去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞與懸浮紅細(xì)胞儲(chǔ)存期內(nèi)溶血率的比較

徐 忠，邱穎婕，龔裕春，金魏名，周筱嫣，陸 赟

（上海市血液中心 200051）

采用過(guò)濾方式去除血液中的白細(xì)胞，可有效預(yù)防某些輸血后不良反應(yīng)的發(fā)生，如非溶血性發(fā)熱反應(yīng)（NHFR）、白細(xì)胞抗原（HLA）同種免疫和巨細(xì)胞病毒（CMV）傳播等［1］，因此去白細(xì)胞血液在國(guó)內(nèi)、外采供血機(jī)構(gòu)中已得到廣泛的應(yīng)用。但是，也有報(bào)道認(rèn)為白細(xì)胞濾除過(guò)程可能會(huì)引起紅細(xì)胞發(fā)生不能接受的溶血現(xiàn)象。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于去白細(xì)胞血液的白細(xì)胞清除率和紅細(xì)胞回收率等質(zhì)量要求研究較多，對(duì)血液的溶血率變化研究較少，而且國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)也未對(duì)紅細(xì)胞類制品的溶血率進(jìn)行規(guī)定。因此，為了觀察去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞在儲(chǔ)存期內(nèi)的溶血率變化，本文對(duì)使用去白細(xì)胞濾器血袋制備的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞制品和從未經(jīng)過(guò)濾全血中分離出的懸浮紅細(xì)胞制品，取樣檢測(cè)儲(chǔ)存期內(nèi)紅細(xì)胞溶血率，考核是否符合AABB標(biāo)準(zhǔn)和歐盟標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行比較分析，以期探討白細(xì)胞過(guò)濾過(guò)程對(duì)于紅細(xì)胞溶血率的影響。

1 資料與方法

1.1 材料 一次性使用200mL去白細(xì)胞濾器血袋（全血過(guò)濾）、一次性使用去白細(xì)胞濾器（懸浮紅細(xì)胞過(guò)濾）、一次性使用普通四聯(lián)血袋各40套。

1.2 去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞制備

1.2.1 懸浮紅細(xì)胞過(guò)濾（以下簡(jiǎn)稱去白1組） 應(yīng)用一次性使用普通四聯(lián)血袋采集ACD－B抗凝全血40袋（每袋200mL），采集后儲(chǔ)存于（4±2）℃冰箱過(guò)夜。第2天3 820r／min離心20 min，去除上層血漿，添加 MAP制備成懸浮紅細(xì)胞。在（4±2）℃環(huán)境中按照去白細(xì)胞濾器血袋操作規(guī)程進(jìn)行過(guò)濾，濾后即成去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞。

1.2.2 全血過(guò)濾（以下簡(jiǎn)稱去白2組） 應(yīng)用一次性使用去白細(xì)胞濾器血袋采集ACD－B抗凝全血40袋（每袋200mL），采集后儲(chǔ)存于（4±2）℃冰箱過(guò)夜。第2天在（4±2）℃環(huán)境中按照去白細(xì)胞濾器血袋操作規(guī)程進(jìn)行全血過(guò)濾，濾后全血3 820 r／min離心20min，去除上層血漿，添加MAP制備成去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞。

1.3 懸浮紅細(xì)胞制備（以下簡(jiǎn)稱紅懸組） 應(yīng)用一次性使用普通四聯(lián)血袋采集ACD－B抗凝全血40袋（每袋200mL），采集后儲(chǔ)存于（4±2）℃冰箱過(guò)夜。第2天3 820r／min離心20 min，去除上層血漿，添加MAP制備成懸浮紅細(xì)胞。

1.4 樣品留取和檢測(cè) 3組血液制備后置于（4±2）℃冰箱中儲(chǔ)存，分別于第14、21、28、35天留取血液標(biāo)本，用全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（Beckman-Coulter AC-T diffⅡ）直接測(cè)定血紅蛋白（Hb）和紅細(xì)胞比容（Hct），用鄰甲聯(lián)苯胺法測(cè)定游離血紅蛋白（FHb），計(jì)算兩組的紅細(xì)胞溶血率。紅細(xì)胞溶血率（%）＝

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以x±s表示，采用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

去白組游離血紅蛋白絕對(duì)值和溶血率均高于同期紅懸組，且去白1組與紅懸組，去白2組與紅懸組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但兩組不同方法過(guò)濾組（去白1組和去白2組比較）溶血率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見表1、表2。紅懸組和去白1、2組儲(chǔ)存期末的溶血率均小于0.8%，符合歐洲標(biāo)準(zhǔn)和AABB標(biāo)準(zhǔn)。

表1 紅懸組和去白組儲(chǔ)存期上清液游離血紅蛋白結(jié)果的比較（x±s，g／L）

表2 紅懸組和去白組儲(chǔ)存期溶血率結(jié)果的比較（%）

3 討 論

由于去白細(xì)胞血液能降低多種輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，許多發(fā)達(dá)國(guó)家采用血液全面白細(xì)胞去除（universal leukocyte-reduction，ULR）策略以提高血液安全［2］。但在臨床應(yīng)用時(shí)，有血站接到報(bào)告有去白細(xì)胞血液出現(xiàn)肉眼可見溶血現(xiàn)象，認(rèn)為可能和血液過(guò)濾過(guò)程中紅細(xì)胞機(jī)械性損傷有關(guān)，而加拿大學(xué)者Gyongyossy-Issa等認(rèn)為白細(xì)胞濾除后，避免了白細(xì)胞死亡后細(xì)胞內(nèi)水解酶的釋放，降低了儲(chǔ)存期內(nèi)紅細(xì)胞的溶血率［3］。由于紅細(xì)胞溶血影響著輸血的有效性和安全性，歐盟和AABB均規(guī)定以儲(chǔ)存期末溶血率小于0.8%作為血液的溶血程度標(biāo)準(zhǔn)。去白細(xì)胞血液的溶血結(jié)果還受到獻(xiàn)血者個(gè)體差異、過(guò)濾器類型、原始白細(xì)胞濃度、過(guò)濾時(shí)血液儲(chǔ)存時(shí)間和過(guò)濾溫度等因素的影響［4］。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種不同制備流程的去白組和紅懸組在儲(chǔ)存期間的紅細(xì)胞溶血率均符合歐盟和AABB標(biāo)準(zhǔn)的要求（＜0.8%），兩種不同制備流程過(guò)濾的去白組溶血率結(jié)果高于同期未過(guò)濾組（紅懸組），但采用全血濾除白細(xì)胞和制備成懸浮紅細(xì)胞后再濾除白細(xì)胞，二者溶血程度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。采用懸浮紅細(xì)胞過(guò)濾的方式，主要是為確保血站在6h內(nèi)制備新鮮冰凍血漿的需求，但采用這種方式，需使用無(wú)菌連接器將去白細(xì)胞濾器與懸浮紅細(xì)胞血袋連接，成本較高。采用全血直接濾除白細(xì)胞成本較低，其缺點(diǎn)是整個(gè)操作流程耗時(shí)較長(zhǎng)，有部分血液無(wú)法制備成新鮮冰凍血漿（6h內(nèi)無(wú)法制備完成）。以上兩種濾除白細(xì)胞的模式，血站可以根據(jù)自己工作流程的需要，做相應(yīng)選擇。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，作者認(rèn)為過(guò)濾組同期溶血率較高的現(xiàn)象可能和過(guò)濾過(guò)程的機(jī)械擠壓作用有關(guān)，但是過(guò)濾過(guò)程對(duì)于儲(chǔ)存期間溶血變化影響很小，而且溶血結(jié)果對(duì)照國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)都處于可以接受的范圍內(nèi)。

但是也要看到，有部分血液保存期末溶血率接近0.8%時(shí)，上清液的游離血紅蛋白檢測(cè)值已達(dá)到了2.1g／L左右。這種上清液的顏色較深，可能會(huì)引起用血醫(yī)院關(guān)于血液溶血的投訴，因此在全面推行去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞時(shí)，一是要結(jié)合國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)與醫(yī)院做好宣教工作，二是制備后盡早發(fā)往臨床，同時(shí)可建議臨床適當(dāng)縮短去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的保存期，根據(jù)本文的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，可建議臨床盡量在28d內(nèi)將去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞輸注入患者體內(nèi)，以更好地確保輸血的有效性。

［1］ Beckman N，Sher G，Masse M，et al.Review of the quality monitoring methods used by countries using or implementing universal leukoreduction［J］.Transfus Med Rev，2004，18（1）：25-35.

［2］ Bassuni WY，Blajchman MA，Al-Moshary MA.Why implement universal leukoreduction？［J］.Hematol Oncol Stem Cell Ther，2008，1（2）：106-123.

［3］ Gyongyossy-Issa MI，Weiss SL，Sowemimo-Coker SO，et al.Prestorage leukoreduction and low-temperature filtration reduce hemolysis of stored red cell concentrates［J］.Transfusion，2005，45（1）：90-96.

［4］ Masse M.Universal leukoreduction of cellular and plasma components：process control and performance of the leukoreduction process［J］.Transfus Clin Biol，2001，8（3）：297-302.