COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義

劉曉麗,馬禮鴻,王全義,王 凱

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科,貴州 遵義 563099；2.遵義市第一人民醫(yī)院 外科, 貴州 遵義 563099；3.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科，山東 濟(jì)寧 272029)

·臨床醫(yī)學(xué)研究·

COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義

劉曉麗1,馬禮鴻2,王全義3,王 凱1

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科,貴州 遵義 563099；2.遵義市第一人民醫(yī)院 外科, 貴州 遵義 563099；3.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 病理科，山東 濟(jì)寧 272029)

目的探討COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及臨床病理特征的關(guān)系。方法選用組織芯片運(yùn)用免疫組化S-P法檢測(cè)COX-2、VEGF-C在150例宮頸鱗癌組織、15例宮頸CIN組織、15例正常宮頸組織中的表達(dá)。結(jié)果COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中表達(dá)的陽性率分別為79.3 %(119/150)、82.6%(125/150)；在CIN組織為40.0%(6/15)和33.3%(5/15), 在正常宮頸組織為13.3%(2/15)和20.0%(3/15)。宮頸鱗癌組織中COX-2的陽性表達(dá)與病理學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、腫塊大小均無關(guān)(P>0.05)。宮頸鱗癌組織中VEGF-C的陽性表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、腫塊大小和病理學(xué)分級(jí)均無關(guān)(P>0.05)。兩蛋白陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.398,P<0.01)。隨訪5年的107例患者中COX-2、VEGF-C陽性患者的5年生存率均分別低于COX-2、VEGF-C陰性患者。結(jié)論COX-2、VEGF-C的高表達(dá)參與中老年宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展，并且兩蛋白具有協(xié)同作用，檢測(cè)兩蛋白的表達(dá)情況可作為臨床腫瘤生物學(xué)行為和患者預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。

COX-2；VEGF-C；宮頸腫瘤；鱗癌；預(yù)后

在世界范圍內(nèi)，子宮頸鱗癌是女性第二位常見的惡性腫瘤，多發(fā)生于中老年女性。環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygease-2,COX-2)是花生四烯酸轉(zhuǎn)化成前列腺素的限速酶，與腫瘤發(fā)生、增殖和浸潤(rùn)密切相關(guān)[1]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(vascular endothelial growth factors-C,VEGF-C)是特異性的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移有關(guān)[2]。本研究采用組織芯片運(yùn)用免疫組化S-P法檢測(cè)COX-2、VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，結(jié)合隨訪資料探討其間的關(guān)系及其臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 材料 選用廣西桂林泛譜生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的的組織芯片及實(shí)驗(yàn)芯片，實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分為3組：①正常組：正常宮頸組織15例，年齡40～55歲，平均年齡50.4歲；②宮頸CINI-II級(jí)：15例，40～55歲，平均年齡46.5歲；③惡性組：鱗癌150例，≤55歲71例，>55歲79例，年齡45～65歲，平均年齡55.2歲。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009年的宮頸癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，臨床早期83例, 臨床晚期67例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移85例，病理分級(jí)高分化50例，中分化61例，低分化39例。所有病例臨床、病理資料完整，患者術(shù)前均未進(jìn)行過抗腫瘤治療。術(shù)后隨訪資料完整107例，隨訪時(shí)間36～60個(gè)月，中位隨訪時(shí)間25個(gè)月，死亡6例，失訪3例。

1.2 免疫組化染色 采用S-P法，兔抗人COX-2單克隆抗體、兔抗人VEGF-C多克隆抗體通用型S-P試劑盒及DAB酶顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，染色方法及步驟按說明書進(jìn)行，高壓抗原修復(fù)，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽性切片作陽性對(duì)照，DAB顯色，蒸餾水清洗，蘇木素復(fù)染。酒精脫水、透明、封片。

1.3 結(jié)果判斷 在細(xì)胞核/細(xì)胞漿出現(xiàn)棕色或棕褐色顆粒為陽性信號(hào)。COX-2陽性表達(dá)于細(xì)胞漿/細(xì)胞核(見圖1)，VEGF-C陽性表達(dá)于細(xì)胞漿(見圖2)。隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野(×400)計(jì)數(shù)陽性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞所占的百分比，取其平均值，<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，組間差異比較采用2檢驗(yàn)，兩分類變量之間的關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson列聯(lián)系數(shù)度量，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2的表達(dá) COX-2在惡性組、宮頸CINI-II級(jí)組及正常組陽性表達(dá)率為79.3 %(119/150)、40.0%(6/15)及13.3%(2/15)。COX-2蛋白陽性表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤臨床分期有密切相關(guān)(均P<0.05)，低分化組COX-2表達(dá)高于高、中分化組(2=6.74，P<0.01)，中、高分化組COX-2的表達(dá)未見差異(2=0.42,P=0.51)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(2= 16.65,P<0.01)，臨床分期晚期(Ⅱb+Ⅵ期)高于臨床分期早期 (I+Ⅱa期)(2=10.12,P<0.01)，與患者年齡、腫塊大小無關(guān)(P>0.05)(見表1)。

2.2 VEGF-C的表達(dá) VEGF-C在惡性組、宮頸

CINI-II級(jí)組及正常組的陽性表達(dá)率分別為82.6%(125/150)、33.3%(5/15)及20.0%(3/15)。VEGF-C的表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(χ2=15.25,P<0.01)，在臨床晚期(Ⅱb+Ⅵ期)的表達(dá)高于臨床早期(I+Ⅱa期)(χ2=12.95,P<0.01)，VEGF-C的表達(dá)與患者年齡、腫塊大小及分化程度無關(guān)(P>0.05)(見表2)。

表1宮頸鱗癌臨床病理特征與COX-2陽性表達(dá)

組別例數(shù)COX-2陽性(%)陰性(%)2P年齡(歲)≤557152(73.2)19(26.7)>557967(84.8)12(16.9)1.070.311腫瘤直徑≤2cm5540(72.0)15(27.2)>2cm9579(83.1)16(16.8)2.310.14分化程度高5032(64.0)18(36.0)中6152(85.2)9(14.7)6.740.01低3935(89.7)4(10.2)0.420.51淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無8558(68.2)27(31.7)有6561(93.8)3(4.9)16.65<0.01臨床分期早期8358(69.8)25(30.1)晚期6761(91.0)6(8.9)10.12<0.01

表2宮頸鱗癌臨床病理特征與VEGF-C陽性表達(dá)

組別例數(shù)COX-2陽性(%)陰性(%)2P年齡(歲)≤557157(80.2)14(19.7)>557968(86.0)11(13.9)0.250.61腫瘤直徑≤2cm5542(76.3)13(23.6)>2cm9583(87.3)12(12.6)3.030.11分化程度高5038(76.0)12(24.0)中6153(86.8)8(13.1)2.200.13低3936(92.3)3(7.6)0.720.40淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無8562(72.9)23(27.0)有6563(96.9)2(3.0)15.25<0.01臨床分期早期8361(73.4)22(26.5)晚期6764(95.5)3(4.4)12.95<0.01

2.3 COX-2、VEGF-C表達(dá)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，COX-2與VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.398，P<0.01,見表3)。

表3 COX-2、VEGF-C的表達(dá)

COX-2VEGF-C陽性陰性陽性10910陰性1615

2.4 COX-2、VEGF-C的表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系 術(shù)后隨訪資料完整107例，COX-2陽性患者5年生存率15%，明顯低于COX-2陰性患者的26%。VEGF-C陽性患者5年生存率12%，明顯低于VEGF-C陰性患者的30%。

3 討論

宮頸鱗癌是危害女性健康的惡性腫瘤之一，全世界每年有50萬新發(fā)病例，其中我國病例占1/4[3]，多見于40～60歲的女性，平均發(fā)病年齡54歲。COX-2是前列腺素合成過程中重要的限速酶，在正常組織中低表達(dá)或不表達(dá)，在多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、促進(jìn)血管形成、腫瘤免疫有關(guān)[4]。Goto R[5]等報(bào)道，下咽鱗癌中COX-2表達(dá)在低分化組高于中、高分化組，但與臨床分期、腫瘤復(fù)發(fā)及生存率均無關(guān)。鄒亮[6]等報(bào)道，細(xì)支氣管肺泡癌COX-2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小有關(guān)，與患者性別、年齡、腫塊部位病理類型及臨床分期無關(guān)。這些研究報(bào)道結(jié)果的差異，可能與研究樣本大小、檢測(cè)方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)的不同有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，COX-2在宮頸鱗癌組織中表達(dá)升高，明顯高于宮頸CINI-II級(jí)及正常宮頸組織，其陽性表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤臨床分期有密切相關(guān)，低分化組COX-2表達(dá)高于高、中分化組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，臨床分期晚期組高于臨床分期早期組，COX-2的表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤臨床分期密切相關(guān)。

VEGF-C是一種分泌性多肽，又稱淋巴管生長(zhǎng)因子，是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族成員，研究報(bào)道認(rèn)為其可促進(jìn)淋巴管生長(zhǎng)，與腫瘤細(xì)胞增殖及向區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲能力[7]有關(guān)。馬陳等[8]等報(bào)道，VEGF-C可誘導(dǎo)實(shí)體瘤組織內(nèi)或腫瘤組織周的淋巴管生成及充盈擴(kuò)張，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞進(jìn)行淋巴道轉(zhuǎn)移。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，VEGF-C在腫瘤組織表達(dá)升高，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，臨床晚期組的表達(dá)高于臨床早期組， VEGF-C的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)。結(jié)果還顯示，COX-2與VEGF-C在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)；術(shù)后隨訪資料表明，COX-2與VEGF-C高表達(dá)患者術(shù)后生存率低于其低表達(dá)組。這些研究結(jié)果表明，COX-2與VEGF-C的高表達(dá)在宮頸鱗癌的增殖過程中及其對(duì)患者預(yù)后有著重要的作用。

綜上所述，COX-2與 VEGF-C蛋白在中老年宮頸鱗癌組織中的表達(dá)升高與宮頸鱗癌組織的發(fā)生、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移過程相關(guān)密切，COX-2與 VEGF-C表達(dá)升高提示患者臨床預(yù)后不良，可作為中老年宮頸鱗癌患者臨床生物學(xué)行為和預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。

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[收稿2012-10-14;修回2013-02-17]

(編輯：譚秀榮)

ExpressionsandclinicopathologicalsignificancesofCOX-2andVEGF-Cincervicalsquamouscellcarcinoma

Liuxiaoli1,Malihong2,Wangquanyi3,Wangkai1

(1.Department of Pathology,The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China;2.Department of Surgery,The First People’s Hospital, Guizhou Zunyi 563099,China;3.Department of Pathology,The Affiliated Hospital of Jining Medical University, Shandong Jining 272029,China)

ObjectiveTo detect the expressions of COX-2 and VEGF-C in cervical squamous cell carcinoma and investigate their correlations in cervical squamous cell carcinoma.MethodsThe expressions of COX-2 and VEGF-C in 150 cases of cervical squamous cell carcinoma, 15 cases of CIN tissues and 15 cases of normal human cervical tissues were determined by tissues array and S-P method of IHC.ResultsThe positive overexpression rates of COX-2 in cervical squamous cell carcinoma, CIN tissues and normal human cervical tissues were 79.3 % (119/150), 40.0% (6/15) and 13.3% (2/15), respectively. The positive overexpression rates of VEGF-C in cervical squamous cell carcinoma, CIN tissues and normal human cervical tissues were 82.6% (125/150), 33.3% (5/15) and 20.0% (3/15), respectively. The positive expression of them in malignant group were significantly higher than those in the CIN tissues and normal group(P<0.05). The positive expression of COX-2 in cervical squamous cell carcinoma were related to the tumor histological grade, clinical stage and metastasis of lymph node (P<0.05). The positive expression of VEGF-C in cervical squamous cell carcinoma were related to tumor clinical stage and metastasis of lymph node (P<0.05). The positive expressions of COX-2 and VEGF-C were not associated with the patient’s age and size of tumor (P>0.05). Furthermore, the significantly positive expression correlation between COX-2 and VEGF-C was shown (P<0.01). Among the 5-year follow-up data of 107 cases, the 5-year survival rate of patients with COX-2 and VEGF-C positive expressions was lower than that with these two proteins negative expressions, respectively.ConclusionThe high expressions of COX-2 and VEGF-C proteins play an important role in the development of cervical squamous cell carcinoma in old women with a synergistic effects of these two proteins. Detection of COX-2 and VEGF-C expressions could be used as the reference index for the tumor’s biological behavior and patients’ prognosis.

COX-2; VEGF-C; cervix neoplasms; squamous cell carcinoma; prognosis

R737.33

A

1000-2715(2013)02-0121-04