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    交聯(lián)果膠酶聚集體的制備及其對(duì)羅布麻的脫膠效果

    2013-09-19 08:53:44碩,李代,薛
    關(guān)鍵詞:羅布麻聚集體脫膠

    李 豐 碩,李 代,薛 永 常

    (1.大連工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院,遼寧 大連 116034;2.遼寧省大連海洋漁業(yè)集團(tuán)公司,遼寧 大連 116113)

    0 引 言

    羅布麻有“野生纖維之王”之稱,纖維含量極高,化學(xué)抗性好、延伸率低、結(jié)構(gòu)緊密,有良好的醫(yī)療保健作用,日益在紡織行業(yè)得到高度關(guān)注。羅布麻纖維脫膠方法及脫膠深度直接影響其后續(xù)加工。傳統(tǒng)的化學(xué)脫膠處理時(shí)間長(zhǎng),污染環(huán)境,消耗能源較大;生物脫膠具有脫膠周期短、纖維產(chǎn)量高、品質(zhì)好和環(huán)境污染輕等特點(diǎn)[1],薛衛(wèi)巍等[2]篩選出一株高效羅布麻脫膠菌種,翟秋梅等[3]將該菌種用于羅布麻生物脫膠,效果明顯。作者采用交聯(lián)酶聚集體技術(shù)[4]對(duì)枯草芽孢桿菌FM208849所產(chǎn)的對(duì)羅布麻脫膠具有特異性作用的果膠酶進(jìn)行固定化,在提高果膠酶在脫膠過(guò)程中的穩(wěn)定性和高效性[5]的基礎(chǔ)上,對(duì)果膠酶CLEAs的制備條件進(jìn)行了初步研究,并對(duì)其在羅布麻皮的脫膠效果進(jìn)行了探討。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    枯草芽孢桿菌(BacillussubtilisFM208849,S-1),本實(shí)驗(yàn)室分離保存。羅布麻(Apocynum venetumL.),采自青海柴達(dá)木盆地。牛血清白蛋白,Roche產(chǎn)品;果膠,Sigma公司。

    種子培養(yǎng)基[4]:牛肉膏3g/L,蛋白胨10g/L,NaCl 5g/L,pH 7.0,121℃滅菌20min。

    發(fā)酵培養(yǎng)基[4]:果膠1g/L,葡萄糖3g/L,牛肉膏15g/L,NaCl 2g/L,121℃滅菌20min。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 交聯(lián)果膠酶聚集體制備條件的確定

    游離果膠酶的制取參考文獻(xiàn)[6],果膠酶活力測(cè)定采用DNS法[7],蛋白含量測(cè)定采用Bradford法[8],脫膠殘膠率測(cè)定參考文獻(xiàn)[9],對(duì)交聯(lián)果膠酶聚集體制備影響因素進(jìn)行研究,通過(guò)測(cè)定果膠酶活力確定其交聯(lián)條件。

    1.2.2 交聯(lián)果膠酶聚集體對(duì)羅布麻脫膠應(yīng)用

    將制備好的交聯(lián)果膠酶聚集體用pH 9.5的Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液配制成10mg/mL懸浮液,取不同的體積分別與制備好的漚麻液(含羅布麻皮1g)在45℃水浴中進(jìn)行脫膠反應(yīng),脫膠10h后將殘留的羅布麻皮用清水沖洗、烘干,測(cè)定其殘膠率。在交聯(lián)果膠酶聚集體的最佳脫膠時(shí)間的確定中,分別進(jìn)行1、2、3、4、5、6、7、8、9、10h的脫膠反應(yīng),反應(yīng)完成后測(cè)定羅布麻皮的殘膠率。在考察交聯(lián)果膠酶聚集體的操作穩(wěn)定性時(shí),每次脫膠完成后,將交聯(lián)果膠酶聚集體離心、洗滌進(jìn)行重復(fù)脫膠實(shí)驗(yàn),共進(jìn)行10次脫膠檢測(cè)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 交聯(lián)果膠酶聚集體交聯(lián)條件確定

    2.1.1 戊二醛體積分?jǐn)?shù)

    如圖1所示,當(dāng)戊二醛體積分?jǐn)?shù)達(dá)到4%時(shí)相對(duì)酶活回收率達(dá)到最大值。戊二醛含有雙功能基團(tuán),既是酶的交聯(lián)劑,同時(shí)也是酶蛋白的變性劑,低濃度的戊二醛溶液易于果膠酶聚集體交聯(lián)完全,而高濃度的戊二醛能使蛋白質(zhì)變性。綜合考慮,選擇戊二醛溶液體積分?jǐn)?shù)為4%。

    圖1 戊二醛體積分?jǐn)?shù)對(duì)交聯(lián)果膠酶聚集體酶活力的影響Fig.1 Effects of glutaradehyde concentrations on pectinase CLEAs activity

    2.1.2 果膠酶聚集體交聯(lián)溫度

    交聯(lián)溫度的改變對(duì)CLEAs活力回收率的影響如圖2所示。當(dāng)交聯(lián)溫度較低時(shí),果膠酶CLEAs的活力回收率較高,30℃達(dá)到最大值;溫度繼續(xù)升高,CLEAs的活力損失較為嚴(yán)重,60℃時(shí),CLEAs的活力回收率僅為15%左右,因此選擇制備CLEAs交聯(lián)溫度為30℃。

    圖2 溫度對(duì)交聯(lián)果膠酶聚集體酶活力的影響Fig.2 Effect of cross-linked temperature on pectinase CLEAs activity

    2.1.3 果膠酶聚集體交聯(lián)時(shí)間

    將2mL的4%的戊二醛溶液緩慢滴加到制備好的果膠酶聚集體的懸浮液中,定時(shí)取樣,計(jì)算果膠酶CLEAs的活力回收率。圖3所示果膠酶CLEAs的酶活回收率隨著交聯(lián)時(shí)間的逐漸延長(zhǎng)而增大,當(dāng)交聯(lián)時(shí)間為135min時(shí),CLEAs的酶活回收率最大,達(dá)到61.5%,隨著時(shí)間的繼續(xù)增加,酶活回收率開始慢慢下降,因而確定交聯(lián)果膠酶聚集體的最佳交聯(lián)時(shí)間為135min。

    圖3 交聯(lián)時(shí)間對(duì)果膠酶聚集體酶活力的影響Fig.3 Effects of crosslinking time on pectinase CLEAs activity

    2.2 交聯(lián)果膠酶聚集體對(duì)羅布麻的脫膠效果

    2.2.1 羅布麻脫膠的交聯(lián)果膠酶聚集體體積質(zhì)量的確定

    20mL漚麻液(含羅布麻皮1g)與不同體積的10mg/mL交聯(lián)果膠酶聚集體進(jìn)行脫膠反應(yīng),脫膠效果如圖4所示。隨著交聯(lián)果膠酶聚集體含量的增加,羅布麻皮的殘膠率顯著下降,當(dāng)CLEAs體積質(zhì)量達(dá)到2.5mg/mL時(shí),羅布麻皮的殘膠率降至最低僅為4.55%,而當(dāng)CLEAs的用量大于2.5mg/mL時(shí),羅布麻的殘膠率不再有明顯下降。因而1g羅布麻皮脫膠所需的交聯(lián)果膠酶聚集體為50mg,殘膠率為4.55%。

    圖4 交聯(lián)果膠酶聚集體的體積質(zhì)量對(duì)羅布麻脫膠效果的影響Fig.4 Effect of CLEAs content on apocynum degumming

    2.2.2 交聯(lián)果膠酶聚集體的最佳脫膠時(shí)間

    50mg交聯(lián)果膠酶聚集體與20mL漚麻液在45℃條件下進(jìn)行脫膠反應(yīng),不同脫膠時(shí)間的羅布麻皮中殘膠率的結(jié)果如圖5所示。在脫膠反應(yīng)進(jìn)行8h后,羅布麻皮中的殘膠率趨于平衡,不再降低,因此,交聯(lián)果膠酶聚集體與漚麻液在45℃下進(jìn)行脫膠反應(yīng)的最佳時(shí)間為8h,羅布麻皮的殘膠率可降至4.61%。

    圖5 脫膠時(shí)間對(duì)羅布麻脫膠效果的影響Fig.5 Effect of degumming time for apocynum degumming

    2.2.3 交聯(lián)果膠酶聚集體脫膠的操作穩(wěn)定性

    對(duì)50mg的交聯(lián)酶聚集體與20mL漚麻液(含羅布麻皮1g)在45℃下進(jìn)行共10次重復(fù)脫膠反應(yīng),結(jié)果如表1。在經(jīng)過(guò)10次的羅布麻脫膠實(shí)驗(yàn)后,還能保證羅布麻的殘膠率在11.25%以下,說(shuō)明交聯(lián)果膠酶聚集體的操作穩(wěn)定性較好。

    表1 交聯(lián)果膠酶聚集體操作穩(wěn)定性Tab.1 Operation stability of CLEAs

    3 結(jié) 論

    以體積分?jǐn)?shù)為4%的戊二醛作為交聯(lián)劑,30℃水浴中交聯(lián)135min得到的交聯(lián)果膠酶聚集體果膠酶活性最高。利用5mL的10mg/mL的交聯(lián)果膠酶聚集體對(duì)羅布麻皮脫膠8h,可將其殘膠率降至4.61%。將果膠酶CLEAs進(jìn)行10次羅布麻皮脫膠實(shí)驗(yàn)后,殘膠率降至11.25%,說(shuō)明其可重復(fù)利用率較高。

    [1]鮑明東,陳卓,劉自镕,等.羅布麻生物脫膠研究初報(bào)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2002(6):11-13.

    [2]薛衛(wèi)巍,薛永常,翟秋梅,等.適于羅布麻生物脫膠的果膠酶產(chǎn)生菌分離篩選與表征[J].工業(yè)微生物,2009,39(2):55-58.

    [3]翟秋梅,薛永常,薛衛(wèi)巍,等.羅布麻酶法脫膠初探[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2011,30(1):118-123.

    [4]CAO L,van RANTWIJK F,SHELDON R A.Cross-linked enzyme aggregates:A simple and effective method for the immobilization of penicillin acylase[J].Organic Letters,2000,2(10):1361-1364.

    [5]翟秋梅,薛衛(wèi)巍,薛永常,等.枯草芽孢桿菌FM208849產(chǎn)果膠酶發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,29(2):93-97.(ZHAI Qiu-mei,XUE Wei-wei,XUE Yong-chang,et al.The optimization of pectinase fermentation fromBacillussubtilisFM208849[J].Journal of Dalian Polytechnic University,2010,29(2):93-97.)

    [6]李豐碩,張燦,薛永常,等.枯草芽孢桿菌FM208849產(chǎn)果膠酶的固定化及酶學(xué)性質(zhì)研究[J].生物技術(shù)通報(bào),2012(6):141-146.

    [7]張飛,岳田利,費(fèi)堅(jiān),等.果膠酶活力的測(cè)定方法研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2004,13(4):134-137.

    [8]袁道強(qiáng),黃建華.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和技術(shù)[M].北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社,2005:184-188.

    [9]薛衛(wèi)巍,翟秋梅,薛永常,等.羅布麻微生物脫膠工藝優(yōu)化[J].紡織學(xué)報(bào),2009,30(4):80-84.

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