外周血單個核細(xì)胞分泌Th細(xì)胞因子IFN-γ，IL-10在原因不明反復(fù)流產(chǎn)患者的研究

施培瑤 陳丕績 蔡巧青

反復(fù)自然流產(chǎn)(RSA)，指連續(xù)兩次及以上的自然流產(chǎn)，近半數(shù)原因不明。近年的研究進(jìn)一步表明，正常妊娠中母胎的免疫反應(yīng)主要為Th2分泌的IL-10介導(dǎo)的體液免疫為主，但是RSA患者卻以Th1分泌的IFN-γ介導(dǎo)的細(xì)胞免疫過為主。細(xì)胞免疫過度表達(dá)令妊娠女性流產(chǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從2011年15月至2012年05月在深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院經(jīng)過婦檢，B超，正常，無不孕，無死胎或流產(chǎn)史，要求人流的婦女20例為正常對照組。年齡27～34歲，平均(29.5±2.6)歲，孕周6～10周，平均(9.1±1.3)周，孕次3～5次，平均(3.5±1.1)次。相同時間經(jīng)我院排除因遺傳，感染及血型不合，抗精子抗體陽性等因素，確診為RSA的婦女20例為研究組。年齡26～38歲，平均(30.1±3.1)歲，孕周9-13周，平均(10.1±1.6)周，孕次4～7次，平均(5.1±2.2)次。以上年齡，孕周，孕次比較，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 設(shè)備及試劑 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 標(biāo)本收集和處理 從2010年10月至2011年10月在深圳市鹽田區(qū)計生中心經(jīng)過婦檢，B超。

1.3.1 分別抽取外周靜脈血3 ml，分離血清后分裝，-70℃凍存。

1.3.2 分別抽取外周靜脈血6 ml，肝素抗凝，淋巴細(xì)胞分離液分離出單個核細(xì)胞，苔盼藍(lán)排斥試驗檢測。經(jīng)PHA刺激再接種于培養(yǎng)板孵育24 h。

1.3.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)處理軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組與研究組資料比較

表1 對照組與研究組外周血IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的檢測(±s)

表1 對照組與研究組外周血IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的檢測(±s)

注:對照組與研究組IFN-γ、IL-10經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)

例數(shù) IFN-γIL-10對照組20 43.5±32.4 45.6±26.1研究組20 115.2±45.3 29.7±17.2

表2 對照組與研究組24 hPHA刺激外周血單個核細(xì)胞IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的檢測(±s)

表2 對照組與研究組24 hPHA刺激外周血單個核細(xì)胞IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的檢測(±s)

注:對照組與研究組IFN-γ、IL-10及其比值經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)

例數(shù) IFN-γIL-10對照組20 182.4±54.4 115.3±27.3研究組 20 392.2±45.3 33.9±19.6比值9.2±4.53 1.98±0.74

2.2 小結(jié) 研究組外周血IFN-γ水平高于正常對照組，但是IL-10水平下降。外周血單個核細(xì)胞在PHA刺激下，對照組分泌IL-10水平高于研究組，但是IFN-γ水平低于對照組，兩組間的IFN-γ水平與IL-10水平之比明顯高于對照組。

3 討論

正常妊娠時候免疫細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子IFN-γ水平與IL-10水平等影響著胚胎的著床與發(fā)育、胎盤以及內(nèi)分泌功能等，保證妊娠的正常進(jìn)行［1］。母體對胚胎的免疫主要以 Th2分泌的IL-10的體液免疫為主，Th1分泌的IFN-γ細(xì)胞免役可導(dǎo)致妊娠無法成功，所以在孕期細(xì)胞免疫一般受到抑制。與對照組相比，有胚胎毒性者 Th1型細(xì)胞因子的濃度顯著增高，Th2型細(xì)胞因子的濃度明顯降低。研究證實，與正常孕鼠相比，易流產(chǎn)的孕鼠分泌的 IL-10濃度低，但I(xiàn)FN-γ濃度高［2］。Th1型細(xì)胞因子通過直接或間接激活巨噬細(xì)胞、NK、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTLs)等多種毒性細(xì)胞不利于妊娠，Th2型細(xì)胞因子主要是通過抑制Th1型因子的產(chǎn)生及其功能來維持妊娠［3］，RSA患者缺乏產(chǎn)生足夠的Th2型因子而Th1型因子過度表達(dá)導(dǎo)致妊娠無法繼續(xù)［4］。但經(jīng)過系統(tǒng)主動免疫治療后，可促進(jìn)機體向Th2淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化而抑制Th1淋巴細(xì)胞，利于妊娠成功［5-7］。

本實驗中在PHA刺激下，正常妊娠婦女外周血單個核細(xì)胞分泌IL-10濃度高于反復(fù)流產(chǎn)組，相比之下IFN-γ濃度明顯低于反復(fù)流產(chǎn)組，反復(fù)流產(chǎn)組IFN-γ與 IL-10濃度的比值又高于正常妊娠婦女，與國內(nèi)相關(guān)報道相一致［8，9］，流產(chǎn)與患者分泌Th1/Th2型細(xì)胞因子失衡相關(guān)。

［1］ 邵劍春．原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)與細(xì)胞因子免疫平衡的相關(guān)性．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(5):568-569．

［2］ Raghupathy R.Pregnancy:success and failure within the Th1/Th2/Th3 paradigm.Semin Immunol，2001，13(4):219-227．

［3］ 楊卉，林其德，邱麗華.原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)主動免疫治療前后CD+

4CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)頻率的研究．實用婦科與產(chǎn)科雜志，2006，22(7):512-514．

［4］ 劉慶芝．反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血中Th1/Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)及其意義．東南大學(xué)學(xué)報，2011，Aug:30(4):565-568．

［5］ 陳巧兒．免疫治療原因不明反復(fù)流產(chǎn)后Th1/Th2型細(xì)胞因子和NK細(xì)胞的變化．中國婦幼保健，2005，20:2637-2639．

［6］ 秦衛(wèi)兵，楊寧，王一峰，等.不同來源的淋巴細(xì)胞主動免疫治療原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)．廣東醫(yī)學(xué)，2010，31(2):607-610．

［7］ 廖丹．淋巴細(xì)胞免疫治療反復(fù)早期自然流產(chǎn)53例．臨床醫(yī)學(xué)，2009，29(1):75-76．

［8］ 韓嵐，武美麗，柳肅芬，等.主動免疫治療對反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血 Th1/Th2模式表達(dá)影響．中國婦幼保健，2010，(17):2423．

［9］ 李芳.反復(fù)自然流產(chǎn)患者主動免疫治療39例分析．山西醫(yī)藥雜志(下半月刊)，2011，(06):04．