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    消定膏皮膚刺激性及致敏性研究△

    2013-09-27 00:56:30李跟旺劉效栓焦正花楊沛霖
    中國現(xiàn)代中藥 2013年7期
    關(guān)鍵詞:致敏性刺激性豚鼠

    李跟旺,劉效栓,焦正花,楊沛霖

    (甘肅省中醫(yī)院,甘肅 蘭州 730050)

    消定膏皮膚刺激性及致敏性研究△

    李跟旺,劉效栓,焦正花*,楊沛霖

    (甘肅省中醫(yī)院,甘肅 蘭州 730050)

    目的:研究消定膏對家兔完整皮膚的刺激性及其對皮膚的致敏性。方法:家兔去毛后左側(cè)區(qū)域為空白對照區(qū),涂以蒸餾水0.5 mL;右側(cè)區(qū)域為給藥區(qū),涂以0.5 g消定膏,每天涂抹1次,連續(xù)7 d,觀察及記錄紅斑及水腫等情況,并按皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)進行評分研究其對完整皮膚的刺激性;通過與高致敏物2、4-二硝基氯苯比較研究其致敏性。結(jié)果:在連續(xù)貼敷消定膏第4天和第5天開始出現(xiàn)輕度紅斑,貼敷第5天開始出現(xiàn)輕度水腫,停藥后48 h逐漸恢復(fù),對皮膚無過敏反應(yīng);消定膏過敏發(fā)生率為0%,無皮膚過敏反應(yīng)。結(jié)論:消定膏對家兔完整皮膚具輕度刺激性,對皮膚無致敏反應(yīng)。

    消定膏;刺激性;致敏性

    消定膏是甘肅省中醫(yī)院骨科常用純中藥制劑,主要由大黃、兒茶、紫荊皮等5味中藥組成,具有活血散瘀,消腫止痛的功效,同時有改善局部炎性疼痛及外傷性瘀血腫痛的作用。其臨床療效確切,不良反應(yīng)小,在我院臨床應(yīng)用已有40余年,備受臨床醫(yī)生和患者的歡迎,取得了一定的經(jīng)濟效益和社會效益。作者在臨床療效確切的基礎(chǔ)上,對其刺激性及相關(guān)致敏性進行研究,為醫(yī)院制劑申報新藥提供理論依據(jù),使其具有廣泛的實用性、先進性和科學(xué)性。

    1 材料

    1.1 藥品與試劑

    消定膏(棕褐色膏狀物,批號:20070506,由甘肅省中醫(yī)院提供);2、4-二硝基氯苯(上海試劑一廠,批號:0060301),臨用前用分析純丙酮配制成1%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度。

    1.2 動物

    健康白色家兔4只,體重2.5~3.0 kg,雌雄兼有,合格證號:甘醫(yī)動字第14-004號;白色豚鼠,雌雄各半,體重250~300 g,合格證號:醫(yī)動字14-003號,均由蘭州生物制品研究所動物室提供。室溫18~25 ℃,相對濕度40%~60%。

    2 方法

    2.1 消定膏對家兔多次皮膚刺激性試驗[1-5]

    將4只家兔預(yù)養(yǎng)3 d。試驗前24 h,將家兔脊柱兩側(cè)被毛剪掉,用硫化鈉-淀粉-肥皂粉(3∶7∶1)的比例用水配成糊狀,脫毛,用清水清洗干凈;不損傷表皮,去毛范圍左、右各約3 cm×3 cm。去毛24 h后每只動物左側(cè)區(qū)域為空白對照區(qū),涂以蒸餾水0.5 mL;右側(cè)區(qū)域為給藥區(qū),涂以0.5 g消定膏,涂抹面積2.5 cm×2.5 cm。涂抹后用一層玻璃紙和兩層紗布覆蓋,再用無刺激膠布和繃帶加以固定。每天涂抹1次,連續(xù)7 d,每次涂抹后至少保留4 h。從第2天開始,每次去除藥物1 h以及再次貼敷前觀察并記錄紅斑及水腫,涂敷部位是否有色素沉著、出血點,皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生時間及消退時間,并按皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)進行評分。末次貼敷后,在去除藥物后1,24,48,72 h肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況??瞻讓φ諈^(qū)和試驗區(qū)同樣處理、觀察。

    計算每一觀察時點各組積分均值,然后計算觀察期限內(nèi)每天每只動物刺激積分均值,每天每只動物刺激積分均值=每天每只動物各時點刺激評分總和/每天每只動物評分次數(shù)),按表1~2的皮膚刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)進行評價[6]。

    表1 皮膚刺激及致敏性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

    表2 皮膚刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)

    2.2 皮膚致敏反應(yīng)試驗[7]

    將豚鼠30只,預(yù)養(yǎng)3 d后,隨機分為3組,分別為消定膏組、陽性對照組(2、4-二硝基氯苯)、陰性對照組(0.9%氯化鈉溶液),每組10只。試驗前24 h,將豚鼠背部左側(cè)或右側(cè)脫毛,用清水清洗干凈,不損傷表皮,去毛范圍左、右均約3 cm×3 cm。

    取消定膏0.2 g,涂抹于豚鼠左側(cè)背部脫毛區(qū),涂抹后用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋,再用無刺激膠布封閉固定6 h。陽性對照組涂抹1% 2、4-二硝基氯苯0.2 mL,陰性對照組涂抹0.9%氯化鈉溶液0.2 mL,涂抹后處理方法同受試物組。試驗第7天和第14天以同樣方法各重復(fù)1次,共計3次。于末次致敏后14 d,再次將受試物0.2 g涂于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū),方法同前。6 h后去掉受試物,即刻觀察,然后于24,48,72 h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況,并按表3皮膚過敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)對各時間進行評分[8]。同時密切觀察動物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴重的全身過敏反應(yīng)。陽性對照組涂抹0.1% 2,4-二硝基氯苯0.2 mL,陰性對照組涂抹0.9%氯化鈉溶液,觀察方法同受試物組。

    致敏反應(yīng)發(fā)生率=有過敏反應(yīng)動物數(shù)(不論程度輕重)/動物總數(shù)×100%。按表3皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)推斷受試物的致敏性。

    表3 皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)

    2.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    3 結(jié)果

    3.1 消定膏對家兔皮膚刺激反應(yīng)試驗結(jié)果

    在試驗觀察期內(nèi),根據(jù)皮膚刺激性強度評價標(biāo)準(zhǔn),在連續(xù)貼敷消定膏第4天和第5天分別有2只家兔開始出現(xiàn)輕度紅斑,并逐漸加重;貼敷第5天開始出現(xiàn)輕度水腫。停藥后48 h逐漸恢復(fù)。空白對照區(qū)未出現(xiàn)上述刺激癥狀,涂抹及觀察期內(nèi)未見動物全身異常反應(yīng),試驗結(jié)果見表4。

    表4 消定膏對家兔多次皮膚刺激性試驗結(jié)果(n=4)

    根據(jù)皮膚刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn):每天每只動物刺激積分均值0.5~2.99時,為輕度刺激性。本試驗結(jié)果表明,消定膏多次連續(xù)涂抹給藥后每天每只動物完整皮膚刺激積分均值為1.40,可判消定膏對家兔的完整皮膚均有輕度刺激作用。

    3.2 消定膏對豚鼠皮膚過敏反應(yīng)試驗結(jié)果

    消定膏組與陰性對照組致敏激發(fā)接觸后觀察,陽性對照組自激發(fā)給藥6 h后,即刻觀察動物有出現(xiàn)輕度紅斑、明顯紅斑或嚴重紅斑,同時伴有輕度水腫、中度水腫或重度水腫,皮膚隆起1 mm,輪廓清楚等不同程度的過敏反應(yīng),總積分35分;24 h開始消退,總積分為27分;48 h總積分18分;72 h后總積分為12分,致敏率100%。陽性對照2、4-二硝基氯苯過敏發(fā)生率為100%,為極度致敏性;消定膏過敏發(fā)生率為0%,無皮膚過敏反應(yīng),見表5。

    表5 消定膏對豚鼠皮膚過敏反應(yīng)試驗結(jié)果

    4 結(jié)論

    消定膏屬活血散瘀、消腫止痛的中藥膏劑,在骨外科領(lǐng)域用于跌打損傷,消腫止痛,療效確切。

    本試驗通過豚鼠皮膚過敏試驗,以高致敏物2、4-二硝基氯苯為陽性對照,觀察消定膏皮膚用藥的過敏性反應(yīng)。致敏試驗的研究發(fā)現(xiàn)消定膏對皮膚無致敏性,使用較為安全可靠。通過消定膏對家兔皮膚刺激性試驗及對豚鼠皮膚的致敏試驗研究,確定消定膏對家兔完整皮膚有輕度刺激作用,對皮膚無致敏性。

    [1] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005.

    [2] 胡楠楠,王雪峰,趙雪,等.敷胸巴布貼制劑對健康家兔皮膚刺激實驗研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(6):1168-1169.

    [3] 王北嬰,李儀奎.中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法[J].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2001:788-808.

    [4] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[J].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:112-119.

    [5] 鄭利光,翟所迪.甘草鋅膜對實驗性口腔潰瘍的治療作用及其粘膜刺激性研究[J].中國新藥雜志,2006,15(8):601-603.

    [6] 衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))[M].1994:205-207.

    [7] 許景川.蜂膠提取物對口腔黏膜刺激和皮膚致敏作用的實驗研究[J].海峽藥學(xué),2010,22(12):27-28.

    [8] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物免疫毒性(過敏性、光敏性反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005.

    TheSkinIrritationandSensitizationResearchofXiaodingGao

    LI Gen-wang,LIU Xiao-shuan,JIAO Zheng-hua,YANG Pei-lin

    (GansuProvinceHospitalofTCM,Lanzhou730050,China)

    Objective: To study skin irritation and sensitization of Xiaoding Gao with rabbit.Methods: After removing rabbit hair,the left side is blank controlled area,coated with distilled water 0.5 mL; The right is medicine area and coated with 0.5 g Xiaoding Gao,once daily,continuous 7 d,observe and record erythema,edema indicators,rate according to the ‘skin stimulation reactions rating criteria’. Skin sensitization of Xiaoding Gao is compared with 2,4-two nitro chlorobenzene,which is highly allergic.Results: After continuous applying Xiaoding Gao,mild erythema was appeared at 4thor 5thday,mild edema was found at 5thday. 48 h after discontinuation of Xiaoding Gao,erythema and edema disappeared gradually,and there wae no skin allergic reaction. The allergic rate of Xiaoding Gao is 0%.Conclusion: Xiaoding Gao has little skin irritation and no sensitization effect to complete rabbit skin.

    Xiaoding Gao; Irritation; Sensitization

    2012-07-16)

    2003~2010年甘肅省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科研項目(2003-GZK-16)

    *

    焦正花,E-mail:939410984@qq.com

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