絲氨酸蛋白酶抑制劑在卵巢癌發(fā)展和血管生成中的作用機(jī)制研究

馬 瑛，彭芝蘭，陳 欣

(1.四川大學(xué)華西第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，四川 成都 610041;2.四川省綿陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，四川 綿陽 621000;3.成都地奧集團(tuán)篩選中心，四川 成都 610041)

卵巢癌惡性程度高、缺乏早期診斷手段，雖對化療比較敏感，但化療藥物的毒副反應(yīng)及長期治療易產(chǎn)生耐藥等因素，都導(dǎo)致卵巢癌的臨床治療有一定困難。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移是血管依賴性的，卵巢癌組織有血管豐富、生長迅速的特點(diǎn)，抗卵巢癌血管形成是一種新的治療策略。絲氨酸蛋白酶抑制劑(mammary serpin，MASPIN)是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的新成員，大量研究發(fā)現(xiàn)它作為腫瘤抑制基因?qū)δ[瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移有明顯抑制作用，近來更被證實(shí)是一種有效的血管生成抑制因子［1］。本研究通過免疫組織化學(xué)LSAB方法檢測MASPIN、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer，EOC)組織中的表達(dá)，分析其與卵巢癌病理類型、病理分級、手術(shù)病理分期等病理特點(diǎn)的關(guān)系;體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測卵巢癌細(xì)胞中MASPIN高表達(dá)對VEGF和表達(dá)的影響，旨在探討MASPIN在卵巢癌的發(fā)展和血管生成中的作用，為以MASPIN為分子靶點(diǎn)的抗腫瘤基因治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究采用的EOC組織(35例)為2004年10月至2005年4月在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院婦科接受手術(shù)治療患者(年齡35～68歲)的新鮮卵巢組織標(biāo)本，術(shù)前未行化療、放療或生物治療，術(shù)后病理診斷確診并且患者臨床病理資料完整，病理診斷均由有經(jīng)驗(yàn)的病理專家復(fù)核。病理類型:漿液性腺癌22例，黏液性癌5例，子宮內(nèi)膜樣腺癌5例，透明細(xì)胞癌 3例;病理分級:高分化 3例(8.6)，中分化6例(17.1)，低分化26例(74.3);臨床分期I期14例(40.0)，Ⅱ 期2例(5.7)，Ⅲ 期l1例(31.4)，IV期8例(22.9);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:有轉(zhuǎn)移8例(22.9 9/6)，無轉(zhuǎn)移27例(77.1);腹水:有腹水19例(54.3)，無腹水16例(45.7)。同期正常卵巢組織31例(子宮肌瘤21例、子宮腺肌癥10例)。卵巢組織的獲取均事先向患者說明，并取得同意。

1.2 主要試劑和儀器 兔抗人MASPIN抗體(AbS4A)購自Calbioehem公司，鼠抗人VEGF單抗購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。限制性內(nèi)切酶、Taq DNA聚合酶、高保真 pfu DNA聚合酶、λEcoT14 I digest購自 MBI;T4-DNA連接酶購自NEB;PCR產(chǎn)物純化試劑盒購自申能博彩生物科技有限公司，質(zhì)粒純化試劑盒為Omega公司產(chǎn)品;PCR引物由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成。Trizol Reagent(Invitrogen)，TaKaRa One step PCR for RNA Kits(AMV)購自天泰生物技術(shù)有限公司。轉(zhuǎn)染試劑梭華-SofastTM購自廈門太陽馬生物工程有限公司;熒光素酶底物試劑購自Promega公司(CAT.NO.E1531);細(xì)胞培養(yǎng)材料購自成都哈里公司。Forma-80℃冰箱;BECKMAN冷凍高速離心機(jī);eppendorf臺式高速離心機(jī);BIORAD電泳槽，電泳儀;恒溫水浴箱，恒溫空氣搖床，恒溫空氣培養(yǎng)箱，恒溫烤箱;Hybaid PCR儀;Kodak凝膠成象系統(tǒng)及圖象分析軟件。HARRISCO2孵箱，NUAIRE超凈工作臺，倒置顯微鏡，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，Wallace Victor2多功能發(fā)光檢測儀(PerkinElmer公司)，DU 640(BECKMAN COULTERTM)分光光度計(jì);酶標(biāo)儀 MICROPLATE READER(BIO-RAD公司)。BIORAD掃描儀。

1.3 質(zhì)粒載體、宿主菌和細(xì)胞 pCDNA3-MASPIN、大腸桿菌JM109、人體正常前列腺組織由成都地奧集團(tuán)藥物篩選中心提供。SKOV3為人卵巢漿液性上皮癌細(xì)胞株，由四川大學(xué)華西第二醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心婦科腫瘤實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4 免疫組織化學(xué)檢測MASPIN、VEGF在卵巢癌組織中的表達(dá) 將切除的新鮮標(biāo)本經(jīng)40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，切片厚度4 Fm。免疫組織化學(xué)染色步驟按試劑盒說明進(jìn)行。用PBS代替一抗作為陰性對照，公司提供的陽性切片為陽性對照。MASPIN抗體(1∶400)、VEGF抗體(1∶200)稀釋。MASPIN、VEGF陽性為胞漿棕色顆粒沉著，用Olympus DP70采圖系統(tǒng)捕獲圖像，采用Laserpix圖像分析軟件進(jìn)行分析，測定IOD。

1.5 MASPIN穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建 ①SKOV3細(xì)胞培養(yǎng)、傳代和保種:人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、保種參照司徒振強(qiáng)的《細(xì)胞培養(yǎng)》［2］。②細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染克隆的篩選:用陽離子聚合物法介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)染后將細(xì)胞置于37℃，5%CO2孵育箱孵育。設(shè)未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作對照，用梯度濃度的G418篩選培養(yǎng)液進(jìn)行篩選，G418的最適濃度為700 μg/ml。每3天換一次液，2周后挑取抗G418克隆擴(kuò)增，分別命名為 SKOV3-MASPIN和 SKOV3-vector，并進(jìn)行 RT-PCR和Western blot、ABC免疫酶染色法鑒定。③細(xì)胞總RNA的提取:用Trizol Reagent提取SKOV3細(xì)胞總RNA，樣本為轉(zhuǎn)染了pcDNA3-MASPIN、pcDNA3空載體質(zhì)粒的SKOV3細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的SKOV3細(xì)胞，方法參照試劑說明書進(jìn)行。取少量RNA以電泳鑒定完整性，以紫外分光光度法檢測濃度和純度。調(diào)整濃度存放于-70℃?zhèn)溆谩?/p>

1.6 半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR分析用于半定量RT-PCR分析的引物序列Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)，同時(shí)設(shè)計(jì)內(nèi)對照基因GAPDH引物，擴(kuò)增片段大小約485 bp。RT-PCR分析采用TAKARA公司的ONE STEP RT-PCR試劑盒，依據(jù)說明進(jìn)行。

1.7 ABC免疫酶染色法檢測 MASPIN、VEGF、HPA蛋白的表達(dá) SKOV3及G418篩選陽性的細(xì)胞，用0.25%胰酶消化，制成單細(xì)胞懸液，以1×106密度將細(xì)胞分別接種于預(yù)先放置蓋玻片的6孔培養(yǎng)板，置孵箱培養(yǎng)2天，取出蓋玻片，浸入磷酸鹽緩沖液PBS洗2次，加4%PFA(多聚甲醛)固定30分鐘，用PBS洗5分鐘×3次。0.3%H2O2-甲醇10秒，PBS洗5分鐘×3次。0.1%triton×100室溫下5分鐘，PBS洗5分鐘×3次。5%BSA(牛血清白蛋白)封閉，室溫下10分鐘，不洗，棄多余液體。染色步驟按試劑盒說明進(jìn)行。每批實(shí)驗(yàn)中均設(shè)立陽性和陰性對照，試劑公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。MASPIN抗體(1∶100)、VEGF抗體(1∶200)。用Olympus DP70采圖系統(tǒng)捕獲圖像，每組細(xì)胞取4個(gè)視野，采用Laserpix圖像分析軟件進(jìn)行分析，測定IOD。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有計(jì)算均用SPSS 13.0軟件進(jìn)行，由統(tǒng)計(jì)學(xué)專業(yè)人員進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。分類資料率的比較采用卡方檢驗(yàn)，MASPIN、VEGF與臨床各病理指標(biāo)的比較采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。VEGF、MASPIN之間的相關(guān)性比較采用直線或秩相關(guān)分析。三組及以上資料的比較，首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊者用多組計(jì)量資料的方差分析進(jìn)行比較，如有意義則采用q檢驗(yàn)兩兩比較。采用Kodak軟件對RT-PCR條帶進(jìn)行光密度值分析，分別以磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)和肌動(dòng)蛋白(β-actin)作系統(tǒng)內(nèi)參。通過計(jì)算對目的基因的表達(dá)進(jìn)行半定量。目的基因的表達(dá)指數(shù)=目的基因條帶的光密度值/相應(yīng)內(nèi)參照條帶的光密度值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MASPIN、VEGF在EOC的表達(dá)以及EOC臨床病理特點(diǎn)

2.1.1 MASPIN、VEGF在EOC中的表達(dá) MASPIN蛋白主要為細(xì)胞漿表達(dá)(圖1)，在正常卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞和EOC細(xì)胞的陽性表達(dá)分別為16.1%(5/31)和57.1%(20/35)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.07，P＜0.01)。VEGF蛋白的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，周圍的血管內(nèi)皮細(xì)胞也有陽性表達(dá)(圖2)，其白在正常卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞和EOC細(xì)胞的陽性表達(dá)分別為25.8%(8/31)和77.1%(27/35)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.39，P ＜ 0.01)。

圖1 MASPIN在卵巢癌中的陽性表達(dá)(IHC)200×

圖2 VEGF在卵巢癌中的陽性表達(dá)(IHC)200×

2.1.2 MASPIN、VEGF表達(dá)與EOC臨床病理特點(diǎn)見表1。其中MASPIN蛋白在非漿液性卵巢癌中表達(dá)高于漿液性卵巢癌中的表達(dá)，MASPIN蛋白表達(dá)還隨著手術(shù)－病理分期的進(jìn)展而下調(diào)，在I+II期和III+IV期中IOD值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在無腹水組中MASPIN蛋白表達(dá)高于有腹水組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在有腹水組和無腹水組IOD值分別為2.8466±1.4283和1.5526±1.3275，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在其余各組間VEGF蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 M ASPIN、V EG F表達(dá)與臨床病理指標(biāo)

2.1.3 MASPIN與VEGF的相關(guān)性 分析發(fā)現(xiàn)MASPIN與VEGF呈負(fù)相關(guān)(r=－0.738，P＜0.05)，即MASPIN的表達(dá)水平越高，VEGF的表達(dá)則相應(yīng)的降低。

2.2 轉(zhuǎn)染克隆的鑒定

2.2.1 AB免疫酶染色 SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN組的IOD值分別為493.5075±394.3448、415.5225 ± 144.8998、3629.547 ±1602.8288。SKOV3、SKOV3-pcDNA3 細(xì) 胞 中MASPIN表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而轉(zhuǎn)染MASPIN－cDNA的SKOV3-MASPIN細(xì)胞中MASPIN表達(dá)較轉(zhuǎn)染前及空載體組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，即轉(zhuǎn)染 MASPIN－cDNA的 SKOV3-MASPIN中MASPIN表達(dá)增強(qiáng)(圖3～圖5)。

2.2.2 RT-PCR SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN細(xì)胞采用RT-PCR方法，用Kodak凝膠成象系統(tǒng)及圖象分析軟件存儲圖象并分析結(jié)果，以MASPIN與GAPDH基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳帶的光密度比值，反映MASPIN的表達(dá)水平(圖6)。結(jié)果顯示，SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN 組的光密度比值分別為 0.6720±0.0131，0.6674±0.0128，1.0560±0.0052。SKOV3-MASPIN組 MASPIN表達(dá)水平明顯升高(P＜0.05)。而SKOV3、SKOV3-pcDNA3組MASPIN表達(dá)變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

圖3 SKOV3細(xì)胞中的MASPIN表達(dá)(IC)400× 圖4 SKOV3-vector細(xì)胞中的MASPIN表達(dá)(IC)400× 圖5 SKOV3-MASPIN細(xì)胞中的MASPIN表達(dá)(IC)400× 圖6 篩選克隆的PCR擴(kuò)增鑒定

2.2.3 Western Blot SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN細(xì)胞采用 Western Blotting方法，用BIORAD掃描儀捕獲圖像，Kodak圖象分析軟件分析結(jié)果，以MASPIN與β-actin帶的光密度比值，反映MASPIN的表達(dá)水平(圖7)。結(jié)果顯示，SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN組的光密度比值分別為 0.7823±0.0108，0.7653±0.0186，1.6549±0.1074。SKOV3-MASPIN組MASPIN表達(dá)水平明顯升高 (P ＜0.05)。SKOV3、SKOV3-pcDNA3組MASPIN表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 MASPIN過表達(dá)對VEGF表達(dá)的影響

2.3.1 MASPIN過表達(dá)對VEGF的mRNA表達(dá)的影響 SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN 細(xì)胞采用RT-PCR方法，用Kodak凝膠成象系統(tǒng)及圖象分析軟件存儲圖象并分析結(jié)果，以VEGF與GAPDH基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳帶的光密度比值，反映MASPIN的表達(dá)水平(圖8)。結(jié)果顯示，SKOV3、SKOV3-pcDNA3、SKOV3-MASPIN組的光密度比值分別為 1.015±0.018、0.991±0.010和 0.901±0.010。SKOV3-MASPIN組VEGF表達(dá)水平明顯降低(P＜0.05)。SKOV3、SKOV3-pcDNA3組 VEGF表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

圖7 pcDNA3-MASPIN在SKOV3細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Western Blot結(jié)果 1.SKOV3總蛋白;2.SKOV3/pcDNA3總蛋白;3.SKOV3/pcDNA3-MASPIN總蛋白 圖8 PCR結(jié)果 1:SKOV3;2:SKOV3/pcDNA3;3:SKOV3/pcDNA3-MASPIN

2.3.2 MASPIN過表達(dá)對VEGF蛋白表達(dá)的影響采用ABC免疫酶染色法檢測轉(zhuǎn)染MASPIN前后VEGF蛋白表達(dá)的變化。SKOV3、SKOV3-pcDNA3和SKOV3-MASPIN組的IOD值分別2350.257±1386.7257、2440.083±1006.6204 和 331.0025±212.0308。SKOV3、SKOV3-pcDNA3細(xì)胞中 VEGF表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而轉(zhuǎn)染MASPIN－cDNA的SKOV3-MASPIN細(xì)胞中VEGF表達(dá)較轉(zhuǎn)染前及空載體組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染 MASPIN－cDNA的 SKOV3-MASPIN細(xì)胞中VEGF表達(dá)下降(圖9～11)。

圖9 SKOV3細(xì)胞中的VEGF表達(dá)(IC)400×

圖1 0 SKOV3－vector細(xì)胞中的VEGF表達(dá)(IC)400×

圖1 1 SKOV3－MASPIN細(xì)胞中的VEGF表達(dá)(IC)400×

3 討論

MASPIN是一種新的絲氨酸蛋白酶抑制劑基因，MASPIN的表達(dá)隨著腫瘤的發(fā)展而逐漸消失，恢復(fù)腫瘤細(xì)胞中MASPIN的表達(dá)，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長、運(yùn)動(dòng)、轉(zhuǎn)移能力，因此將其定位為腫瘤抑制基因［3］。隨著對MASPIN內(nèi)在分子機(jī)制的深入研究發(fā)現(xiàn)在不同類型的細(xì)胞中，MASPIN表達(dá)形式不同，發(fā)揮的作用也不相同，MASPIN的表達(dá)與功能也尚無定論。Boltze等［4］對結(jié)腸癌的研究發(fā)現(xiàn)，MASPIN在88%～100%的腺瘤和正常組織以及69%的腫瘤中表達(dá)陽性，且MASPIN的弱表達(dá)或陰性表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)呈正比。與之相反，Song等［5］研究發(fā)現(xiàn)Maspin在由正常胃組織向胃癌的進(jìn)展中表達(dá)水平逐漸升高，且與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，認(rèn)為Maspin在胃癌進(jìn)展、脈管形成及轉(zhuǎn)移中扮演著重要角色。

為探討MASPIN在卵巢癌發(fā)展中的作用，本研究采用LSAB法檢測了MASPIN蛋白在31例正常卵巢組織和35例卵巢癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MASPIN蛋白主要定位于細(xì)胞漿，在正常卵巢組織中為陰性或弱陽性表達(dá)，陽性率為16.1%(5/31)，與卵巢癌組織中的57.1%(20/35)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。手術(shù)病理分期是對卵巢癌治療和預(yù)后影響最大的指標(biāo)［6］，本研究結(jié)果顯示，MASPIN蛋白表達(dá)在早期EOC(I、II)高于晚期(III、IV)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明MASPIN的表達(dá)隨著卵巢腫瘤的進(jìn)展而下調(diào)。從病理類型分析，MASPIN蛋白在非漿液性卵巢癌中表達(dá)高于在漿液性卵巢癌中表達(dá)，即MASPIN主要在非漿液性癌中表達(dá)，而漿液性癌的5年存活率低于黏液性和子宮內(nèi)膜樣癌［7］。據(jù)報(bào)道有腹水與無腹水組患者相比，前者的 5年生存率僅為 5%，而后者達(dá)45%［8］。這也說明MASPIN能在一定程度上抑制卵巢癌的轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果顯示，MASPIN在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)，但其與低手術(shù)-病理分期、非漿液性腫瘤、無腹水形成的相關(guān)性是與它的腫瘤抑制基因特性相符合的。

對于MASPIN在不同類型細(xì)胞中的表達(dá)水平不同、發(fā)揮作用不相同的這些矛盾結(jié)果可能有以下幾種解釋:①與maspin蛋白發(fā)生相互作用的相關(guān)蛋白在不同類型細(xì)胞中有特定的表達(dá)，因而maspin蛋白在不同類型細(xì)胞中的功能不同［9］;②maspin在不同細(xì)胞中的亞定位也對其功能起著關(guān)鍵的影響［10］;③maspin在腫瘤細(xì)胞中復(fù)雜的后生性改變，如maspin在不同細(xì)胞類型中特異表達(dá)，受到其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化的控制［11］。

Zhang等［1］在對乳腺癌、前列腺癌的研究中，通過體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MASPIN的腫瘤抑制活性可能主要依賴其對新生血管生成的抑制能力。因此MASPIN被看作一種新的腫瘤血管抑制因子。卵巢癌是一種實(shí)體腫瘤，在腫瘤間質(zhì)中存在著高密度的微血管，卵巢癌的生長轉(zhuǎn)移與微血管的形成密切相關(guān)?？寡苌苫蛑委熢诼殉材[瘤的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已取得了顯著療效，在卵巢癌的治療中具有很大潛力［12］。

已有的研究結(jié)果已證實(shí)VEGF與卵巢惡性腫瘤的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［13］。本研究中VEGF在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)(77.1%)與正常卵巢組織細(xì)胞(25.8%)相比增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，還發(fā)現(xiàn)VEGF與腹水形成有一定相關(guān)性，進(jìn)一步分析MASPIN與VEGF之間的相關(guān)性，結(jié)果顯示MASPIN表達(dá)與VEGF有顯著負(fù)相關(guān)性(P＜0.05)，因此推測在卵巢癌中，MASPIN具有抑制血管生成作用，并且可能與VEGF相關(guān)。

為進(jìn)一步探討MASPIN抑制卵巢癌血管生成的可能分子機(jī)制，本研究將真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-MASPIN-cDNA轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3，應(yīng)用RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法分別從基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平來了解過表達(dá)MASPIN對VEGF的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無論是基因轉(zhuǎn)錄還是蛋白表達(dá)水平，MASPIN對VEGF表達(dá)都有明顯抑制作用(P＜0.05)，進(jìn)一步說明MASPIN對腫瘤血管的抑制作用可能與VEGF有關(guān)。但MASPIN調(diào)節(jié)VEGF的內(nèi)在機(jī)制目前尚無研究。有報(bào)道指出，Bcl-2基因可能對 VEGF 的表達(dá)有一定調(diào)控作用［14，15］而 MASPIN可以通過包括線粒體和Bcl-2蛋白家族在內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的凋亡［16～18］。因此推測MASPIN對VEGF的調(diào)節(jié)可能是通過抑制Bcl-2基因的表達(dá)、增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的凋亡的途徑來發(fā)揮作用的。

綜上所述，與正常卵巢組織相比，MASPIN基因在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)，但MASPIN在卵巢癌的發(fā)展過程中可能仍發(fā)揮著腫瘤抑制基因的作用。MASPIN能從蛋白質(zhì)和mRNA水平下調(diào)卵巢癌中VEGF的表達(dá)，并可能通過這一機(jī)制抑制卵巢癌血管生成。MASPIN表達(dá)對卵巢腫瘤進(jìn)展和血管生成的抑制作用，為以MASPIN為基礎(chǔ)的抗腫瘤血管生成基因治療提供了有利的理論依據(jù)。

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