原發(fā)性膽汁性肝硬化患者自身抗體檢測(cè)分析

翁厚光，曹維克，張迎梅，吳尚農(nóng)

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇 淮安223300）

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）是一種病因尚不明確、慢性進(jìn)行性膽汁淤積性自身免疫性肝臟疾病?？赡茉谝欢ㄟz傳背景下，由于持續(xù)性感染（細(xì)菌、病毒、真菌等）、環(huán)境因素或毒物作用等，導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)紊亂和自身免疫反應(yīng)。病理學(xué)特點(diǎn)為匯管區(qū)炎癥及免疫介導(dǎo)的肝內(nèi)膽管的破壞，最終造成肝纖維化、肝硬化及肝衰竭［1］。臨床上多見(jiàn)于40－60歲女性，實(shí)驗(yàn)室檢查除堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）等明顯升高及抗線(xiàn)粒體亞型－丙酮酸脫氫酶復(fù)合物（抗AMA－M2抗體）陽(yáng)性外。還有抗M2－3E（BPO）抗體、抗早幼粒細(xì)胞性白血病（PML）抗體、抗核包膜蛋白（GP210）抗體、抗多核點(diǎn)（SP100）抗體等自身抗體陽(yáng)性。本文擬對(duì)62例經(jīng)病理檢查確診為PBC的患者進(jìn)行自身抗體聯(lián)合檢測(cè)并分析其臨床意義，以提高對(duì)本病的早期診斷。

1 資料與方法

1．1 研究對(duì)象 收集我院2005年3月至2010年5月原發(fā)性膽汁性肝硬化患者62例血清標(biāo)本，其中男6例，女56例，年齡38－65歲，平均年齡51歲；血清γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）（483．0±75．3）U／L、堿性磷酸酶（ALP）（538．0±83．3）U／L。排除：（1）病毒性肝炎；（2）肝內(nèi)外占位、梗阻及原發(fā)性硬化性膽管炎；（3）藥物性及酒精性肝損害；（4）肝豆?fàn)詈俗冃约把　BC診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2009年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)PBC診斷指南［2］。同時(shí)收集乙肝后肝硬化患者30例（疾病對(duì)照組）及健康體檢者50例（正常對(duì)照組）血清標(biāo)本。病毒性肝炎病原學(xué)分型符合2000年9月西安會(huì)議病毒性肝炎防治方案中診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。正常對(duì)照組所有對(duì)象均無(wú)心、肝、肺等器官疾患，肝功能檢測(cè)無(wú)異常。PBC患者與兩對(duì)照組年齡、性別差異無(wú)顯著性。

1．2 檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法 免疫印跡法檢測(cè)包括：抗AMA－M2抗體、抗 M2－3E抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體、抗LKM－1抗體、抗LC－1抗體、抗SLA／LP抗體等自身抗體。試劑為德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司產(chǎn)品。操作按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。結(jié)果判定：用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照膜條圖觀(guān)察特定區(qū)域膜條，清晰可見(jiàn)著色者判為陽(yáng)性。

1．3 肝臟穿刺活檢組織病理學(xué)檢查 B超引導(dǎo)下穿刺，標(biāo)本長(zhǎng)1．5－2．0cm，鏡下包括至少6個(gè)匯管區(qū)，10%甲醛固定，石蠟包埋，HE及Masson染色。由我院病理科經(jīng)驗(yàn)豐富的主任醫(yī)師采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)一次性閱片。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS15．0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各種自身抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。

抗AMA－M2抗體對(duì)PBC診斷的敏感度82．3%，特異度91．2%；抗 M2－3E抗體對(duì)PBC診斷的敏感度90．3%，特異度93．8%；抗SPl00抗體對(duì)PBC診斷的敏感度35．5%，特異度98．8%；抗PML抗體對(duì)PBC診斷的敏感度29．0%，特異度98．8%；抗GP210抗體對(duì)PBC診斷的敏感度41．9%，特異度97．5%，由此說(shuō)明，抗 AMA－M2抗體、抗3E抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PBC的診斷有著較高的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)于PBC的篩查可起到重要作用。

表1 各種自身抗體陽(yáng)性檢出率 ［%（例）］

2．2 自身抗體陽(yáng)性和陰性患者肝功能衰竭的發(fā)生率 62例PBC患者中，抗GP210抗體陽(yáng)性患者肝功能衰竭的發(fā)生率明顯高于抗體陰性患者（P＜0．05）。而抗 AMA－M2 抗 體、抗 SPl00 抗體、抗PML抗體陽(yáng)性和陰性患者組之間肝功能衰竭發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。見(jiàn)表2。

表2 各種自身抗體與肝功能衰竭發(fā)生率 （%）

3 討論

PBC屬于自身免疫性肝病之一，近年來(lái)隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)此病的研究和診斷技術(shù)的提高以及臨床醫(yī)生對(duì)該病認(rèn)識(shí)程度的加深，PBC在我國(guó)肝病患者中檢出比例逐年增多。其早期可無(wú)癥狀，部分患者僅有乏力、納差等非特異性表現(xiàn)。對(duì)該病早期的積極治療不僅可以延緩病程的發(fā)展，而且一定程度上可以改善預(yù)后。很多患者發(fā)現(xiàn)確診時(shí)，已達(dá)到后期嚴(yán)重的肝硬化及其并發(fā)癥。因此早期診斷至關(guān)重要。

抗線(xiàn)粒體抗體M2亞型是PBC的特異性抗體。AMA－M2的靶抗原主要是抗線(xiàn)粒內(nèi)膜上的丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC－E2）、酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC－E2）和支鏈二氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC－E2），3個(gè)靶抗原（BPO）聯(lián)合檢測(cè)，其敏感性和特異性都會(huì)升高［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，在PBC的診斷中以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2－3E為靶抗原的免疫印跡法比傳統(tǒng)的僅以PDC為靶抗原的免疫印跡法有更高的敏感性和特異性。此結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致［5］。

核點(diǎn)型抗核抗體主要的靶抗原包括：①SP100蛋白，主要存在于PBC患者中的一種轉(zhuǎn)錄激活蛋白；②早幼粒細(xì)胞白血病蛋白（PML），為細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)抑制蛋白，異常表達(dá)在早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，最早在急性早幼粒白血病患者的白血病細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，是和維甲酸受體融合的蛋白。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，PBC中抗SP100抗體的陽(yáng)性率大約為35%，在排除了其他疾病的可能性，并且符合PBC的臨床表現(xiàn)的情況下，特別是對(duì)于抗線(xiàn)粒體抗體陰性的患者來(lái)說(shuō)，抗SP100抗體對(duì)PBC的診斷具有高度的特異性；約90%的PBC患者可同時(shí)檢測(cè)到抗SP100抗體和抗PML抗體，兩者具有相同的敏感性和特異度，且出現(xiàn)抗SP100抗體和抗PML抗體的PBC患者病情進(jìn)展快，預(yù)后較差。以上說(shuō)明，在PBC中這種特殊的抗SP100抗體和抗PML抗體實(shí)際上預(yù)示了PBC的早期診斷，提高了PBC檢出率，并且具有高度特異性，是檢測(cè)PBC的重要診斷標(biāo)志［6，7］。本研究結(jié)果顯示：抗SP100抗體和抗PML抗體的敏感性分別為35．5%和29．0%、特異度均為98．8%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

GP210為核孔復(fù)合物的主要相關(guān)糖蛋白，核孔區(qū)域是PBC抗體識(shí)別核包膜自身抗原的另一個(gè)區(qū)域，25%的PBC患者存在抗核包膜蛋白自身抗體，GP210抗體診斷PBC的特異性為99%，被認(rèn)為是PBC的高特異性抗體［8，9］。核孔復(fù)合體具有將核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)及維持細(xì)胞功能的作用，從理論上分析，該位點(diǎn)受損可直接影響細(xì)胞功能并加重病情，因此抗GP210抗體與PBC的嚴(yán)重程度和預(yù)后具有更為緊密的相關(guān)性?？笹P210抗體與嚴(yán)重的界面性肝炎和小葉炎癥有關(guān)，陽(yáng)性提示易進(jìn)展為肝衰竭［10］。本次研究結(jié)果表明，抗GP210抗體的敏感度41．9%、特異度97．5%，抗GP210抗體陽(yáng)性患者中肝功能衰竭的發(fā)生率為30．8%，明顯高于抗GP210抗體陰性患者，僅為2．8%，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。而與PBC相關(guān)的自身抗體：抗AMA－M2抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體陽(yáng)性與陰性患者中肝功能衰竭的發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），表明它們與該病的預(yù)后并不相關(guān)。因此抗GP210抗體不僅可協(xié)助早期診斷PBC，對(duì)該病的預(yù)后亦有重要意義。

綜上所述，抗AMA－M2抗體、抗 M2－3E抗體、抗SP100抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體檢測(cè)在PBC患者血清中具有很高的特異度和相當(dāng)?shù)拿舾卸?，可作為PBC診斷的高度特異性抗體，聯(lián)合檢測(cè)極大地增加了PBC的診斷率，使臨床不容易漏診。將使更多的PBC患者得到早期診斷和正確治療，并為進(jìn)一步開(kāi)展PBC發(fā)病機(jī)制及臨床研究奠定基礎(chǔ)。

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