肺炎克雷伯菌耐藥分析

陳國華

肺炎克雷伯菌耐藥分析

陳國華

目的探討醫(yī)院分離1094株肺炎克雷伯菌的產(chǎn)酶情況。方法采用2012年CLSI推薦產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLS)和碳青霉烯酶的檢出方法，主要是紙片擴散法和改良Hodge試驗。結(jié)果1094株肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs率為69.7%，改良Hodge試驗陽性株22株。結(jié)論肺炎克雷伯菌的產(chǎn)ESBLs率一直居高，對碳青霉烯類抗生素的耐藥現(xiàn)狀十分嚴(yán)峻，臨床工作人員應(yīng)做到密切觀察，提前預(yù)防。

肺炎克雷伯菌；產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；碳青霉烯酶

肺炎克雷伯菌是一種重要的條件致病菌，常引起血液、痰液、尿液、膽汁、手術(shù)切口、軟組織損傷等多個部位感染，也在逐漸成為醫(yī)院感染重要病原菌之一。

1 資料

1.1菌株來源 臨床分離肺炎克雷伯菌1094株，采用美國BD公司PHOENIX100全自動細(xì)菌鑒儀進行菌株鑒定。

1.2質(zhì)控菌株 大腸埃希菌ATCC25922。

1.3藥敏紙片與培養(yǎng)基 藥敏紙片均來自于英國OXOID公司；MH平板來自于鄭州安圖生物試劑公司。

2 方法

2.1WHONET5.5軟件進行統(tǒng)計分析。

2.2ESBLs檢測方法 滿足任一抑菌環(huán)直徑頭孢他啶/克拉維酸(30/10 μg)-頭孢他啶(30 μg)≥5 mm或頭孢噻肟/克拉維酸(30/10 μg)-頭孢噻肟(30 μg)≥5 mm條件的肺炎克雷伯菌為ESBLs陽性株。

2.3改良Hodge試驗 取ATCC25922配制0.5 mCF，1:10稀釋成0.05 MCF，將制備的菌懸液均勻涂滿整個MH平板，干燥3～5 min，將10 μg美羅培南紙片貼在MH平板中心，然后用無菌棉簽蘸取待測菌或質(zhì)控菌3～5個菌落，從美羅培南紙片邊緣向MH瓊脂板邊緣劃線(20～25 mm)，16～20 h觀察結(jié)果。

3 結(jié)果

3.11094株肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs率為69.7%，對頭孢他啶的耐藥率為68.2%，對頭孢噻肟的耐藥率為71.3%，對頭孢吡肟的耐藥率為68.5%。

3.21094株肺炎克雷伯菌對美洛培南的敏感率為90.4%，對亞胺培南的敏感率為88.8%。

3.3美洛培南抑菌環(huán)≤21 mm的菌株數(shù)為73株，占6.7%，改良Hodge試驗陽性菌株22株。

4 討論

近年來，由于抗生素的濫用和隨之而產(chǎn)生的新型廣譜抗菌藥物出現(xiàn)在臨床并廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致肺炎克雷伯菌感染有明顯增減的趨勢，并表現(xiàn)為對以β-內(nèi)酰胺類抗生素為主的多種抗菌藥物出現(xiàn)耐藥情況，給臨床治療帶來很大的困難。

肺炎克雷伯菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機制以產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶為主， β-內(nèi)酰胺酶是一類由細(xì)菌產(chǎn)生，能夠水解抗生素β-內(nèi)酰胺環(huán)使之失活的酶，根據(jù)水解底物范圍可分為：青霉素酶、AmpC酶、ESBLs、碳青霉烯酶等。肺炎克雷伯菌主要產(chǎn)生ESBLs和碳青霉烯酶。ESBLs是一類由質(zhì)粒介導(dǎo)的能夠使細(xì)菌對多種β-內(nèi)酰胺類抗生素和單酰環(huán)類抗生素耐藥的酶，屬于Ambler分類的A類，Bush分類的2be群，包括TEM、SHV、CTX-M和OXA型[1]，可在細(xì)菌菌株之間水平傳遞和垂直傳播。

碳青霉烯類抗生素是目前臨床使用的抗菌藥物中抗菌譜抗廣、抗菌活性最強、具有快速殺菌作用的一類抗生素，然而隨著碳青霉烯類抗生素在臨床上使用增加，逐漸出現(xiàn)了對碳青霉烯類抗生素不敏的菌株。細(xì)菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥機制主要有產(chǎn)生碳青霉烯酶、外排泵、膜通透性下降和青霉素結(jié)合蛋白親和力的降低。其中產(chǎn)碳青霉烯酶是重要因素。2001年Yigit[2]等首次報道在美國北卡羅來納州肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)的碳青霉烯酶KPC-1型，因其由質(zhì)粒介導(dǎo)易向其他菌株傳遞[3]，已經(jīng)成為臨床實驗室重點監(jiān)測的目標(biāo)菌。

本次分析1094株肺炎克雷伯菌，ESBLs的發(fā)生率為69.7%，高于全國平均水平。改良Hodge試驗篩選菌株產(chǎn)酶率占30.1%，篩選菌株數(shù)量大，且改良Hodge試驗陽性株均為耐美洛培南肺炎克雷伯菌，且同時對包括喹諾酮類抗生素在內(nèi)的多種抗生素出現(xiàn)泛耐藥現(xiàn)象，致使臨床醫(yī)生無藥可選，治療難度大，應(yīng)從根源上及早預(yù)防，減少產(chǎn)酶菌的發(fā)生和傳播。

[1] 唐曙明，方紅輝，楊自華.產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的耐藥型與基因分型.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009，9(11)：1653-1657.

[2] Yigit H, Queenan AM, Anderson GJ, et al. Novel carbapenem-hydrolyzing beta-lactamase, KPC-1, from a carbapenem-resistant strain of Klebsiella pn eumonia. Antimicrob Agents Chemother, 2001, 45(4):1151-1161.

[3] Naas T, Cuzon G, Villegas MV,et al. Genetic structures at the origin of acquisition of the beta-lactamase blaKPC gene. Antimicrobial agents and chemotherapy, 2008,52(4):1257-1263.

450000 河南省鄭州市中醫(yī)院檢驗科