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    多重PCR在診斷無(wú)癥狀性尿道炎、宮頸炎人群中的臨床應(yīng)用

    2013-10-08 03:23:44范世珍林松青陳安彬深圳市福田區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科廣東深圳518034
    海南醫(yī)學(xué) 2013年4期
    關(guān)鍵詞:尿道炎性傳播宮頸炎

    范世珍,林松青,陳安彬(深圳市福田區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東 深圳 518034)

    沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,Ct)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,Ng)、生殖支原體(Mycoplasma genitalium,Mg)和陰道毛滴蟲(chóng)(Trichomonas vaginalis,Tv)是引起性傳播疾病(Sexually transmitted disease,STD)最常見(jiàn)的病原體[1-3]。然而,這些病原體感染后往往缺乏典型的臨床癥狀,這給臨床診斷帶來(lái)了一定的困難。對(duì)于無(wú)癥狀性STD患者而言,常規(guī)的細(xì)菌培養(yǎng)陰性結(jié)果往往容易導(dǎo)致他們忽視自己的病情,從而成為危害極大的傳染源。因此,本研究旨在評(píng)價(jià)多重PCR技術(shù)在無(wú)癥狀患者的性傳播感染如尿道炎、宮頸炎相關(guān)病原體的篩查中具有重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本采集 本文所入選的216例研究對(duì)象為2010年7月至2011年12月本院體檢人群,其中男性124例,女性92例,年齡平均(31.4±10.1)歲,所有研究對(duì)象在納入研究前均自愿參與并進(jìn)行了簡(jiǎn)要的問(wèn)卷調(diào)查。所有研究對(duì)象處于性活躍期且無(wú)臨床癥狀,年齡在20~60歲。性活躍的定義為連續(xù)3個(gè)月內(nèi)有性生活。若3個(gè)月內(nèi)曾有泌尿生殖道感染史,但納入研究時(shí)已被治愈的研究對(duì)象不納入本文研究范圍。

    1.2 DNA提取 收集50 ml男性首段尿,女性在婦科醫(yī)生的協(xié)助下使用宮頸拭子標(biāo)本。于室溫離心10 min,棄上清,加入1 ml無(wú)菌PBS重懸。DNA的提取根據(jù)廠家試劑盒提供的方案進(jìn)行。未及時(shí)用于多重PCR的DNA置于-20℃保存。

    1.3 多重PCR反應(yīng) 多重PCR的擴(kuò)增按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行。本試劑盒中含有Ct等6種病原體保守基因序列中的特異性引物,并含有用于排除標(biāo)本抑制物存在的內(nèi)參PCR mix和陽(yáng)性對(duì)照樣品。本實(shí)驗(yàn)用的PCR儀為Eppendorf公司梯度PCR儀。PCR結(jié)束后電泳觀察結(jié)果,預(yù)期片段處出現(xiàn)反應(yīng)條帶判斷為陽(yáng)性。

    2 結(jié)果

    2.1 病原體檢出情況 在216例研究對(duì)象中,95例(43.98%)患者泌尿生殖道內(nèi)至少存在一種微生物感染。Ct、Ng、Mg、Uu、Mh和Tv在無(wú)癥狀人群中的感染率見(jiàn)表1。

    表1 無(wú)癥狀人群中6種病原體的檢出情況[例(%)]

    2.2 混合感染情況 在所有研究對(duì)象中Ct、Ng、Mg和Tv單一感染分別為10例、1例、1例、2例。此外,多重感染也常見(jiàn),主要是Ct合并Mh或Uu感染。在感染有Ct的人群中,Uu和Mh的感染率分別為27.8%(5/18)和33.3%(6/18)。此外,Mg和Tv與其他細(xì)菌混合感染也常見(jiàn),見(jiàn)表2。

    表2 無(wú)癥狀人群中病原體混合感染情況[例(%)]

    3 討論

    Ct、Ng、Mg、Tv等是引起無(wú)癥狀性尿道炎、宮頸炎最重要的病原體[4]。在本研究中,這4種病原體的感染率達(dá)12.04%(26/216)。經(jīng)多重PCR鑒定,Ct感染18例,Ng感染2例,Mg感染2例,Tv感染4例。此外,在這216例無(wú)癥狀人群中復(fù)合感染11例。以上結(jié)果表明如果醫(yī)生僅根據(jù)患者的癥狀進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性治療的話,有可能導(dǎo)致治療失敗。因此,立即進(jìn)行多重檢測(cè)顯得有必要,因?yàn)閷?duì)于多重感染患者而言,可使治療方案最佳化。相對(duì)上述4種病原體,Uu和Mh在STD以及非淋球菌性尿道炎(Nongonococcal urethritis,NGU)中的作用目前仍有爭(zhēng)議。盡管有報(bào)道稱(chēng)Uu可以導(dǎo)致持續(xù)性NGU,但正常人的尿道經(jīng)常可以分離出Uu。Mh目前也被認(rèn)為是人體正常寄生菌,但是它在特定條件下(如免疫力低下)可以作為病原體致病[5-6]。通常,泌尿生殖道中Mh定植的概率,男性是4%~13%,女性是21%~54%[7]。本研究證實(shí)Mh的感染率男性為2.78%,女性11.57%,略低于報(bào)道,這可能與本研究人群的環(huán)境與飲食習(xí)慣有關(guān)。

    本文結(jié)果顯示,Uu和Mh的感染率分別為17.59%和14.35%,但若合并Ct感染,其陽(yáng)性率上升為27.8%和33.3%。其原因目前仍不清楚,Ct感染后引起的黏膜損傷可能更有利于Uu和Mh的定植。

    在多重PCR的反應(yīng)體系中,由于使用了多對(duì)引物,因此能一次性擴(kuò)增多個(gè)目標(biāo)序列,這為臨床醫(yī)生同時(shí)檢測(cè)許多臨床領(lǐng)域的病原微生物提供了方便。尤其是當(dāng)臨床樣本量極少或難以多次獲取時(shí),多重PCR可以利用單個(gè)的樣本得到更多的目的片段。Horii等[8]證實(shí),相比普通PCR,多重PCR總體敏感性是96%,特異性是100%,且不存在其他微生物的交叉反應(yīng),特別是對(duì)于高危人群(如職業(yè)性工作者)、有多個(gè)性伴侶及免疫力低下人群。通過(guò)運(yùn)用多重PCR,臨床醫(yī)生可以快速鑒定出多種微生物感染,并能對(duì)無(wú)癥狀人群及時(shí)治療,從而可以降低性傳播病原體的感染率。

    [1]Falk L,Fredlund H,Jensen JS.Signs and symptoms of urethritis and cervicitis among women with or without Mycoplasma genitali?um or Chlamydia trachomatis infection[J].Sex Transm Infect,2005,81(1):73-78.

    [2]Land JA,Van Bergen JE,Morre SA,et al.Epidemiology of Chlamydia trachomatis infection in women and the cost-effectiveness of screening[J].Hum Reprod Update,2010,16(2):189-204.

    [3]Sethupathi M,Blackwell A.Chlamydia trachomatis infection:the efficacy and safety of a fast-track referral and treatment system[J].Int J STDAIDS,2009,20(3):184-187.

    [4]Gdoura R,Kchaou W,Ammar-Keskes L,et al.Assessment of Chla?mydia trachomatis,Ureaplasma urealyticum,Ureaplasma parvum,Mycoplasma hominis,and Mycoplasma genitalium in semen and first void urine specimens of asymptomatic male partners of infertile couples[J].JAndrol,2008,29(2):198-206.

    [5]Alados JC,Cobo F,Jiménez MD,et al.Catheter infection by Myco?plasma hominis in a patient with acute lymphoblastic leukemia[J].Enferm Infecc Microbiol Clin,1998,16(5):252-261.

    [6]Martin DH.Nongonococcal urethritis:new views through the prism of modern molecular microbiology[J].Curr Infect Dis Rep,2008,10(2):128-132.

    [7]Kilic D,Basar MM,Kaygusuz S,et al.Prevalence and treatment of Chlamydia trachomatis,Ureaplasma urealyticum,and Mycoplasma hominis in patients with non-gonococcal urethritis[J].Jpn J Infect Dis,2004,57(1):17-20.

    [8]Horii T,Ohtsuka H,Osaki M,et al.Use of a dual priming oligonucleotide system to detect multiple sexually transmitted pathogens in clinical specimens[J].LettAppl Microbiol,2009,49(5):46-52.

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