• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高效液相色譜法構(gòu)建黃連上清丸指紋圖譜

    2013-10-08 03:04:58張少君車燕妮蘇秀娟張凌斐張吉芬
    中國科技信息 2013年19期
    關(guān)鍵詞:小檗黃連指紋

    張少君 車燕妮 蘇秀娟 張凌斐 張吉芬

    威海市疾病預(yù)防控制中心,山東 威海 264003

    應(yīng)用指紋圖譜監(jiān)控中藥材或中成藥的質(zhì)量的穩(wěn)定性和專一性在國際上已成為一種趨勢[1],美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)[2]、歐共體藥審委(EMEA)[3]和世界衛(wèi)生組織(WHO)均要求提供植物藥產(chǎn)品的指紋圖譜以保證其質(zhì)量的一致性。2000年,國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)了《中藥注射劑指紋圖譜的技術(shù)要求(暫行)》,確立了指紋圖譜的法定地位。

    黃連上清丸是著名的解表藥,主要功能是清熱通便,散風(fēng)止痛[4]。中國藥典(2010版)采用薄層掃描法控制其中鹽酸小檗堿的含量,藥方中黃連和黃柏兩者都含有小檗堿,但二者功效不同,只測定小檗堿的含量不能真實(shí)反映藥品的質(zhì)量。黃連上清丸結(jié)構(gòu)復(fù)雜,其指紋圖譜尚未見報(bào),本文利用高效液相色譜(HPLC)法研究構(gòu)建指紋圖譜及數(shù)字化指紋譜,以便較全面有效地評(píng)價(jià)控制該制劑的質(zhì)量,供企業(yè)鑒別質(zhì)量參考。

    1 材料和方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    高效液相色譜系統(tǒng)(島津,日本)。色譜柱(250×4.6mmI.D.,5 m,安捷倫,美國)。紫外分光光度計(jì)(UV2401PC,島津,日本);分析天平(Sartorius,BS210S,德國);超聲波清洗器(Cole-Pharmer, USA)。

    色譜純甲醇(Caledon Laboratories, Canada),乙腈(Fisher Scientific, UK),乙酸(科密歐,天津,中國)和三乙胺(Tedia, USA)用于樣品的制備和配制流動(dòng)相。所有樣品的制備均使用超純水。鹽酸小檗堿(批號(hào):110713-200208)和黃芩苷(批號(hào):110715-200514)均購自于中國藥品生物制品檢定所。黃連上清丸隨機(jī)購于全國各醫(yī)院或藥房(見表1)。

    表1 黃連上清丸的生產(chǎn)廠家及批號(hào)

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 樣品溶液的制備

    將黃連上清丸水丸研成粉末,稱取100 mg,用70%甲醇+30% 0.2M鹽酸溶液超聲提取60 min;再用5,000 r/min離心10 min,0.45μm濾膜過濾,備用。

    1.2.2 高效液相色譜的分析條件

    實(shí)驗(yàn)采用雙泵洗脫梯洗脫:流動(dòng)相A相(甲醇-水-乙酸-三乙胺=10:89.1:0.8:0.1),B相(甲醇-水-乙酸-三乙胺=89.1:10:0.8:0.1)[5];洗脫梯度:0~10 min: 5~20%B, 10~50 min: 20~55% B, 50~70 min: 55~100% B,70~80 min: 100% B。流速0.9 mL/min。檢測波長254 nm,柱溫40℃。上樣量20μl。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 檢測方法的評(píng)價(jià)

    根據(jù)《中華人民共和國藥典》(2005年版),《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》的規(guī)定,進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的內(nèi)容包括準(zhǔn)確度、精密度、檢測限、定量限和線性。

    2.1.1 準(zhǔn)確度

    標(biāo)準(zhǔn)樣品中小檗堿和黃芩苷的含量分別為0.058mg/mL和0.308mg/mL,再分別加入0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品,用6個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià),測得平均回收率分別為96.8%,99.5%,RSD分別為0.9%,0.7%。

    2.1.2 精密度

    取同一樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次,計(jì)算得小檗堿、黃芩苷保留時(shí)間的RSD分別是0.4232%和0.4738%,具有較高的精密度。

    2.1.3 檢測限和定量限

    黃連上清丸在信噪比為3:1的條件下檢測,標(biāo)準(zhǔn)品的檢測限都低于0.1μg/mL。以信噪比為10:1時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行確定,定量限為1μg/mL。

    2.1.4 線性

    分別將儲(chǔ)備液稀釋成0.001mg/mL-1.0mg/mL制成系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液,用HPLC法進(jìn)行線性回歸分析。鹽酸小檗堿0.001~1mg范圍內(nèi)線性良好,回歸方程為y=111702327x-146629(R2=0.9998,n=7);黃芩苷在0.001mg~1.5mg范圍內(nèi)線性良好,回歸方程為y=32382153x-18828(R2=0.9999,n=7)。

    方法學(xué)評(píng)價(jià)的結(jié)果證明此方法的各項(xiàng)指標(biāo)符合指紋圖譜的要求,適合本研究的應(yīng)用。

    2.2 HPLC指紋圖譜的構(gòu)建

    為有效控制不同廠家黃連上清丸中有效成分的含量及分布,本文根據(jù)《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》建立了HPLC指紋圖譜。當(dāng)采用1.2.3的分析條件時(shí),主要色譜峰基本達(dá)到基線分離,指標(biāo)成分鹽酸小檗堿與其相鄰色譜峰的分離度很好。12個(gè)黃連上清丸圖像式指紋圖譜見圖1,每個(gè)記錄曲線均有50多個(gè)峰,樣品間的比較和描述比較困難,因而從這些色譜峰中挑選出在樣品中均穩(wěn)定出現(xiàn)的峰,即共有峰,黃連上清丸共設(shè)定了17個(gè)共有峰(圖2)。一組樣品中的共有峰,代表了一類生物樣品的共性,體現(xiàn)了該品種的特性,是與其他品種的區(qū)別之處。從而構(gòu)成了該生物體所特有的指紋,也稱為特征指紋。特征指紋峰的差異反映了同一品種生物體因不同產(chǎn)地、不同采收期等因素造成的質(zhì)量差異,可用作原料藥材、原料藥、中間體及成藥的質(zhì)控參數(shù)。為保障特征指紋峰的代表性,共有峰的峰面積至少占總峰面積的60%。從圖象式指紋譜上可以看出主要成分的濃度的整體分布、保留時(shí)間和共有峰的含量大致差異。但僅通過圖像式指紋譜難以對(duì)12個(gè)樣品做出定量的判斷,而且圖像式指紋譜本身也受操作因素的影響,從而導(dǎo)致較低的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

    圖1 黃連上清丸圖象式指紋譜Fig. 1 HPLC fingerprint of 12 coptis bolus for clearing the upper heat samples

    圖2 黃連上清丸的共有峰Fig. 2 Common peaks of coptis bolus for clearing the upper heat

    2.3 黃連上清丸高效液相色譜數(shù)字化指紋譜

    數(shù)字化色譜指紋譜是將復(fù)雜難辨的圖譜轉(zhuǎn)為直觀的數(shù)字,建立一系列參數(shù)和相應(yīng)的一整套比較規(guī)則和計(jì)算公式,有效地改善了原始色譜圖的波動(dòng)性,使色譜圖之間的直觀比較改變?yōu)閿?shù)據(jù)之間的比較,從而增強(qiáng)了樣品相互間的可比性。

    洪筱昆教授最早創(chuàng)立了數(shù)字化指紋譜法,以相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積為主要參數(shù),計(jì)算指紋譜重疊率、相似度和n強(qiáng)峰、特征指紋差異率并繪制特征指紋曲線等。本實(shí)驗(yàn)組以此為基礎(chǔ)并對(duì)數(shù)字化指紋圖譜的表現(xiàn)形式進(jìn)行了改進(jìn)。

    2.3.1 特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積

    黃連上清丸設(shè)定以鹽酸小檗堿作為參照峰,因它它是中藥的主要有效成分、它位于譜圖的中央位置而且與周圍峰有良好的分離度,并在12個(gè)樣品中穩(wěn)定出現(xiàn),且與前后兩色譜峰分離度較好。其相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積設(shè)為1.00,其他共有峰的保留時(shí)間及峰面積分別與之相比,得到了特征指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD在0.357~0.959%之間,均在方法誤差范圍內(nèi),認(rèn)為對(duì)應(yīng)色譜峰均為同一組分。各廠家黃連上清丸樣品中各組對(duì)應(yīng)洗脫峰相對(duì)峰面積的RSD在66.020%~112.281%之間,遠(yuǎn)大于10%,超出了方法誤差,認(rèn)為對(duì)應(yīng)組分含量差異顯著。

    2.3.2 特征指紋峰差異率

    共有峰差異率及特征指紋差異率按式(1.1)及式(1.2)計(jì)算,假定以1號(hào)樣品作為標(biāo)準(zhǔn)制劑,因?yàn)?號(hào)樣品的含量適中,其他樣品為待鑒制劑,各樣品的差異率及總差異率見表2。可以看出2號(hào)樣品、5~7號(hào)、9~12號(hào)樣品與S1相似程度較高,而3號(hào)、4號(hào)、8號(hào)樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品間均存在較大差異。

    AI鑒—待鑒樣品中某個(gè)峰的歸一化面積值;AI標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)樣品中某個(gè)峰的歸一化面積值;n—特征指紋譜峰的總數(shù)。

    2.3.3 特征指紋曲線

    黃連上清丸樣品的特征指紋曲線(圖3)可以直觀地反映不同樣品之間的近似程度,從整體角度看2號(hào)、5~7號(hào)、9~12號(hào)樣品與作為標(biāo)準(zhǔn)樣品S1相似程度很高,而3號(hào)、4號(hào)、8號(hào)樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品間均存在很大差異,這與總差異率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

    圖3 黃連上清丸特征指紋曲線Fig. 3 Characteristic fingerprint curve of coptis bolus for clearing the upper heat samples

    2.3.4 數(shù)字化指紋譜的改進(jìn)

    本實(shí)驗(yàn)組建立的數(shù)字化指紋圖譜以洪教授的數(shù)字化指紋譜法為基礎(chǔ),改進(jìn)了原有數(shù)字化指紋譜的表現(xiàn)形式,不僅包括相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積,還包括它們的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及差異率,使樣品間的量化比較一目了然。所反映的化學(xué)成分包括了研究對(duì)象的重要指標(biāo)成分,體現(xiàn)了指紋圖譜的系統(tǒng)性;指紋圖譜中反映的化學(xué)成分信息(如保留時(shí)間或遷移值)具有高度選擇性,這些成分之間的順序、比值在一定范圍內(nèi)是固定的,體現(xiàn)了特征性;在樣品制備方法、分析條件、結(jié)果處理等環(huán)節(jié)規(guī)范操作的前提下,由不同的操作者作出的指紋圖譜,其誤差在允許范圍內(nèi),保證了指紋圖譜的使用具有通用性和實(shí)用性(表2)。

    3 結(jié)語

    本文構(gòu)建了黃連上清丸的圖象式指紋圖譜和數(shù)字化指紋譜。從圖象式指紋譜上可以直觀地判斷不同樣品共有峰的含量差異比較顯著,這是由于原料、加工過程等多種因素引起。在數(shù)字化指紋譜中,通過對(duì)不同參數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià),推斷出每個(gè)廠家都按規(guī)定投入了十七味原藥材,而藥材的品質(zhì)以及藥材的投入量卻有顯著差異。該方法可借鑒用于其他不同廠家不同批次的制劑鑒定與評(píng)價(jià)參考。

    表2 黃連上清丸改進(jìn)后的的數(shù)字化指紋圖譜

    [1]Manhua Liu, Pew-Thian Yap, Invariant representation of orientation fields for fingerprint indexing. Pattern Recognition, 2012, 45(7):

    2532-2542.

    [2]FDA Guidance for Industry-Botanical Drug Products (Draft Guidance).US Food and Drug Administration, Rockville, 2000, pp.18 22.

    [3]Note for Guidance on Quality of Herbal Medicinal Products.European Medicines Agency, London, 2001.

    [4]國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典, 2010年版,一部[S]. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2005.

    [5]Shaojun Zhang, Fan Ouyang, Changhai Wang, and Ming Gu,Fingerprint of Tablet of Corydalis tuber for Alleviating Pain by HPLC.Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 31: 452-464, 2008。

    [6]洪筱坤,王智華. 中藥數(shù)字化色譜指紋譜[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2003.

    猜你喜歡
    小檗黃連指紋
    黃連、黃連-生地配伍中5種生物堿在正常、抑郁大鼠中體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的比較
    中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:38:12
    像偵探一樣提取指紋
    為什么每個(gè)人的指紋都不一樣
    貴州野生小檗屬植物土壤與植株微量元素相關(guān)性及富集特征
    交泰丸中小檗堿聯(lián)合cinnamtannin D1的降血糖作用
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:25:18
    黃芩苷-小檗堿復(fù)合物的形成規(guī)律
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:18
    黃連解毒湯對(duì)SAM-P/8小鼠行為學(xué)作用及機(jī)制初探
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:50
    基于自適應(yīng)稀疏變換的指紋圖像壓縮
    可疑的指紋
    大黃黃連瀉心湯加味治療胃癌癌前病變30例
    成人欧美大片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 听说在线观看完整版免费高清| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲国产欧美人成| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 美女黄网站色视频| 中国美女看黄片| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一本大道久久a久久精品| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品av久久久久免费| 亚洲成av人片免费观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲最大成人中文| 午夜a级毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产区一区二久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 在线观看www视频免费| 成年版毛片免费区| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美丝袜亚洲另类 | 最好的美女福利视频网| 丰满的人妻完整版| 长腿黑丝高跟| 天天添夜夜摸| 久久中文看片网| 亚洲av电影在线进入| 十八禁网站免费在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 国产免费av片在线观看野外av| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久中文字幕一级| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费人成视频x8x8入口观看| 九色成人免费人妻av| 麻豆国产97在线/欧美 | videosex国产| 午夜免费观看网址| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲av成人精品一区久久| 青草久久国产| 国产精品久久视频播放| 狠狠狠狠99中文字幕| 在线观看午夜福利视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产区一区二久久| svipshipincom国产片| 日日爽夜夜爽网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美性猛交黑人性爽| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久久九九精品影院| 国产亚洲欧美98| 欧美成人免费av一区二区三区| 午夜精品一区二区三区免费看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产av不卡久久| av在线天堂中文字幕| 成人午夜高清在线视频| 一本久久中文字幕| 在线看三级毛片| 日韩欧美国产在线观看| 午夜日韩欧美国产| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 三级国产精品欧美在线观看 | 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜影院日韩av| 久久精品国产清高在天天线| 俄罗斯特黄特色一大片| 禁无遮挡网站| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲午夜理论影院| www日本黄色视频网| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 露出奶头的视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久久久久大精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久亚洲真实| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美成人午夜精品| 国产三级在线视频| 天堂动漫精品| 亚洲黑人精品在线| 99热这里只有是精品50| av天堂在线播放| 欧美日韩乱码在线| 成人18禁在线播放| 不卡一级毛片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| e午夜精品久久久久久久| 国产激情欧美一区二区| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 视频区欧美日本亚洲| 制服丝袜大香蕉在线| a级毛片a级免费在线| 日本 欧美在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美极品一区二区三区四区| 午夜精品一区二区三区免费看| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲一区二区三区色噜噜| 少妇人妻一区二区三区视频| 十八禁网站免费在线| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲五月婷婷丁香| 少妇的丰满在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 国产亚洲av高清不卡| 国产成年人精品一区二区| 日本一区二区免费在线视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 久久午夜亚洲精品久久| 久久久国产成人精品二区| 日韩欧美在线乱码| 国产又色又爽无遮挡免费看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜a级毛片| 日韩欧美三级三区| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人av教育| 日本在线视频免费播放| 一本综合久久免费| 日韩欧美精品v在线| 51午夜福利影视在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久久国产成人精品二区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产免费男女视频| 久久久国产欧美日韩av| 叶爱在线成人免费视频播放| 午夜老司机福利片| 看免费av毛片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲九九香蕉| 国产精华一区二区三区| 午夜久久久久精精品| 国产伦在线观看视频一区| 久久久久久九九精品二区国产 | 国产成人av教育| 国产精品一区二区免费欧美| 曰老女人黄片| 国产亚洲精品第一综合不卡| 九九热线精品视视频播放| 麻豆国产av国片精品| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩欧美三级三区| 精品欧美一区二区三区在线| 黄色 视频免费看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| www.熟女人妻精品国产| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产一区二区三区视频了| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日本黄大片高清| 亚洲性夜色夜夜综合| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 一区二区三区激情视频| 99国产综合亚洲精品| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精华霜和精华液先用哪个| 成在线人永久免费视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品第一国产精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产99久久九九免费精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲国产欧美人成| tocl精华| 国产av一区在线观看免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩大尺度精品在线看网址| 不卡一级毛片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品无人区乱码1区二区| 午夜激情av网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美极品一区二区三区四区| av福利片在线观看| 免费av毛片视频| 国产精品 国内视频| aaaaa片日本免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 欧美黑人精品巨大| 国产精品 国内视频| 国产片内射在线| 精品久久蜜臀av无| 久久性视频一级片| 精品一区二区三区av网在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 国产高清视频在线播放一区| 日本 av在线| 免费看美女性在线毛片视频| 后天国语完整版免费观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 超碰成人久久| 国产野战对白在线观看| 床上黄色一级片| 亚洲人成电影免费在线| 丁香六月欧美| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 淫秽高清视频在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精品高清国产在线一区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 露出奶头的视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产成人精品久久二区二区免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 极品教师在线免费播放| 性欧美人与动物交配| 欧美不卡视频在线免费观看 | 免费在线观看黄色视频的| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜福利18| 免费看美女性在线毛片视频| 美女黄网站色视频| 国产黄色小视频在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 女人被狂操c到高潮| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 午夜亚洲福利在线播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 白带黄色成豆腐渣| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 免费看十八禁软件| 欧美大码av| 我的老师免费观看完整版| 亚洲精品美女久久av网站| 99在线视频只有这里精品首页| 免费在线观看日本一区| 日韩欧美国产一区二区入口| 日本免费a在线| 人妻久久中文字幕网| 亚洲成人免费电影在线观看| 午夜视频精品福利| 日韩欧美在线二视频| 国产99久久九九免费精品| 老汉色∧v一级毛片| 久久中文看片网| 一本一本综合久久| 日本一本二区三区精品| 亚洲成人免费电影在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 男插女下体视频免费在线播放| 成人一区二区视频在线观看| av天堂在线播放| 亚洲五月天丁香| 成年免费大片在线观看| 久久精品国产综合久久久| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲av电影在线进入| 女警被强在线播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美在线黄色| 1024视频免费在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产一级毛片七仙女欲春2| 天天添夜夜摸| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日本 av在线| 久久精品成人免费网站| 最新美女视频免费是黄的| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 丁香六月欧美| 欧美一区二区精品小视频在线| 99在线人妻在线中文字幕| 一本一本综合久久| 中文字幕久久专区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99在线视频只有这里精品首页| 在线国产一区二区在线| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久精品大字幕| 一级黄色大片毛片| 国产欧美日韩一区二区三| 久99久视频精品免费| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产av一区二区精品久久| 一级作爱视频免费观看| 亚洲专区字幕在线| 丰满的人妻完整版| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品国产高清国产av| 久久久久久久久久黄片| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 在线永久观看黄色视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 色老头精品视频在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| e午夜精品久久久久久久| 亚洲 国产 在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲全国av大片| 久9热在线精品视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| cao死你这个sao货| 国语自产精品视频在线第100页| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产黄片美女视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产精品久久视频播放| 国产亚洲av高清不卡| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美成人午夜精品| 成年人黄色毛片网站| 午夜两性在线视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线观看www视频免费| 黄片大片在线免费观看| 欧美日韩黄片免| 久久性视频一级片| 成人av一区二区三区在线看| 日本一区二区免费在线视频| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲免费av在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 无人区码免费观看不卡| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费看日本二区| 国产成人系列免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 老司机福利观看| 在线观看一区二区三区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产精品久久电影中文字幕| 久久天堂一区二区三区四区| 天堂影院成人在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 国产激情欧美一区二区| 久久久久久久午夜电影| 9191精品国产免费久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 天天一区二区日本电影三级| 久久亚洲真实| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久久国内视频| 动漫黄色视频在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩精品青青久久久久久| 国产成人av教育| 国产精品影院久久| 国产成人欧美在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲av美国av| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产亚洲欧美在线一区二区| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲黑人精品在线| 精品国产亚洲在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 校园春色视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久久国产精品麻豆| 韩国av一区二区三区四区| 我要搜黄色片| 国产乱人伦免费视频| 在线观看午夜福利视频| 免费在线观看影片大全网站| aaaaa片日本免费| 国产精品久久久av美女十八| 午夜成年电影在线免费观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲国产精品合色在线| 99riav亚洲国产免费| 三级国产精品欧美在线观看 | 欧美高清成人免费视频www| 久久中文字幕人妻熟女| 精品福利观看| 制服诱惑二区| 久久精品人妻少妇| 精品久久蜜臀av无| 午夜免费观看网址| 日日爽夜夜爽网站| 在线播放国产精品三级| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 精品久久久久久久毛片微露脸| 精品国产乱子伦一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 老司机福利观看| 最好的美女福利视频网| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲熟女毛片儿| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲专区字幕在线| or卡值多少钱| 国产精品电影一区二区三区| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲avbb在线观看| av国产免费在线观看| 国产区一区二久久| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美日韩一级在线毛片| 不卡一级毛片| 禁无遮挡网站| 国产视频一区二区在线看| 日韩av在线大香蕉| 老司机在亚洲福利影院| 好男人在线观看高清免费视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美zozozo另类| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产精品亚洲一级av第二区| 极品教师在线免费播放| 9191精品国产免费久久| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲av成人精品一区久久| 国产高清激情床上av| 午夜激情福利司机影院| 亚洲熟女毛片儿| 18美女黄网站色大片免费观看| 日韩精品中文字幕看吧| 日韩欧美免费精品| 亚洲av成人一区二区三| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 制服人妻中文乱码| 久久亚洲精品不卡| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 美女大奶头视频| 欧美3d第一页| 久久国产乱子伦精品免费另类| xxxwww97欧美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 女警被强在线播放| 亚洲全国av大片| 日本一区二区免费在线视频| 男人舔女人的私密视频| 热99re8久久精品国产| 男人舔女人的私密视频| 亚洲人成电影免费在线| 午夜视频精品福利| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲av五月六月丁香网| 日本黄色视频三级网站网址| 日本 欧美在线| netflix在线观看网站| 五月玫瑰六月丁香| 日韩欧美在线二视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 黄色片一级片一级黄色片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 女同久久另类99精品国产91| 中国美女看黄片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 99riav亚洲国产免费| 亚洲电影在线观看av| 91国产中文字幕| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久久久久国产a免费观看| 欧美乱妇无乱码| 午夜两性在线视频| 日韩高清综合在线| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日韩av在线大香蕉| 婷婷精品国产亚洲av| 夜夜爽天天搞| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 一本综合久久免费| 国产黄色小视频在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一二三四在线观看免费中文在| 99riav亚洲国产免费| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 9191精品国产免费久久| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 丁香六月欧美| av超薄肉色丝袜交足视频| 男人舔奶头视频| www.熟女人妻精品国产| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲中文字幕日韩| www国产在线视频色| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 老司机深夜福利视频在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 脱女人内裤的视频| 日韩av在线大香蕉| 日韩精品青青久久久久久| 日韩欧美国产在线观看| 欧美日韩乱码在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产激情久久老熟女| 国产亚洲欧美在线一区二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 桃色一区二区三区在线观看| 丰满的人妻完整版| 中文字幕av在线有码专区| www.www免费av| 精品久久久久久,| 看免费av毛片| 90打野战视频偷拍视频| 操出白浆在线播放| 国产成人系列免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 深夜精品福利| 久久精品国产综合久久久| 母亲3免费完整高清在线观看| 两个人的视频大全免费| 亚洲国产欧美人成| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 黄色女人牲交| 两个人看的免费小视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩欧美免费精品| 不卡一级毛片| 狂野欧美激情性xxxx| 岛国视频午夜一区免费看| 老司机深夜福利视频在线观看| 日本 欧美在线| 午夜福利在线在线| 一本精品99久久精品77| 我要搜黄色片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 色av中文字幕| 国产精品日韩av在线免费观看| 超碰成人久久| 国产真实乱freesex| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久 成人 亚洲| 亚洲精华国产精华精| 好男人电影高清在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产91精品成人一区二区三区| 香蕉久久夜色| 国产av又大| 在线观看一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| www.www免费av| 日本五十路高清| 91大片在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人啪精品午夜网站| 舔av片在线| 久久久久久免费高清国产稀缺|