[9]李先端，顧雪竹，毛淑杰.醋的歷史沿革及其保健功能[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(18)：295-297.

[10]程立平,顧雪竹,毛淑杰.不同類型醋對小鼠的急性毒性及炮制延胡索鎮(zhèn)痛作用比較[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(2)：71-72.

[11]毛淑杰,李先端,顧雪竹,等.中藥炮制輔料-醋的規(guī)范化示范性研究[J].中國中藥雜志,2006,31(22)：1 918.

ToExploreAcidicComponent'sContentinAdjuvantVinegarBasedontheHPLCMethod

GONGFei-peng1,WANGXiao-wei2,GONGQian-feng2*,ZHONGLing-yun2,YIBing-xue2,LIXiao3,CHENQi2

1.TheJiangxiProvincialPeople'sHospital,Jiangxi,Nanchang,330006,China；2.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jiangxi,Nanchang,330004,China； 3.NanchangUniversity,Jiangxi,Nanchang,330004,China)

Objective: To determine the content of total acid and lactic acid, and to establish a method for the determination of lactic acid. Methods:By acid-base titration to determine total acid's content of 15 kinds of vinegar. With resin-based HPLC columns , to determine lactic acid's content of 15 kinds of vinegar.ResμLts:The total acid content were ranged from 35.60 mg/mL to 55.58 mg/mL. The lactic acid content were ranged from 2.48 mg/mL to 23.40 mg/mL. The aromatic vinegar made in Jiangsu Zhenjiang has the highest content of total acid, the mature vinegar made in Shanxi (fermented for three years) has the highest content of lactic acid. Conclusion:The method by resin-based HPLC columns is to determination the content of lactic acid,and it is reproducible.This method can be used to determination the content of lactic acid.And it provides some reference for preferred adjuvant vinegar.

Total Acid ;Lactic Acid;Vinegar;Lon Exchange;Content Determination;Evaluation

國家中醫(yī)藥行業(yè)專項“中藥飲片調(diào)劑規(guī)范化研究”(項目編號：201007011)。

**作者簡介:龔飛鵬，主治醫(yī)師，Tel:13367003628,E-mail:lenny-gong@163.com。

***通訊作者:龔千鋒，教授，博士研究生導師，Tel:0791-87118852,E-mail:gongqf2002@163.com。

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2013-08-14)