運用氣相色譜同時測定稻田稻瘟酰胺和醚菌酯殘留量

許 磊，龔道新 ，劉 博，楊麗華，丁春霞，羅俊凱

(1湖南農(nóng)業(yè)大學資源環(huán)境學院，長沙410128;2湖南城市學院土木工程學院，益陽413000;3湖南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)環(huán)境保護研究所，長沙410128)

稻瘟酰胺又名氰菌胺，是日本農(nóng)藥株氏會社與巴斯夫公司于20世紀80年代共同開發(fā)的酰胺類殺菌劑，主要用于防治水稻稻瘟病。由于其不受環(huán)境和土壤影響，使用范圍廣，且使用方便。醚菌酯((E)-2-甲氧亞氨基－乙酸甲酯)是一種高效殺菌劑，對白粉病、梨黑星病等有較好的防效，具有廣泛的殺菌效應，還具有較好的保護治療機理，比一般殺菌劑的藥效長，具有較好的選擇性，對人、畜、作物及生物具有安全性，對生態(tài)環(huán)境基本沒有污染。

有關對稻瘟酰胺在水稻中殘留的測定，秦麗等［3］采用氣相色譜－電子捕獲檢測器，樣品分別采用乙腈、乙酸乙酯提取，中性氧化鋁和弗羅里硅土柱層析凈化，測得的平均回收率為78.6% ～108.4%，相對標準偏差(RSD)為3.5% ～23.4%。王雪莉［4］采用反相高效液相色譜法，以甲醇為溶劑，甲醇－水(65∶35，v/v)為流動相，ODS為填料和紫外檢測器分離測定稻瘟酰胺。李莉等［5］使用HP－5石英毛細管柱氣相色譜分析方法檢測稻瘟酰胺，標準偏差為0.223，變異系數(shù)為0.240%，回收率為98.96% ～100.87%，線性相關系數(shù) R=0.999 6。P.Cabras等［6］用丙酮 － 正己烷(1∶1，v/v)提取，GCMS聯(lián)用測定嘧菌酯、氟啶胺、醚菌酯、滅派林、四氟醚唑等5種農(nóng)藥在葡萄、葡萄汁和葡萄酒中的殘留量，其中醚菌酯最低檢出限為0.05 mg/kg。Michal Kirchnera等［7］使用0.15 mm內(nèi)徑窄口徑毛細管柱為色譜柱，GC-MS測定毒死蜱、醚菌酯和氯氰菊酯等多種農(nóng)藥。吳憲等［8］用丙酮超聲提取，固相柱凈化，GC-NPD法檢測黃瓜中的醚菌酯殘留量，最小檢出量為9×10－12g。王素利等［9］建立了以磷酸三苯酯為內(nèi)標物的醚菌酯原藥樣品氣相色譜定量分析方法。筆者利用稻瘟酰胺和醚菌酯易溶于有機溶劑的特點，同時提取和凈化稻田中殘留的稻瘟酰胺和醚菌酯，并運用氣相色譜儀，進行分離與檢測，經(jīng)過條件優(yōu)化后獲得了較好的效果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

主要儀器有7890A型氣相色譜儀(Agilent Technologies，帶ECD－Ni63)、HP－5石英彈性毛細管柱(5%Phenyl Methyl Siloxane，30.0 m ×360 μm ×0.25 μm);SHY－2AS型水浴恒溫振蕩器、TP－220A型電子天平、SHZ－D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵、RE－2000A型旋轉濃縮儀等。

主要試劑有:二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、正己烷、無水硫酸鈉、氯化鈉等。弗羅里硅土(Florisil 60-100mesh，美國ACROS ORGANICS生產(chǎn))，使用前在馬弗爐(650℃)中烘3～5 h，待其冷卻后用2%的蒸餾水脫活，并保存在130℃的烘箱中，待用。

稻瘟酰胺標準品(純度為94.0%)和醚菌酯標準品(純度為98.3%)，均由山東京博農(nóng)化科技股份有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 制備稻田水樣

準確量取稻田水100.0 mL，倒入250 mL分液漏斗中，并加入10%氯化鈉溶液20 mL，用30、30、20 mL二氯甲烷萃取3次，合并萃取液，在40℃的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮近干，用乙酸乙酯定容至5.0 mL，用于氣相色譜檢測。

1.2.2 制備土壤及植株樣品

使用電子天平準確稱取稻田土壤20.0 g，倒入250 mL具塞三角瓶中，并加入80 mL丙酮與水的混合液(9∶1，v/v)，在水浴恒溫振蕩器中振蕩30 min，減壓抽濾并用30、30 mL丙酮洗滌殘渣和抽濾瓶2次，合并濾液倒入250 mL具塞三角瓶中，在40℃的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮至10 mL左右;將濃縮液轉入(用二氯甲烷洗滌3次以上)盛有20 mL飽和氯化鈉溶液的250 mL分液漏斗中，用30、30、20 mL的二氯甲烷將其萃取3次，合并萃取液，在40℃的旋轉蒸發(fā)儀上濃縮近干，再用少量的正己烷溶解，待弗羅里硅土凈化。

稱取植株10.0 g，樣品的制備與土壤一致。

1.2.3 氣相色譜條件

載氣:氮氣(純度 99.999%)，載氣流速3 mL/min，尾吹氣流速 20 mL/min，氣化室溫度250℃，檢測室溫度300℃ ，柱溫100℃，保持2 min，20℃/min程序升溫至 200℃，保持 2 min，5℃/min程序升溫至220℃，保持2 min，進樣量1 μL。

2 結果與分析

2.1 提取和凈化條件的選擇

采用二氯甲烷萃取稻田水時，能夠獲得90%以上回收率，且去除雜質效果較理想。

分別采用乙腈、丙酮、丙酮－乙腈(1∶1，v/v)混合液、丙酮 －水(1∶1，v/v)、丙酮 － 水(4∶1，v/v)混合液、丙酮－水(9∶1，v/v)混合液作為土壤及植株的提取溶劑，發(fā)現(xiàn)前3種提取液均能滿足稻瘟酰胺和醚菌酯的添加回收率達90%以上，但均有較明顯的雜質峰干擾檢測;而用丙酮－水(9∶1，v/v)混合液提取時，稻瘟酰胺和醚菌酯提取率均達到90%以上，且比較穩(wěn)定，受雜質峰干擾最小，故選用丙酮－水(9∶1，v/v)混合液作為稻田土壤樣品及水稻植株樣品的提取劑。

使用二氯甲烷與10%氯化鈉溶液，液－液萃取稻田土壤樣品和植株樣品，可以有效地去除水中的雜質和色素，并能夠防止水中乳化層的形成。使用丙酮和正己烷的混合溶液(5∶95，v/v)對凈化柱進行淋洗，可以使色素和其他雜質較好地被吸附，結果表明，用60 mL的丙酮和正己烷的混合淋洗液能將98%以上的稻瘟酰胺和醚菌酯洗脫。

2.2 氣相色譜條件的選擇

使用極弱性的HP－5石英彈性毛細管柱對稻瘟酰胺和醚菌酯進行分離，ECD測定取得了較高的靈敏度和較好的分離效果。在不同的程序升溫條件下對稻瘟酰胺和醚菌酯進行試驗，結果表明，柱溫起始溫度為100℃，以20℃/min程序升溫至200℃時，能最大限度地縮短出峰時間，并能較好地減少雜質峰的干擾;200℃的柱溫，以5℃/min升溫至220℃時的分離度最好。在確定較適柱溫基礎上，從1 mL/min到8 mL/min之間改變載氣流速，結果表明，當載氣流速為3 mL/min時柱效最高。

2.3 方法的線性關系

準確稱取稻瘟酰胺和醚菌酯標準品，用乙酸乙酯分別配制成質量濃度為 0.01、0.02、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00 mg/L的稻瘟酰胺和醚菌酯的標準混合溶液，進行氣相色譜分析。以峰面積Y和標準混合液的質量濃度x作標準曲線，獲得稻瘟酰胺和醚菌酯的標準工作曲線分別為Y=183 227x+3 815.9(R2=0.998 7);Y=58 746x－701.26(R2=0.998 8)，表明在0.01～2.00 mg/L，稻瘟酰胺和醚菌酯混合液的質量濃度和峰面積呈良好線性關系。

圖1 稻瘟酰胺和醚菌酯標準混合溶液的氣相色譜圖

2.4 方法的靈敏度、準確度與精密度

在選定的條件下，稻瘟酰胺和醚菌酯的最小檢出量為10 pg，在稻田水、土壤和水稻植株中的最低檢出限均為0.01 mg/kg(或mg/L)。

在稻田水、土壤和植株的空白樣品中，分別添加稻瘟酰胺和醚菌酯的標準混合溶液，使樣品中農(nóng)藥含量分別為 0.05、0.50、1.00 mg/kg(或 mg/L)，每個重復5次，回收率試驗結果見表1。稻瘟酰胺和醚菌酯在稻田水、稻田土壤和植株中的平均回收率為91.0% ～106.7%，其相對標準偏差為2.3% ～12.3%，均在農(nóng)藥殘留試驗準則允許范圍內(nèi)。在不同樣品中測定稻瘟酰胺和醚菌酯的色譜圖見圖2。

表1 稻瘟酰胺和醚菌酯的加標回收率及其相對標準偏差

圖2 稻田樣品中稻瘟酰胺和醚菌酯的氣相色譜圖

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