• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鼻咽癌組織中EBERs與BMI-1表達(dá)相關(guān)性研究

    2013-10-27 00:56:41聚,鄒彥,湯
    關(guān)鍵詞:原位雜交鼻咽癌陽(yáng)性細(xì)胞

    王 聚,鄒 彥,湯 明

    (1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科,貴州 遵義 563099;2. 遵義醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院 頭頸腫瘤科,貴州 遵義 563099)

    鼻咽癌組織中EBERs與BMI-1表達(dá)相關(guān)性研究

    王 聚1,鄒 彥2,湯 明2

    (1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科,貴州 遵義 563099;2. 遵義醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院 頭頸腫瘤科,貴州 遵義 563099)

    目的探討鼻咽癌組織中EBERs與BMI-1表達(dá)相關(guān)性。方法對(duì)2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的石蠟包埋切片進(jìn)行研究:原位雜交方法檢測(cè)這些切片中EBERs的表達(dá);免疫組化方法檢測(cè)這些切片中BMI-1的表達(dá)。結(jié)果40例鼻咽癌組織中EBERs情況:高表達(dá)組為11例,低表達(dá)組為29例,合計(jì)陽(yáng)性表達(dá)率為100%(40/40)。40例鼻咽癌組織中BMI-1情況:BMI-1陽(yáng)性表達(dá)率為32.5%(13/40)。鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)與BMI-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。結(jié)論鼻咽癌中EBERs表達(dá)與BMI-1表達(dá)無(wú)相關(guān)性,有待進(jìn)一步研究,并探討二者在鼻咽癌中的機(jī)理。

    鼻咽癌;EBERS;BMI-1

    我國(guó)是鼻咽癌高發(fā)區(qū),發(fā)病的確切原因尚不清楚,一般認(rèn)為與EBV (epstein-barr virus ,EB病毒) 感染密切相關(guān);在感染人體后長(zhǎng)期潛伏,可表達(dá)多種基因,其潛伏膜蛋白(LMP)編碼基因、EB病毒核抗原(EBNA)基因及EBV編碼的小RNA(EBER);其可能不同程度存在于鼻咽癌組織中并可能通過(guò)不同的機(jī)制導(dǎo)致鼻咽癌。在鼻咽癌中,層粘連蛋白、白細(xì)胞介素和潛伏膜蛋白-1一起上調(diào)

    BMI-1的表達(dá)[1]。關(guān)于鼻咽癌中EBERs和BMI-1表達(dá)相關(guān)性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道,因此我們對(duì)2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的組織切片進(jìn)行研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料 收集我院2007年12月至2009年11月40例經(jīng)病理確診鼻咽癌的病理組織蠟塊,其中男性29例,女性11例,年齡30~77歲,中位年齡45歲,病理類(lèi)型均為非角化型癌分化型。

    1.2 試驗(yàn)方法 將上述病理組織蠟塊,連續(xù)4 μm 切片備用,平鋪于涂有多聚賴氨酸(1 mg/m1)的玻片上,行HE染色、EBERS原位雜交、BMI-1的EnVision二步免疫組化染色。EBERS檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Dako公司,為DakoCytomation EBV(EVER) probe,具體實(shí)驗(yàn)步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,用試劑盒所帶陰性控制試劑做陰性對(duì)照,用已知EBERs陽(yáng)性的鼻咽癌組織切片做陽(yáng)性對(duì)照。BMI-1檢測(cè)中鼠抗人BMI-1單克隆抗體購(gòu)自R&D公司,EnVisionTM免疫組化試劑盒購(gòu)自Gene Tech公司,具體染色方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,陰性對(duì)照以TBS取代一抗,用已知BMI-1陽(yáng)性的乳腺癌組織切片做陽(yáng)性對(duì)照。

    1.3 結(jié)果評(píng)價(jià)

    1.3.1 EBERS結(jié)果評(píng)價(jià) 應(yīng)用普通光學(xué)顯微鏡,高倍鏡下(10×20)隨機(jī)取4個(gè)不同的視野,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及核陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),按陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比積分。

    EBERs陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核,呈紫黑色,表達(dá)信號(hào)強(qiáng)度分五級(jí):(-)陰性;(+)<24%癌細(xì)胞陽(yáng)性;(++)25%~49%癌細(xì)胞陽(yáng)性;(+++)50%~74%癌細(xì)胞陽(yáng)性;(++++)>75%癌細(xì)胞陽(yáng)性。根據(jù)鼻咽癌組織中EBERs的表達(dá)情況分為陰性組、低表達(dá)組(+、++)和高表達(dá)組(+++、++++)。

    1.3.2 BMI-1結(jié)果評(píng)價(jià) 應(yīng)用普通光學(xué)顯微鏡,高倍鏡下(10×20)隨機(jī)取4個(gè)不同的視野,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及核陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),按陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比積分。同時(shí),根據(jù)染色的強(qiáng)弱程度也計(jì)分。

    BMI-1陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì),呈黃色、棕黃色。陽(yáng)性細(xì)胞率≤10%為1分,陽(yáng)性細(xì)胞率>10%且≤50%為2分,陽(yáng)性細(xì)胞率>50%且≤75%為3分,陽(yáng)性細(xì)胞率>75%為4分;同時(shí),根據(jù)染色的強(qiáng)弱程度也計(jì)分:陰性1分,弱染色2分,中等強(qiáng)度染色3分,強(qiáng)染色4分。通過(guò)二者的乘積來(lái)判斷結(jié)果:≤4分為(-);>4分且≤8分為(+);>8分且≤12分為(++);>12分且≤16分為(+++)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件數(shù)據(jù)包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,相關(guān)性分析選擇Spearman相關(guān)檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 40例鼻咽癌組織中EBERs情況 (+)組14例、(++)組15例、(+++)組7例、(++++)組4例;合計(jì)低表達(dá)組為29例,高表達(dá)組為11例,陽(yáng)性表達(dá)率為100%(40/40)。

    2.2 40例鼻咽癌組織中BMI-1情況 BMI-1表達(dá)陰性組27例,(+)組2例,(++)組8例,(+++)組3例,陽(yáng)性表達(dá)率為32.5%(13/40)。

    2.3 鼻咽癌組織中EBERs 表達(dá)與BMI-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05(見(jiàn)表1)。

    表1鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)與BMI-1表達(dá)統(tǒng)計(jì)表

    組別BMI-1(-)BMI-1(+)BMI-1(++)BMI-1(+++)合計(jì)EBERs低表達(dá)組2215129EBERs高表達(dá)組513211合計(jì)2728340

    注:P>0.05。

    2.4 HE染色光鏡觀察結(jié)果(見(jiàn)圖1)。

    2.5 鼻咽癌組織中EBERs陽(yáng)性表達(dá)光鏡觀察結(jié)果(見(jiàn)圖2)。

    2.6 鼻咽癌組織中BMI-1的陽(yáng)性表達(dá)光鏡觀察結(jié)果(見(jiàn)圖3)。

    3 討論

    EBV是一種嗜B淋巴細(xì)胞的人類(lèi)皰疹病毒,為雙鏈DNA病毒,是比較明確的DNA腫瘤病毒,在全球廣泛分布,感染人群后通常在人體內(nèi)終身潛伏。Ⅰ~Ⅲ型EBV潛伏感染均可合成EB 病毒轉(zhuǎn)錄的核內(nèi)小RNA ( EBV encoded small RNAs ,EBERs)。文獻(xiàn)報(bào)道[2]用原位雜交方法在鼻咽粘膜慢性炎中未檢測(cè)到EBERs,在鼻咽癌組織中EBERs陽(yáng)性表達(dá)率100%(53/53)。本文對(duì)40例鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)進(jìn)行研究,陽(yáng)性表達(dá)率結(jié)果也為100%(40/40),再次證明鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)非常高,且用原位雜交的方法檢測(cè)鼻咽癌中EBERs表達(dá)方法簡(jiǎn)單、技術(shù)成熟,可以作為檢測(cè)組織細(xì)胞EBV感染的一種方法。本文報(bào)道的40例鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)程度不一致,分析其原因可能與以下因素有關(guān):1、選取的鼻咽癌組織中本身EBERs拷貝數(shù)不同;2、由于選用的研究標(biāo)本是既往確診鼻咽癌的病理組織蠟塊,在組織固定或保存過(guò)程中可能存在EBERs的分解。但是通過(guò)本文研究,用原位雜交的方法檢測(cè)鼻咽癌中EBERs表達(dá)至少在分化型非角化型鼻咽癌中是一種高敏感性的方法。

    宋立兵等[3]報(bào)道在鼻咽癌組織中BMI-1蛋白高表達(dá)率為38.7%(29/75)。我們研究的BMI-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為32.5%(13/40),高表達(dá)率為11.1%(3/40)。二者高表達(dá)率的不同,分析可能與研究的標(biāo)本不同有關(guān)。近年研究表明[4]BMI-1蛋白在腫瘤組織中表達(dá)差異,主要與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)。

    在鼻咽癌發(fā)生過(guò)程中EB病毒可能在誘導(dǎo)基因突變中起作用,導(dǎo)致癌基因的激活,或破壞抑癌基因,并導(dǎo)致免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力降低,最終形成腫瘤。在鼻咽癌中,層粘連蛋白、白細(xì)胞介素和潛伏膜蛋白-1一起上調(diào)BMI-1的表達(dá)[1]。但是本文研究得出鼻咽癌中EBERs表達(dá)與BMI-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),二者間不存在相關(guān)性。EBERs由于缺乏3′端多聚腺苷,不編碼蛋白質(zhì)[5],不能直接發(fā)揮生物功能,導(dǎo)致腫瘤的形成。通過(guò)本文研究在鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)與BMI-1表達(dá)無(wú)關(guān),因而EBERs表達(dá)后不會(huì)上調(diào)BMI-1的表達(dá)。鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)與腫瘤形成有何關(guān)系有待研究。但是本文研究得出在鼻咽癌組織中BMI-1有一定的表達(dá);其它研究也表明與正常鼻咽上皮細(xì)胞相比較,BMI-1在鼻咽癌細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào)[3]。說(shuō)明在鼻咽癌腫瘤形成過(guò)程中BMI-1會(huì)表達(dá)并起到一定作用,同時(shí)本文研究在鼻咽癌組織中BMI-1表達(dá)與EBERs表達(dá)無(wú)關(guān),因而何種機(jī)制促進(jìn)BMI-1的表達(dá)有待進(jìn)一步研究。但是BMI-1一旦被激活可高表達(dá)于腫瘤細(xì)胞中, 其發(fā)揮作用的途徑是控制下游的癌蛋白以及細(xì)胞周期調(diào)控蛋白, 如c-myc、pRB等的激活,在細(xì)胞周期起負(fù)調(diào)節(jié)作用,能保持靶基因特異的穩(wěn)定抑制狀態(tài),可能從細(xì)胞凋亡障礙、細(xì)胞增殖失控方面引起惡性腫瘤細(xì)胞的增生。

    本研究得出用原位雜交的方法檢測(cè)鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)在分化性非角化型鼻咽癌中是一種高敏感性的方法。并且得出分化型非角化型鼻咽癌中EBERs表達(dá)與BMI-1表達(dá)關(guān)系無(wú)相關(guān)性。鼻咽癌組織中EBERs表達(dá)與腫瘤形成有何關(guān)系,何種機(jī)制促進(jìn)BMI-1的表達(dá),有待今后進(jìn)一步進(jìn)行研究;并探尋二者在鼻咽癌中的機(jī)理。

    [1] Michelle M S Chew,Sook-Yee Gan,Alan SB Khoo,etal,Interleukins, laminin and epstein-barr virus latent membrane protein 1 (EBV LMP1) Promote metastatic phenotype in nasopharyngeal carcinoma[J].BMC Cancer,2010,10: 574.

    [2]江慶萍,劉少顏,何秀芳,等. 鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒編碼的miR-BART22表達(dá)的關(guān)系及意義[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,31(7):1146-1149.

    [3]宋立兵,廖雯婷,曾木圣,等. 新的腫瘤標(biāo)志物Bmi-1基因誘導(dǎo)正常鼻咽上皮細(xì)胞永生化[C]. 中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集,2006.

    [4]胡花麗,馮愛(ài)強(qiáng),張彥武,等. Bmi-1及Mel-18在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]. 中國(guó)普通外科雜志,2012,21(11),1410-1414.

    [5]閔華慶. 鼻咽癌研究[M]. 廣州: 廣東科技出版社,1998:57- 75.

    ResearchfortheexpressivecorrelationofEBERsandBMI-1innasopharyngealcarcinoma

    Wangju1,Zouyan2,Tangming2

    (1.Department of Nuclear,The Affiliated Hospital,Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China;2.Department of Head And Neck Oncology,The Oncology Hospital of The Affiliated Hospital,Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China)

    ObjectiveTo observe the expressive correlation of EBERs (EBV encoded small RNAs) and BMI-1 (B lymphoma Mo-MLV insertion region 1 homolog)in nasopharyngeal carcinoma (NPC).MethodsWe studied the paraffin-embedded sections of 40 NPC from December 2007 to November 2009. The expression of EBERs were detected by in situ hybridization.The expression of BMI-1were detected by Immunohistochemistry .ResultsOf the 40 cases of NPC, the low expression group was 29 cases,the high expression group was 11 cases,the positive rate of EBERSwas 100% (40/40).Of the 40 cases of NPC, the positive rate of EBERSwas 32.5%(13/40). The expression difference of EBERs and BMI-1was not statistically significant in NPC,P>0.05.ConclusionThe expression of EBERs and BMI-1 in NPC is not correlated . Further researches are needed to elucidate their expression in NPC.

    nasopharyngeal carcinoma; EBERs; BMI-1

    遵義市科技局分社基金項(xiàng)目(NO:200902)。

    鄒彥,女,主任醫(yī)師,研究方向:頭頸部腫瘤,E-mail:zouyan.714@163.com。

    R739.63

    A

    1000-2715(2013)05-0453-03

    [收稿2013-08-02;修回2013-09-29]

    (編輯:譚秀榮)

    猜你喜歡
    原位雜交鼻咽癌陽(yáng)性細(xì)胞
    中醫(yī)藥治療鼻咽癌研究進(jìn)展
    熒光原位雜交衍生技術(shù)及其在藥用植物遺傳學(xué)中的應(yīng)用
    鼻咽癌組織Raf-1的表達(dá)與鼻咽癌放療敏感性的關(guān)系探討
    大口黑鱸鰓黏液細(xì)胞的組織化學(xué)特征及5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的分布
    鼻咽癌的中西醫(yī)結(jié)合診治
    EBER顯色原位雜交技術(shù)在口腔頜面部淋巴上皮癌中的應(yīng)用體會(huì)
    染色體核型分析和熒光原位雜交技術(shù)用于產(chǎn)前診斷的價(jià)值
    人胎腦額葉和海馬中星形膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育性變化
    熒光原位雜交在慢性淋巴細(xì)胞白血病遺傳學(xué)異常及預(yù)后中的應(yīng)用
    急性白血病免疫表型及陽(yáng)性細(xì)胞比例分析
    久久久久国产一级毛片高清牌| 欧美日本视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 12—13女人毛片做爰片一| 国产高清激情床上av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产欧美日韩一区二区精品| 一本精品99久久精品77| 黄色成人免费大全| 免费av毛片视频| 久久久久久久精品吃奶| 日韩欧美在线二视频| 亚洲专区字幕在线| 美女大奶头视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产视频内射| 成人精品一区二区免费| 999久久久国产精品视频| 97超视频在线观看视频| 毛片女人毛片| 久久人妻av系列| 白带黄色成豆腐渣| 色噜噜av男人的天堂激情| 俄罗斯特黄特色一大片| 又爽又黄无遮挡网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 男人舔奶头视频| 亚洲av美国av| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美中文综合在线视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产野战对白在线观看| 日本a在线网址| 两人在一起打扑克的视频| 真人做人爱边吃奶动态| 此物有八面人人有两片| 九色成人免费人妻av| 两性夫妻黄色片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品国产高清国产av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线观看免费午夜福利视频| 中文字幕高清在线视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| АⅤ资源中文在线天堂| 黄色片一级片一级黄色片| 怎么达到女性高潮| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲,欧美精品.| 俺也久久电影网| 精品久久久久久久久久久久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 观看免费一级毛片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 他把我摸到了高潮在线观看| 两性夫妻黄色片| 国产高清三级在线| ponron亚洲| 亚洲熟妇熟女久久| 无人区码免费观看不卡| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费看a级黄色片| 舔av片在线| 免费在线观看成人毛片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产成人福利小说| 美女 人体艺术 gogo| 成人欧美大片| 成人国产一区最新在线观看| 91av网站免费观看| 国产精品 欧美亚洲| 黄色成人免费大全| 免费av毛片视频| 99riav亚洲国产免费| 在线播放国产精品三级| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 精品国产美女av久久久久小说| 中亚洲国语对白在线视频| 99久久成人亚洲精品观看| 黄色日韩在线| 一a级毛片在线观看| av视频在线观看入口| 婷婷丁香在线五月| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 操出白浆在线播放| 99国产精品一区二区三区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 91在线精品国自产拍蜜月 | 免费看光身美女| 搡老岳熟女国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 中出人妻视频一区二区| 免费无遮挡裸体视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 性色avwww在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲精品456在线播放app | 成人无遮挡网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 日韩三级视频一区二区三区| 国产日本99.免费观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 性色avwww在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 婷婷精品国产亚洲av在线| av在线天堂中文字幕| 欧美黄色淫秽网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 99热只有精品国产| x7x7x7水蜜桃| 国语自产精品视频在线第100页| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品国产高清国产av| 久久天堂一区二区三区四区| 精品无人区乱码1区二区| 国产成+人综合+亚洲专区| 午夜福利欧美成人| 好男人在线观看高清免费视频| 一级毛片高清免费大全| 午夜a级毛片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99热这里只有是精品50| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美激情在线99| 国产精品 欧美亚洲| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 99视频精品全部免费 在线 | www日本在线高清视频| 国产免费av片在线观看野外av| 午夜福利视频1000在线观看| 香蕉久久夜色| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 少妇丰满av| a在线观看视频网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲激情在线av| 久久久色成人| 日韩国内少妇激情av| 久久99热这里只有精品18| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲午夜理论影院| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲午夜理论影院| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲国产色片| 一级毛片高清免费大全| 香蕉av资源在线| 久久久国产成人免费| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 99久久综合精品五月天人人| 欧美日韩黄片免| 欧美性猛交黑人性爽| 性欧美人与动物交配| 网址你懂的国产日韩在线| 97超视频在线观看视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产视频一区二区在线看| 国产成人福利小说| www国产在线视频色| 精品不卡国产一区二区三区| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美国产日韩亚洲一区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品永久免费网站| av天堂在线播放| a级毛片在线看网站| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲片人在线观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲精品在线美女| 成人午夜高清在线视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 草草在线视频免费看| 欧美乱妇无乱码| 久久久久免费精品人妻一区二区| 热99在线观看视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 在线观看66精品国产| 国产成人福利小说| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲 国产 在线| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产亚洲精品av在线| 一区福利在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 伦理电影免费视频| 亚洲国产精品999在线| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品爽爽va在线观看网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 我的老师免费观看完整版| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产在线精品亚洲第一网站| av欧美777| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 舔av片在线| 天堂影院成人在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 毛片女人毛片| 国产乱人伦免费视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产 一区 欧美 日韩| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲精华国产精华精| 中文字幕av在线有码专区| 草草在线视频免费看| bbb黄色大片| 国产精品1区2区在线观看.| 久久久久久久午夜电影| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美日韩黄片免| 国产成人精品无人区| 窝窝影院91人妻| 国产主播在线观看一区二区| 免费看日本二区| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 中文资源天堂在线| 天堂√8在线中文| 人妻久久中文字幕网| 午夜视频精品福利| 久久久久九九精品影院| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲无线在线观看| 怎么达到女性高潮| 美女黄网站色视频| 色尼玛亚洲综合影院| 神马国产精品三级电影在线观看| 久9热在线精品视频| 手机成人av网站| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产又黄又爽又无遮挡在线| av国产免费在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲av电影在线进入| 九色国产91popny在线| 搡老岳熟女国产| 女警被强在线播放| 国内精品美女久久久久久| 欧美在线一区亚洲| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 露出奶头的视频| 男女那种视频在线观看| 久久这里只有精品中国| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲美女黄片视频| bbb黄色大片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 午夜久久久久精精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 在线观看免费午夜福利视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日本a在线网址| 中文字幕av在线有码专区| 男女床上黄色一级片免费看| 观看免费一级毛片| 久久天堂一区二区三区四区| 日本在线视频免费播放| 国产一区二区在线观看日韩 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜福利在线在线| 亚洲人与动物交配视频| 12—13女人毛片做爰片一| 丝袜人妻中文字幕| 婷婷精品国产亚洲av| 制服丝袜大香蕉在线| 成人精品一区二区免费| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久午夜综合久久蜜桃| 黄色女人牲交| 日韩欧美在线二视频| 日韩欧美精品v在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| av天堂中文字幕网| 国产精品 国内视频| 国产免费男女视频| 免费大片18禁| 国产亚洲精品一区二区www| 国产三级黄色录像| 精品国内亚洲2022精品成人| 一进一出好大好爽视频| 色尼玛亚洲综合影院| av国产免费在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 久久久久久人人人人人| 精品欧美国产一区二区三| 久久国产精品影院| 18美女黄网站色大片免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久视频播放| av天堂中文字幕网| 色精品久久人妻99蜜桃| 在线观看66精品国产| 欧美zozozo另类| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产91精品成人一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲国产精品sss在线观看| 免费在线观看成人毛片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久99久视频精品免费| 国产极品精品免费视频能看的| 久久亚洲真实| 成年版毛片免费区| 黄频高清免费视频| 特级一级黄色大片| 91在线精品国自产拍蜜月 | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美成狂野欧美在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国内精品久久久久久久电影| 午夜免费成人在线视频| 亚洲成a人片在线一区二区| www.自偷自拍.com| 中文字幕精品亚洲无线码一区| av在线蜜桃| 香蕉国产在线看| 精品国产亚洲在线| 免费观看的影片在线观看| 久久国产精品影院| 久久久久九九精品影院| 国产午夜福利久久久久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本成人三级电影网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美不卡视频在线免费观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产成人精品久久二区二区91| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 免费看美女性在线毛片视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 91在线观看av| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 91av网站免费观看| 国内精品一区二区在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| av福利片在线观看| 俺也久久电影网| 全区人妻精品视频| 午夜精品在线福利| 亚洲专区中文字幕在线| 操出白浆在线播放| 午夜免费成人在线视频| www国产在线视频色| 成人三级黄色视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一a级毛片在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| av欧美777| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品av视频在线免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲国产看品久久| svipshipincom国产片| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 嫩草影院入口| 国产成人福利小说| 岛国视频午夜一区免费看| 久久久久性生活片| 午夜两性在线视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人av教育| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 深夜精品福利| 亚洲欧美精品综合久久99| 小说图片视频综合网站| 九九热线精品视视频播放| 观看免费一级毛片| 国产一区在线观看成人免费| 久久九九热精品免费| 成人国产综合亚洲| 成人特级av手机在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清专用| 手机成人av网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产成人av教育| 精品一区二区三区视频在线观看免费| av视频在线观看入口| 真人做人爱边吃奶动态| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美日韩国产亚洲二区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美三级亚洲精品| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩人妻高清精品专区| 国产成人欧美在线观看| 精品国产三级普通话版| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产亚洲精品av在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲色图av天堂| 午夜福利在线观看吧| 亚洲精品在线美女| 在线免费观看不下载黄p国产 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产精品电影一区二区三区| 久久中文字幕人妻熟女| 国语自产精品视频在线第100页| 十八禁人妻一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日本a在线网址| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 午夜视频精品福利| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜福利在线在线| 国产美女午夜福利| 国产男靠女视频免费网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产男靠女视频免费网站| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 99久国产av精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产毛片a区久久久久| 久久久久国内视频| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产高清激情床上av| 亚洲在线自拍视频| 听说在线观看完整版免费高清| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精华一区二区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成熟少妇高潮喷水视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 中文字幕高清在线视频| 国产成人精品无人区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 一进一出抽搐动态| 午夜福利欧美成人| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲av电影在线进入| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 俺也久久电影网| 大型黄色视频在线免费观看| 成人三级做爰电影| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产伦在线观看视频一区| 精品久久久久久久末码| 18禁观看日本| 精品日产1卡2卡| 久久久久久久久久黄片| 欧美乱码精品一区二区三区| 麻豆av在线久日| 日韩欧美 国产精品| 久久久国产成人精品二区| 国产欧美日韩一区二区三| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美成人性av电影在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 在线看三级毛片| 热99在线观看视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲熟女毛片儿| 热99re8久久精品国产| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久中文字幕一级| 国产精品亚洲一级av第二区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 婷婷六月久久综合丁香| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品av久久久久免费| 国产精品99久久99久久久不卡| 1024手机看黄色片| 美女免费视频网站| 精品国产乱子伦一区二区三区| 成在线人永久免费视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产成人av教育| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 中文字幕久久专区| 91在线精品国自产拍蜜月 | 长腿黑丝高跟| 国产精品乱码一区二三区的特点| 黄片大片在线免费观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 黄色片一级片一级黄色片| avwww免费| 一级毛片精品| 99久久无色码亚洲精品果冻| 精品电影一区二区在线| 亚洲avbb在线观看| 国产一区二区激情短视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产成人aa在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美激情在线99| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产三级黄色录像| 精品福利观看| 久久这里只有精品19| 国产免费av片在线观看野外av| 少妇的逼水好多| 色精品久久人妻99蜜桃| 午夜福利在线在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲欧美激情综合另类| 免费av毛片视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美日韩乱码在线| 欧美日韩综合久久久久久 | 全区人妻精品视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美在线一区亚洲| 又粗又爽又猛毛片免费看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99视频精品全部免费 在线 | 国产精品免费一区二区三区在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 丁香欧美五月| 丁香六月欧美| 麻豆av在线久日| 国产三级在线视频| 亚洲在线自拍视频| 欧美激情在线99| 又粗又爽又猛毛片免费看| 级片在线观看| 91av网站免费观看| 免费在线观看影片大全网站| 欧美中文综合在线视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 精品不卡国产一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 免费高清视频大片| 国产乱人伦免费视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 美女黄网站色视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美日韩一级在线毛片| 丰满的人妻完整版| 国产成+人综合+亚洲专区| 99在线视频只有这里精品首页| 日本 av在线| 韩国av一区二区三区四区| 久久午夜亚洲精品久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| netflix在线观看网站| 欧美乱妇无乱码| 最新中文字幕久久久久 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 在线免费观看的www视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 成人av在线播放网站| 亚洲美女视频黄频| 在线国产一区二区在线| 青草久久国产| 精品国产三级普通话版| 香蕉久久夜色| 国产真实乱freesex| 香蕉av资源在线| 天天一区二区日本电影三级| 黄色片一级片一级黄色片| 久久中文看片网| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产成人欧美在线观看| 国产一区二区激情短视频| 九九在线视频观看精品|