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    血必凈注射液對(duì)急性百草枯中毒大鼠IL-1、IL-6、TNF-α的影響

    2013-10-16 01:15:44張志剛
    實(shí)用藥物與臨床 2013年1期
    關(guān)鍵詞:染毒百草肺纖維化

    張志剛,任 靜,賈 東,趙 敏

    在我國(guó),百草枯中毒已成為內(nèi)科常見(jiàn)的急危重癥,病死率極高,可達(dá)60.3%~87.8%[1-3]。百草枯可對(duì)人體多臟器造成損傷,患者最終多死于多臟器功能衰竭或呼吸衰竭,而其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚[4]。目前認(rèn)為可能與百草枯中毒引起的炎性反應(yīng)有關(guān),因此,如何抑制百草枯引起的炎性反應(yīng)、減少肺纖維化及多臟器功能損傷成為目前研究的焦點(diǎn)。

    大量基礎(chǔ)研究以及臨床實(shí)踐證明,血必凈具有強(qiáng)效抗內(nèi)毒素、拮抗內(nèi)毒素誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源性炎性介質(zhì)及細(xì)胞因子失控性釋放的作用,同時(shí)提高超氧化物歧化酶活性等作用[5-8]。

    本研究通過(guò)檢測(cè) IL-1、IL-6、TNF-α 的表達(dá)水平,探討血必凈對(duì)百草枯引起的炎性反應(yīng)的抑制作用,從而為臨床治療提供依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

    1.1 材料 雄性Wistar大鼠30只,體質(zhì)量200~250 g,由我院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。飼養(yǎng)室溫度20~25℃,恒溫,濕度65%恒濕,飼養(yǎng)動(dòng)物均單籠飼養(yǎng),自由飲水。血必凈注射液由天津紅日藥業(yè)有限公司惠贈(zèng);20%百草枯購(gòu)于遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院;免疫組織化學(xué)所需試劑:ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫吸附法PBS緩沖液,均購(gòu)自沈陽(yáng)萬(wàn)類生物科技有限公司;蒸餾水、生理鹽水等均由我院實(shí)驗(yàn)室提供。主要儀器:ELISA酶標(biāo)檢測(cè)儀,微量移液器,塑料滴頭;37℃孵育箱,-80℃深低溫冰箱,高速離心機(jī)等。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及中毒模型制造 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,將大鼠按照隨機(jī)原則分組編號(hào),分為Ⅰ組(空白對(duì)照組)、Ⅱ組(百草枯染毒組)、Ⅲ組(血必凈治療組),每組10只。Ⅰ組大鼠給予生理鹽水10 mL/kg灌胃;Ⅱ、Ⅲ組大鼠給予百草枯20 mg/kg灌胃(將20%百草枯稀釋至0.2%百草枯,給予10 mL/kg=20 mg/kg灌胃),觀察大鼠的生命狀態(tài),注意大鼠有無(wú)死亡。

    1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的治療及標(biāo)本采集、分析 在上述動(dòng)物處置30 min后,Ⅰ、Ⅱ組大鼠分別給予生理鹽水10 mL/kg腹腔注射,1次/d,直至大鼠被處死;血必凈治療組大鼠分別給予血必凈注射液10 mL/kg腹腔注射,1次/d,直至大鼠被處死。上述大鼠在處理后3、7、14d分別取眶內(nèi)眥靜脈血,于4℃高速離心機(jī)3 000 r/min高速離心15 min后,取上層血清,置于-80℃冰箱待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以表示,兩組間比較采用單因素獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    大鼠在14d內(nèi)死亡1只,為染毒組大鼠,其余大鼠均存活;Ⅱ組及Ⅲ組大鼠較Ⅰ組萎靡,且皮毛較暗淡。大鼠均于第14天采血后采用寰椎脫位法處死。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

    表1 三組大鼠血清IL-1、IL-6值

    表2 三組大鼠血清TNF-α值

    由表1、表2可見(jiàn),染毒組及血必凈治療組IL-1、IL-6、TNF-α 濃度較空白組明顯升高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),說(shuō)明百草枯對(duì)大鼠機(jī)體造成了一定的炎性損傷;而血必凈治療組IL-1、IL-6、TNF-α濃度較染毒對(duì)照組明顯降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),說(shuō)明血必凈注射液對(duì)急性百草枯中毒大鼠IL-1、IL-6、TNF-α有一定的抑制作用。

    3 討論

    目前,許多學(xué)者認(rèn)為,百草枯可以損傷內(nèi)皮細(xì)胞的活性和細(xì)胞膜的功能,這是百草枯引起肺纖維化的原因之一。Tsukamoto等[9-10]發(fā)現(xiàn),百草枯處理過(guò)的肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞活力喪失、細(xì)胞膜功能發(fā)生障礙、NADPH減少、抗氧化防御系統(tǒng)酶活性增加,說(shuō)明百草枯直接破壞內(nèi)皮細(xì)胞,且與氧化應(yīng)激有關(guān)。同時(shí),百草枯中毒后,肺部出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),包括肺泡巨噬細(xì)胞等;而肺泡巨噬細(xì)胞能合成釋放大量具有多種生物活性的細(xì)胞因子、前炎癥介質(zhì)、趨化因子及蛋白酶等,在肺炎、肺纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要意義[11]。百草枯對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞的毒性具有時(shí)間-劑量依賴性,肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)百草枯攝取與濃度呈線性關(guān)系,隨著時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)外濃度可達(dá)到平衡,百草枯是通過(guò)彌散作用進(jìn)入巨噬細(xì)胞的。另外,中性粒細(xì)胞一旦被激活,本身又將產(chǎn)生一系列的細(xì)胞因子和其他炎性介質(zhì)如中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(BALFNE)等,形成級(jí)聯(lián)放大網(wǎng)絡(luò),導(dǎo)致惡性循環(huán),進(jìn)一步加重組織、器官損傷,其中肺纖維化是患者死亡的重要原因[12]。

    血必凈注射液由中藥紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸、魚(yú)腥草等組成,具有活血化瘀、疏通經(jīng)絡(luò)、潰散毒邪的作用,臨床上主要用于治療急危重癥如全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)及MODS等,其有效成分為紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸、芍藥苷、原兒茶醛等[13-14]。現(xiàn)代藥理證明,赤芍、丹參、紅花可以改善微循環(huán),增加血流量;降低炎癥反應(yīng)以及毛細(xì)血管的通透性,減少炎性滲出,促進(jìn)炎癥吸收,抑制炎性肉芽腫形成,因而可以充分降低感染過(guò)程的病理?yè)p害;而且還可以增強(qiáng)RES的吸附功能以及白細(xì)胞的吞噬能力,使血腫以及其他壞死組織易被吞噬細(xì)胞吞噬吸收。川芎嗪可以直接改善紅細(xì)胞變形性,抑制血小板聚集,抑制TXB2的合成和釋放,促進(jìn)PGI2的合成。另外,川芎嗪還可以阻止缺氧時(shí)細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流,產(chǎn)生擴(kuò)血管作用[15]。

    劉達(dá)興等[16]在對(duì)健康成年犬體外循環(huán)肺損傷的研究中發(fā)現(xiàn),血必凈注射液能減輕體外循環(huán)后血漿中TNF-α、IL-6和IL-8水平,對(duì)體外循環(huán)肺損傷有保護(hù)作用。孫元瑩等[17]發(fā)現(xiàn),血必凈注射液能顯著抑制急性肺損傷大鼠TNF-α表達(dá),對(duì)急性肺損傷具有良好的治療作用。在本實(shí)驗(yàn)研究中,血必凈治療組,大鼠血清中檢測(cè)TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá)水平都明顯低于染毒組,說(shuō)明血必凈有效地抑制了急性百草枯中毒引起的炎性反應(yīng),減少了對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷。從而為百草枯中毒的救治提供有力的證據(jù)。

    [1]劉偉,趙敏.血必凈聯(lián)合甲強(qiáng)龍治療百草枯中毒患者肺損傷的研究[J].實(shí)用藥物與臨床,2009,12(1):13-15.

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    [9]Tsukamoto M,Tampo Y,Sawada M,et al.Paraquat-induced oxidative stressed dysfunction of the glutathione redox cycle in pulmonary microvascular endothelial cells[J].Toxicology and Applied Pharmacology,2002,178:82-92.

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