SchB-SLN中五味子乙素含量的方法學研究

張秀榮,孫德一,崔佰吉

(吉林醫(yī)藥學院藥學院,吉林 吉林 132013)

·論 著·

SchB-SLN中五味子乙素含量的方法學研究

張秀榮,孫德一,崔佰吉

(吉林醫(yī)藥學院藥學院,吉林 吉林 132013)

目的進行五味子乙素固體脂質納米粒(SchB-SLN)中五味子乙素的含量測定的方法學研究。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TC-2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫40 ℃，流速0.8 mL/min。流動相為甲醇-水(85∶15)，檢測波長為220 nm。結果五味子乙素的線性范圍分別為0.005～0.4 μg(r=0.999 7)；平均加樣回收率(n=9)為100.89%。結論本方法簡便易行，結果準確可靠，適用于本制劑中五味子乙素的含量測定。

五味子乙素；固體脂質納米粒；高效液相色譜法

五味子固體脂質納米粒(SchB-SLN)是以單硬脂酸甘油酯為脂質材料，卵磷脂和Pluronic F-68為乳化劑，采用超聲法制備的新型納米給藥系統(tǒng)，可以改善五味子乙素在體內釋放行為，從而提高五味子乙素的生物利用度。本研究采用HPLC色譜法對SchB-SLN中五味子乙素進行含量測定，并進行相應的方法學研究，經(jīng)實驗表明本方法操作簡便、專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為該制劑效標物質含量測定的方法，為制定其質量標準提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A系列高效液相色譜儀；日本島津UA1800紫外分光光度儀；IKA-RCT磁力加熱攪拌器；塞多利斯CPA2250電子天平；MILLIPORE(Synergy185)超純水制備儀；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑為分析純；對照品五味子乙素(110765-200609)購自中國藥品生物制品檢定所；SchB-SLN(批號：110301，110302，110303)為本實驗室自制。

2 方法與結果

2.1檢測波長的選擇

稱取SchB-SLN適量，加甲醇適量，超聲20 min，放冷至室溫，制備每1 mL中約含五味子乙素0.1 mg的溶液，取溶液置高速離心機中，12 000 r/min，離心10 min，取上清液，以甲醇溶液為空白，在200～400 nm波長范圍內進行光譜掃描；同時按照相同的方法進行空白固體脂質納米粒的光譜掃描，掃描結果可見五味子乙素在220 nm處有最大吸收，且所有輔料在該波長處的紫外吸收對測定結果無干擾，故選220 nm為檢測波長。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取五味子乙素對照品適量，加甲醇制備成每1 mL含有五味子乙素0.01 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

稱取SchB-SLN適量，加甲醇適量，稱定重量，超聲20 min，放冷至室溫，稱定重量，并補足減失重量，制備成每1 mL中約含五味子乙素0.01 mg的溶液，取1 mL溶液置高速離心機中，12 000 r/min，離心30 min，取上清液，即得。

2.4陰性樣品溶液

按本品的處方制備空白的固體脂質納米粒。按“2.3”項下方法制備操作，即得。

2.5色譜條件

色譜柱：Agilent TC-2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(85∶15)；流速：0.8 mL/min；檢測波長：220 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。五味子乙素與相鄰雜峰分離度大于1.5；理論塔板數(shù)按五味子乙素計算大于4 000，對照品、樣品、陰性樣品色譜圖見圖1。由圖可見，樣品色譜中在與對照品色譜相應的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而陰性樣品無相同保留時間的色譜峰，分離效果良好。

2.6線性關系考察

精密稱取五味子乙素對照品5 mg，置25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，作為儲備液。分別吸取上述儲備液0.125、0.25、0.5、0.15、4、7、10 mL置100 mL的容量瓶中，釋藥介質定容至刻度。按“2.5”項條件進行HPLC測定，以峰面積(A)對質量濃度(p)進行線性回歸，得回歸方程

y=202 421x+58 604，r=0.999 7

表明五味子乙素在0.005～0.4 μg范圍內線性關系良好。標準曲線見圖2。

圖 1 陰性樣品溶液(A)、對照品溶液(B)和供試品溶液(C)的色譜圖(220 nm)

圖 2 標準曲線圖

2.7精密度試驗

取對照品溶液和供試品溶液連續(xù)進樣6次。測得對照品和供試品溶液中溶液中五味子乙素峰面積的RSD分別為0.64%、0.83%，結果表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液在0、2、4、6、8、12 h進行測定，供試品溶液中五味子乙素的RSD為1.4%。表明供試品中五味子乙素在12 h內穩(wěn)定。

2.9重復性實驗

取SchB-SLN，按“2.3”項下供試品溶液制備方法同時制備供試品溶液6份。以“2.5”項下色譜條件測定，按外標法計算含量，結果五味子乙素的含量RSD為1.07%，表明實驗重復性良好。

2.10加樣回收率試驗

稱取五味子乙素適量。用甲醇溶解，制備20 g/mL的SchB貯備液，分別精密量取貯備液4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL于10 mL容量瓶中，另精密量取1 mL空白納米粒混懸液，用甲醇稀釋至約8 mL，超聲處理20 min，取出，放冷,并用甲醇定容，取1 mL 12 000 r/min離心30 min，取上清液按“2.5”項下方法進行測定，測定結果見表1。

2.11樣品含量測定

分別精密吸取按照“2.2”項及“2.3”項方法制備的混合對照品溶液及供試品溶液各20 μL注入色譜儀，測定樣品中五味子乙素的峰面積，采用外標法計算，結果見表2。

表 1 回收率測定結果表

表 2 樣品五味子乙素測定結果(n=3)

3 討 論

關于五味子乙素含量測定的報道較多，且主要以高效液相色譜法為主要測定方法，流動相主要以甲醇-水為主，洗脫方式主要以梯度洗脫為主[1-5]。本研究考察了“甲醇-水”和“乙腈-水”兩個流動相系統(tǒng)。經(jīng)過比較，2個流動相體系條件下，樣品分離結果沒有明顯的差異，所以選擇“甲醇-水”作為流動相；研究分別考察柱溫25、30、40 ℃情況下色譜結果，研究表明，提高柱溫能夠明顯提高各個色譜峰的分離度，選擇40 ℃作為本研究的實驗條件。本研究采用高效液相色譜法測定五味子固體脂質納米粒中五味子乙素的含量，研究中選擇不同的有機溶劑進行樣品的制備工作，選擇甲醇、乙醇作為溶媒進行選擇，通過平行對比實驗研究，最終選擇甲醇作為樣品制備的溶媒。

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StudyonmethodologyfordeterminationoftheSchisandrinBinSchisandrinB-solidlipidnanoparticles

ZHANG Xiu-rong,SUN De-yi,CUI Bai-ji

(College of Pharmacy,Jilin Medical College,Jilin City,Jilin Province,132013，China)

ObjectiveTo develop a method for determination of Schisandrin B in Schisandrin B-solid lipid nanoparticles.MethodsHPLC was adopted for this study.The mobile phase was methanol-water(85∶15).The flow rate was 0.8 mL/min.The UV detection wavelength was 220 nm.ResultsThe linear ranges of Schisandrin B were 0.005～0.4 μg(r=0.999 7).The average recoveries (n=9) were 100.89%.ConclusionThe developed method is simple,accurate and suitable for determination of Schisandrin B in SchB-SLN.

Schisandrin B;solid lipid nanoparticles;HPLC

R284.1

A

2013-09-01)

1673-2995(2013)06-0422-03

張秀榮(1959-)，女(漢族)，教授，本科.