止咳平喘合劑對哮喘大鼠氣道炎癥及細(xì)胞因子水平影響的實(shí)驗(yàn)研究

馬紅鶯 （長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023）

支氣管哮喘作為臨床常見呼吸系統(tǒng)慢性炎癥，主要由多種炎癥細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)[1]?；颊吲R床表現(xiàn)多為咳嗽、胸悶、氣急等，且有晨昏加重特點(diǎn)。哮喘患者氣道高反應(yīng)性基礎(chǔ)為慢性炎癥反應(yīng)，其中嗜酸性粒細(xì)胞及Th1／Th2細(xì)胞因子水平穩(wěn)態(tài)在氣道慢性炎癥發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[2－3]。本次實(shí)驗(yàn)研究通過空白對照組、哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組大鼠肺泡灌洗液中白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平，血清Th1、Th2細(xì)胞因子水平等進(jìn)行比較，探討止咳平喘合劑對哮喘大鼠氣道炎癥及Th1／Th2細(xì)胞因子水平的影響及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本次實(shí)驗(yàn)研究120只雄性SD大鼠由長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，均為清潔級(jí)成年健康鼠。隨機(jī)分為4組，即空白對照組、哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組，每組各30只。4組大鼠體質(zhì)量、年齡組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＞0.05）。

1.2 動(dòng)物模型建立及給藥處理方法

哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組大鼠0.1%卵白蛋白及10%氫氧化鋁多點(diǎn)注射造模，時(shí)間為2周，同期給予空白對照組大鼠相同劑量生理鹽水注射；造模完成后，哮喘模型組大鼠給予10ml／kg生理鹽水每天1次灌胃；激素治療組大鼠給予 （強(qiáng)的松8mg＋生理鹽水10ml）／kg每天1次灌胃；而止咳平喘合劑組大鼠給予 （止咳平喘合劑20mg＋生理鹽水10ml）／kg每天1次灌胃，處理時(shí)間為4d。并于總實(shí)驗(yàn)時(shí)間第16、17、18天對哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組大鼠進(jìn)行1%卵白蛋白超聲霧化吸入25min以激發(fā)哮喘發(fā)作，空白對照組大鼠同期給予相同劑量生理鹽水霧化吸入。

1.3 評價(jià)指標(biāo)

1.3.1 肺泡灌洗液白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平測定 行支氣管肺泡灌洗，收取灌洗液；白細(xì)胞計(jì)數(shù)：取150μl支氣管灌洗液加入同等體積白細(xì)胞稀釋液，光鏡下計(jì)數(shù)；嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)：支氣管灌洗液1200轉(zhuǎn)／min離心8～10min，細(xì)胞涂片HE染色，連續(xù)計(jì)數(shù)600個(gè)細(xì)胞后進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)；嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平測定：大鼠右肺中性福爾馬林固定，石蠟包埋切片，免疫組化后進(jìn)行陽性細(xì)胞積分光密度 （IOD）Eotaxin測定，采用Image-ProPlus軟件。

1.3.2 血清Th1、Th2細(xì)胞因子水平測定 最后一次哮喘發(fā)作激發(fā)后進(jìn)行大鼠下腔靜脈采血，離心后取上清液ELISA測定IL-4、IFN-γ水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 4組大鼠肺泡灌洗液中白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平比較

哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組肺泡灌洗液白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平均明顯高于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；哮喘模型組肺泡灌洗液白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平均明顯高于空白對照組、激素治療組及止咳平喘合劑組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；同時(shí)止咳平喘合劑組肺泡灌洗液白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平均明顯高于激素治療組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 4組大鼠肺泡灌洗液中白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平比較

2.24 組大鼠血清Th1、Th2細(xì)胞因子水平比較

哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組血清IL-4因子水平均明顯高于空白對照組，而IFN－γ水平明顯低于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；哮喘模型組血清IL-4因子水平均明顯高于空白對照組、激素治療組及止咳平喘合劑組，而IFN-γ水平明顯低于其他3組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；同時(shí)止咳平喘合劑組肺血清IL-4因子水平明顯高于激素治療組，而IFN-γ水平明顯低于激素治療組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表2。

表2 4組大鼠肺泡血清Th1、Th2細(xì)胞因子水平比較

3 討 論

國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為哮喘發(fā)生發(fā)展病理生理學(xué)基礎(chǔ)為氣道炎癥細(xì)胞浸潤導(dǎo)致的粘膜慢性非特異性炎癥[4]。嗜酸性粒細(xì)胞是氣道非特異性炎癥發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞之一，已有研究證實(shí)[5－6]，嗜酸性粒細(xì)胞水平降低對于改善哮喘癥狀具有重要意義。而Eotaxin則是活化嗜酸性粒細(xì)胞作用最強(qiáng)的一種細(xì)胞因子，其水平與哮喘癥狀嚴(yán)重程度密切相關(guān)。同時(shí)近年來研究證實(shí)Th1／Th2細(xì)胞因子水平穩(wěn)態(tài)破壞亦是誘發(fā)、維持哮喘的重要因素[7]；Th2細(xì)胞因子水平優(yōu)勢導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性進(jìn)展。其中IFN-γ和IL-4分別是Th1／Th2細(xì)胞因子代表類型；IL-4能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)IgE分泌，加重氣道炎癥；而IFN－γ則具有高效IgE分泌拮抗作用，可有效降低Th2型細(xì)胞因子水平。故本次試驗(yàn)中進(jìn)行FN-γ和IL-4測定能夠準(zhǔn)確反映機(jī)體Th1／Th2細(xì)胞因子水平穩(wěn)態(tài)改變情況。

中醫(yī)認(rèn)為哮喘因痰氣相阻，氣逆失降導(dǎo)致。病機(jī)為先天不足、臟腑失調(diào)、外泄入侵。治療關(guān)鍵在于化痰降氣、宣肺平喘。止咳平喘合劑是由全國名老中醫(yī)王暉創(chuàng)立的中藥方劑，主要組分為麻黃、生甘草、杏仁、枳殼、三葉青、廣地龍、黃芩、桑白皮、羊乳、蘇子、白芥子、萊菔子等。其中麻黃宣肺利氣，杏仁降氣肅肺，生甘草則起到調(diào)和二藥，宣降肺氣作用；枳殼理痰順氣；三葉青、廣地龍、黃芩及桑白皮鎮(zhèn)咳、平喘、解痙；羊乳潤肺祛燥；蘇子、白芥子及萊菔子則化痰利氣。諸藥合用共奏解表祛痰、止咳平喘、宣肺降氣之功效。

本次研究顯示，哮喘模型組、激素治療組及止咳平喘合劑組肺泡灌洗液白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子及血清IL-4因子水平均明顯高于空白對照組，而IFN-γ水平明顯低于空白對照組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；哮喘模型組肺泡灌洗液白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子及血清IL-4因子水平均明顯高于空白對照組、激素治療組及止咳平喘合劑組，IFN-γ水平明顯低于其他3組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；同時(shí)止咳平喘合劑組白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子及血清IL-4因子水平均明顯高于激素治療組，而IFN-γ水平明顯低于激素治療組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。

綜上所述，止咳平喘合劑對哮喘大鼠氣道炎癥具有確切抑制作用，能夠有效調(diào)節(jié)Th1／Th2細(xì)胞因子水平，作用機(jī)制可能與下調(diào)嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平有關(guān)。

[1]俞亞麗，王媛，周忠輝，等 .止咳平喘合劑對哮喘大鼠Th1／Th2細(xì)胞因子影響的實(shí)驗(yàn)研究 [J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（12）：2578-2579.

[2]Carneiro ER，Xavier RA，De Castro MA，et al.Electroacupuncture promotes a decrease in IFNlammatory response associated with Th1／Th2cytokines，nitric oxide and leukotriene B4modulation in experimental asthma[J].Cytokine，2010，50 （3）：335-40.

[3]王媛，周忠輝，俞亞麗，等 .止咳平喘合劑影響哮喘大鼠嗜酸粒細(xì)胞及Eotaxin表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究 [J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30（3）：573-574.

[4]Kim YS，Choi SJ，Choi JP，et al.IL-12-STAT4-IFN -gamma axis is a key downstream pathway in the development of IL-13-mediated asthma phenotypes in a Th2type asthma model[J].Exp Mol Med，2010，42 （8）：533-546.

[5]Ke X，Huang J，Chen Q，et al.Protective effects of combined Mycobacterium bovis BCG and interleukin-12vaccination on airway IFN-lammation in a murine model of allergic asthma [J].Clin Invest Med，2010，33 （3）：196-202.

[6]王真，周忠輝，俞亞麗，等 .止咳平喘合劑干預(yù)哮喘大鼠氣道炎癥及IL-12、IL-13水平的實(shí)驗(yàn)研究 [J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30 （6）：1278-1279.

[7]Hansbro PM，Kaiko GE，F(xiàn)oster PS.Cytokine／anti-cytokine therapy-novel treatments for asthma [J].Br J Pharmacol，2011，163（1）：81-95.