抗痛風(fēng)膠囊改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病理學(xué)變化

鐘正霞, 于 泓,袁良東,楊亦彬，余麗梅,蒲 濤

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 腎病風(fēng)濕科,貴州 遵義 563099，2.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 腎內(nèi)二科，山東 濟(jì)寧 272029，3.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099)

抗痛風(fēng)膠囊改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病理學(xué)變化

鐘正霞1, 于 泓1,袁良東2,楊亦彬1，余麗梅3,蒲 濤1

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 腎病風(fēng)濕科,貴州 遵義 563099，2.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 腎內(nèi)二科，山東 濟(jì)寧 272029，3.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099)

目的探討抗痛風(fēng)膠囊對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病理學(xué)變化的影響。方法采用尿酸鈉混懸液關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射誘導(dǎo)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，連續(xù)用藥治療5 d，肉眼觀察大鼠足踝關(guān)節(jié)腫脹程度，HE染色觀察踝關(guān)節(jié)軟骨組織的病理變化。結(jié)果與模型組比較，抗痛風(fēng)膠囊和陽性藥對照組AGA大鼠于相應(yīng)藥物治療后3～5 d，右足踝關(guān)節(jié)腫脹明顯減輕。HE染色后顯微鏡下觀察結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)軟骨組織表面較不整齊, 基質(zhì)染色不均，軟骨細(xì)胞排列層次紊亂，細(xì)胞腫脹明顯，有較多的炎細(xì)胞浸潤，軟骨下骨與髓腔也出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤，充血明顯?？雇达L(fēng)膠囊低劑量和高劑量組、陽性藥物組均明顯改善關(guān)節(jié)軟骨組織的充血、水腫和炎細(xì)胞浸潤等病理變化。結(jié)論抗痛風(fēng)膠囊可以明顯減輕AGA大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度，改善軟骨組織的病理性變化。

抗痛風(fēng)膠囊 ；急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；關(guān)節(jié)

痛風(fēng)是一種嘌呤代謝紊亂所致的疾病，尿酸鈉結(jié)晶沉著于關(guān)節(jié)及其周圍結(jié)締組織引起病損及炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致反復(fù)發(fā)作的急、慢性關(guān)節(jié)炎和軟組織損傷，初發(fā)部位侵犯第一跖趾及拇趾關(guān)節(jié)多見，受累關(guān)節(jié)常于夜間出現(xiàn)紅、腫、熱、痛，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(acute gouty arthritis AGA)反復(fù)發(fā)作可發(fā)展為多關(guān)節(jié)受累，并可從急性期關(guān)節(jié)局部腫脹發(fā)展為慢性期的局部骨質(zhì)缺損、關(guān)節(jié)畸形及功能障礙, 已成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病。AGA目前的治療主要是采用抗炎藥物糖皮質(zhì)激素、秋水仙堿等治療為主，對于關(guān)節(jié)組織的炎癥損傷尚無特異性治療藥物[1]。

抗痛風(fēng)膠囊是按黔北地區(qū)民間用于痛風(fēng)治療的中藥組方精制而成，動物實(shí)驗(yàn)表明，該藥對尿酸鈉誘導(dǎo)大鼠AGA具有明顯緩解關(guān)節(jié)腫脹及其步態(tài)的治療作用，并可顯著降低血液和關(guān)節(jié)液中TNF-α水平等作用[2]。本實(shí)驗(yàn)主要觀察抗痛風(fēng)膠囊對AGA大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)變化的影響，為急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 取健康的雄性SD大鼠50只，體重均為240～250 g，鼠齡3～4月齡，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。SPF(合格證號 SEXK(渝)2007-00050，試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)5d，室溫20～25 ℃，相對濕度40%～70%，每日光照12 h，自由飲水。

1.2 藥品 抗痛風(fēng)膠囊是遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科提供，含生藥干粉0.5g/粒，秋水仙堿為西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，每片含秋水仙堿0.5 mg(批號081203)，均以蒸餾水配制成混懸液，4 ℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑與儀器 取結(jié)晶性尿酸鈉250 mg(Sigma公司，批號100982303)加入0.9%氯化鈉注射溶液45 mL，再加5mL吐溫80，加熱攪拌而配制成50 mL尿酸鈉溶液，配制尿酸鈉注射懸液。主要儀器：AEL 200電子天平(日本島津)和1 mL注射器。

1.4 AGA大鼠模型制備[3]SD大鼠稱重、編號，隨機(jī)分空白組、模型組、陽性藥對照組、抗痛風(fēng)膠囊低劑量和高劑量組，每組5只，空白組踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射等體積生理鹽水，其余4組大鼠均用10%水合氯醛0.3 mL/100 g腹腔注射麻醉，仰臥位固定，以大鼠右踝關(guān)節(jié)外側(cè)后方為穿刺部位，將右踝關(guān)節(jié)彎曲，局部消毒并穿刺，向關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入0.2 mL尿酸鈉混懸溶液，誘導(dǎo)痛風(fēng)模型。同時(shí)，空白組、模型組灌胃給予等體積蒸餾水，陽性藥物組給予秋水仙堿0.8 mg/kg，根據(jù)臨床用藥劑量換算，給予抗痛風(fēng)膠囊 0.3 g/kg和1.2 g/kg，于上午9時(shí)分別灌胃給藥1次，連續(xù)5 d。

1.5 病理學(xué)檢查 給予藥物治療1～5 d內(nèi)，肉眼觀察大鼠右足踝關(guān)節(jié)的腫脹程度，在第5天灌胃給藥2 h后處死大鼠，取其關(guān)節(jié)軟骨組織，放入無水酒精中固定，脫鈣、脫水、石蠟包埋、切片(3 μm厚)，脫蠟、水化、HE染色、透明、固定后，光鏡下觀察病理變化。

2 結(jié)果

2.1 大鼠足踝關(guān)節(jié)腫脹情況 實(shí)驗(yàn)過程中可見，大鼠右足踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射尿酸鈉混懸液后，關(guān)節(jié)隨即出現(xiàn)腫脹(見圖1)。與空白對照組比較，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射尿酸鈉混懸液1 d至3 d各組大鼠右足踝關(guān)節(jié)明顯腫脹；與模型組比較，抗痛風(fēng)膠囊和陽性藥對照組AGA大鼠于相應(yīng)藥物治療后3～5 d，右足踝關(guān)節(jié)腫脹明顯減輕。

圖1 尿酸鈉注射大鼠關(guān)節(jié)腫脹度

2.2 關(guān)節(jié)軟骨組織病理檢查 肉眼觀察可見，模型組滑膜充血、表面有炎細(xì)胞及纖維素附著，軟骨表面可見灶狀糜爛。顯微鏡下可見，空白組軟骨面完整，細(xì)胞排列整齊，基質(zhì)染色均勻；模型組見軟骨表面不完整，軟骨細(xì)胞排列層次紊亂，細(xì)胞腫脹明顯，基質(zhì)染色不均，伴有炎細(xì)胞浸潤。與模型組比較，抗痛風(fēng)膠囊組與秋水仙堿組軟骨表面相對完整，軟骨細(xì)胞排列層次較整齊，基質(zhì)染色基本均勻，與空白組相似，表層和中層可見較多軟骨細(xì)胞，基本接近空白組軟骨組織結(jié)構(gòu)(見圖2)。

注:A:空白組(×100，×200);B:模型組(×100，×200)C:陽性藥組(×100，×200);D:抗痛風(fēng)膠囊低劑量組(×100，×200)。 圖2 抗痛風(fēng)膠囊對AGA大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織病理變化的影響(HE染色)

3 討論

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是由于尿酸鹽在關(guān)節(jié)滑膜或軟骨的沉積，主要侵犯關(guān)節(jié)的滑膜、關(guān)節(jié)軟骨和皮下組織。在發(fā)病機(jī)制中, 體液的pH 值和關(guān)節(jié)局部溫度降低、高尿酸血癥以及原沉積在結(jié)締組織部位的結(jié)晶脫落,使大量的尿酸鹽結(jié)晶進(jìn)入關(guān)節(jié)腔，關(guān)節(jié)腔內(nèi)的尿酸鹽結(jié)晶被白細(xì)胞吞噬后, 溶酶體等細(xì)胞器被破壞, 釋放出激肽、組胺、趨化因子等物質(zhì), 而引起局部血管擴(kuò)張和滲透性增加、白細(xì)胞集聚等引起非特異性的炎癥反應(yīng)。近來，隨著生活方式與飲食結(jié)構(gòu)的改變，高尿酸血癥和痛風(fēng)發(fā)病率呈明顯上升趨勢，已逐漸發(fā)展成為僅次于糖尿病的第二大代謝性疾病，嚴(yán)重威脅人類健康[4-5]。

中醫(yī)理論學(xué)認(rèn)為，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎其病因病機(jī)多與熱邪、濕熱之邪痹阻關(guān)節(jié)、經(jīng)絡(luò)相關(guān)[6]?？雇达L(fēng)膠囊是以桃仁、苡仁、烏梢蛇、紅花、黑芝麻、桂圓、木瓜、枸杞等多種野生動植物為原料組成，在黔北地區(qū)民間用于痛風(fēng)治療?，F(xiàn)代藥理學(xué)表明，烏梢蛇具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗驚、抗炎的藥理作用。研究證明，給予佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠灌服烏梢蛇體富含的烏梢蛇Ⅱ型膠原蛋白，可以明顯抑制滑膜細(xì)胞炎癥因子的水平和活性[7]，枸杞對特異性免疫、非特異性免疫功能也具有調(diào)節(jié)作用，同時(shí)木瓜可以明顯減輕大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎的癥狀和特征，改善滑膜細(xì)胞異常超微結(jié)構(gòu)，降低關(guān)節(jié)的腫脹度，減輕炎癥反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)將尿酸鈉晶體注入大鼠右足踝關(guān)節(jié)腔后，大鼠右足踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯腫脹，且大鼠出現(xiàn)一定程度的行走困難和步態(tài)改變，組織病理學(xué)檢查進(jìn)一步證實(shí)關(guān)節(jié)面的輕度損害和軟骨細(xì)胞腫脹，表明制備AGA模型成功。與空白組比較，模型組AGA大鼠右足踝關(guān)節(jié)腫脹明顯，且HE染色后的組織病理學(xué)檢查也進(jìn)一步證實(shí)，關(guān)節(jié)軟骨組織出現(xiàn)了明顯的炎癥反應(yīng)，即表現(xiàn)為軟骨表面不完整，軟骨細(xì)胞排列層次紊亂，腫脹明顯，并有炎細(xì)胞浸潤，基質(zhì)染色不均勻，骨髓腔也出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤和充血。與模型組比較，抗痛風(fēng)膠囊高、低劑量與秋水仙堿組均明顯改善軟骨組織炎癥反應(yīng)，軟骨表面較完整，光滑，軟骨細(xì)胞排列較整齊，基質(zhì)染色基本均勻，與空白組軟骨組織結(jié)構(gòu)相似，表明抗痛風(fēng)膠囊能明顯改善AGA大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)組織的病理學(xué)改變，較好的減輕了軟骨組織的炎癥反應(yīng)。

[1] 王晨，葉任高，劉厚鈺，等.內(nèi)科學(xué)[M].第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：867-868.

[2]袁良東.抗痛風(fēng)膠囊對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的治療作用及機(jī)制[D].遵義醫(yī)學(xué)院碩士論文，2011：22.

[3]陳文照，林堅(jiān)，金策，等.痛風(fēng)寧對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)炎下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志，2001,9(1)：18.

[4]張昱.痛風(fēng)[M].北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2006:120-2122.

[5]薛耀明,李晨鐘.痛風(fēng)的診斷與治療[M].第2版.北京:人民軍醫(yī)出版社,2006:231-2235.

[6]李紅，朱曉平，符文彬，等．臨床路徑在非針灸專業(yè)本科生針臨床帶教中的應(yīng)用研究[J]．廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,10(3)：143-144.

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[收稿2012-10-28;修回2013-02-17]

(編輯：譚秀榮)

Anti-goutcapsuleimprovesthepathologicalchangesinjointofacutegoutyarthritisrats

Zhongzhengxia1,Yuhong1,Yuanliangdong2,Yangyibin1,Yulimei3,Putao1

(1.Department of Nephritic Medicine, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China; 2.Department of Nephritic Medicine,The Affiliated Hospital of Jining Medical University, Shandong Jining 272029, China;3.Key Laboratory of Cell Engineering of Guizhou Province, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Guizhou Zunyi 563099,China)

ObjectiveTo explore the effects of anti-gout capsule on pathological changes in articular cartilage tissues of acute gouty arthritis (AGA) rats.MethodsFifty male SD rates were randomly divided into the control, model, positive control (cochicine) and anti-gout capsule (low dose and high dose) groups with 10 rats in each group. AGA model was established by the injection of sodium urate into the joint cavity. Rats in the positive control (cochicine) and anti-gout capsule (low dose and high dose) groups were fed by gavage with cochicine (0.8 mg/kg) and anti-gout capsule (0.3 and 1.2 g/kg) once a day for 5 days. Rats were sacrificed 2 h after the last intragastric administration. Rat ankle joint swelling was observed by the naked eyes and the pathological changes of rat articular cartilage were analyzed by hematoxylin-eosin (HE) staining.ResultsCompared with the model group, AGA rat ankle joint swelling in positive control and anti-gout capsule groups was significantly attenuated. HE staining assay showed that compared with the control group, the irregular surface of rat ankle joint cartilage, the uneven dyeing of matrix, the disarrangement of cartilage cells, obvious cell edema and a large number of inflammatory cells infiltration were presented in rat cartilage and marrow chamber of model group, which was significantly attenuated by cochinice and anti-gout capsule (low dose and high dose) treatement.ConclusionThe anti-gout capsule could relieve the cartilage damage in AGA rats.

anti-gout capsule; acute gouty arthritis; joint

R589.7

A

1000-2715(2013)02-0105-03

遵義醫(yī)院附屬醫(yī)院資助課題(NO：201009)。

于泓，男，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：風(fēng)濕腎病研究，E-mail:yyyhong6567@yahoo.com。