硫丹及其主要代謝產(chǎn)物對紫色土中酶活性的影響

熊佰煉，張進忠，2，* ，代 娟，邢 賾，徐衛(wèi)紅

(1.西南大學資源環(huán)境學院，三峽庫區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部重點實驗室，重慶 400715;2.重慶市農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境重點實驗室，重慶 400716)

硫丹(endosulfan)是一種廣泛使用的有機氯農(nóng)藥，2011年被列入持久性有機污染物(POPs)控制清單［1］。我國從1994年開始生產(chǎn)和使用硫丹，多年的施用使得我國大部分地區(qū)土壤中都有不同程度的硫丹殘留和積累［2-3］。土壤酶是土壤生化反應(yīng)的重要催化劑，對土壤物質(zhì)代謝和養(yǎng)分轉(zhuǎn)化都有顯著影響［4-5］。土壤酶對環(huán)境變化非常敏感，可以作為預(yù)警土壤環(huán)境質(zhì)量變化和外源性化學污染物的生物指標［6-7］。硫丹在土壤中的殘留勢必影響土壤酶活性，相關(guān)研究主要涉及的土壤酶有脫氫酶、熒光素二乙酸脂水解酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、固氮酶、芳基硫酸酯酶和β-d-葡萄糖苷酶等［8-9］。但是，關(guān)于硫丹及其主要代謝產(chǎn)物(硫丹硫酸鹽和硫丹二醇)對土壤脲酶、硝酸還原酶和多酚氧化酶活性的影響尚不清楚，且未見報道。

土壤脲酶催化尿素水解成CO2和NH3，常作為土壤響應(yīng)環(huán)境干擾的重要指標［10-12］。硝酸還原酶催化硝態(tài)氮還原為亞硝態(tài)氮，是反硝化過程中的一種重要酶，參與土壤氮素循環(huán)［13-14］。土壤多酚氧化酶將木質(zhì)素分解產(chǎn)生的酚類物質(zhì)氧化為醌類物質(zhì)，隨后形成腐殖質(zhì)等有機物，其活性高低與土壤有機質(zhì)的形成和腐殖化程度密切相關(guān)［15-16］。紫色土是長江上游最常見的土壤類型，分布區(qū)地形多為丘陵、低山，土壤有機質(zhì)含量普遍不高，水土流失較為嚴重［17］，該地區(qū)在防治農(nóng)作物蟲害時大量施用硫丹［2］，使得土壤中硫丹殘留較為嚴重［3］。為此，本研究采用室內(nèi)避光培養(yǎng)實驗，模擬研究硫丹及其主要代謝產(chǎn)物(硫丹硫酸鹽和硫丹二醇)對紫色土中上述3種酶活性的影響，為探討硫丹對土壤環(huán)境質(zhì)量的影響和評估農(nóng)藥施用的生態(tài)風險提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試土壤

供試紫色土采自西南大學實驗農(nóng)場0—20 cm土層，該農(nóng)場無使用硫丹類農(nóng)藥的歷史，且未檢出硫丹及其代謝產(chǎn)物。采集的土壤樣品經(jīng)自然風干、研磨、分別過1 mm和0.25 mm篩后備用，其基本理化性質(zhì)見表1。

表1 供試土壤的基本理化性質(zhì)(0—20 cm土層)Table1 Basic physicochemical property of the tested soil(0—20 cm depth)

1.2 主要試劑和材料

α-硫丹(98%)、β-硫丹(98.7%)標準品購自美國Sigma公司;硫丹硫酸鹽(98.5%)、硫丹二醇(99.4%)標準品購自德國Dr.Ehrenstorfer公司;

硫丹原藥購自河南春光農(nóng)化有限公司，純度為96%，經(jīng)測定α、β-硫丹的質(zhì)量比為62.66∶37.34;

乙腈、甲醇均為色譜純(美國Thermo Fisher公司);其余試劑均為分析純;

Florisil固相萃取小柱(美國Welch公司):500 mg/6 mL，用前經(jīng)正己烷活化。

1.3 實驗步驟和方法

1.3.1 土壤培養(yǎng)與酶活性測定

向過0.25 mm篩的土壤中加入溶于石油醚的硫丹原藥，充分攪拌混勻，待石油醚完全揮發(fā)后，得到質(zhì)量濃度為1.00 g/kg的硫丹污染母土。在過1 mm篩的土壤中加入適量的污染母土，多級稀釋混勻，使土壤中原藥濃度分別為0、5、10、20和100 mg/kg，得到CK、T1—T4共5種處理。稱取制得的土樣300 g，調(diào)節(jié)含水量至田間最大持水量的60%，裝入廣口瓶中，蓋上棉塞，在(25±1)℃的生化培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，每個處理做3次重復。培養(yǎng)過程中用高溫滅菌去離子水補水，維持土樣含水量的恒定。第5、10、15、20、30和60天時采集土樣，立即測定土壤酶活性。脲酶、硝酸還原酶和多酚氧化酶的活性分別用尿素殘留法、鄰苯三酚比色法和酚二磺酸比色法測定［18］，設(shè)置無土壤的底物和無底物的土壤為對照。上述方法測定脲酶、硝酸還原酶和多酚氧化酶活性的相對標準偏差(RSD)分別為5.1%、4.2%和4.4%(n=5)。

1.3.2 土壤中硫丹及其代謝產(chǎn)物的提取與凈化

土壤中硫丹及其代謝產(chǎn)物的提取在馬輝等［19］和Kumar等［20］方法的基礎(chǔ)上加以改進。在培養(yǎng)0、5、10、15、20、30和60 d時稱取相當于20 g干土的培養(yǎng)土樣，加入50 mL丙酮，超聲提取30 min，Whatman 42號定性濾紙過濾，用少量丙酮多次洗滌濾渣，全部濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入10%的NaCl溶液100 mL，分別用50、50和30 mL石油醚振蕩提取3次，每次振搖5 min以上，靜置分層，棄去下層丙酮水互溶相。提取液經(jīng)無水Na2SO4柱脫水后轉(zhuǎn)移至旋蒸瓶，40°C水浴減壓濃縮至近干，加入2 mL石油醚，旋渦振蕩溶解。將2 mL濃縮液轉(zhuǎn)移至預(yù)先活化的Florisil固相萃取小柱，用10 mL甲苯/正己烷(65∶35)淋洗，收集流出液，氮氣吹干，準確加入2 mL乙腈，渦旋振蕩溶解，供高效液相色譜(HPLC)分析。

1.3.3 硫丹及其代謝產(chǎn)物的測定與質(zhì)量控制

采用 HPLC(Shimadzu Sil-20A)分離、SPD-20A檢測器測定硫丹及其代謝產(chǎn)物的含量。色譜柱:DiamonsilTM(鉆石二代)C18液相色譜柱(4.5μm，250 mm ×4.6 mm);流動相:乙腈∶水(70∶30體積分數(shù))，等度洗脫，流速為1.0 mL/min;進樣體積20μL;檢測波長214 nm［21］;外標法定量。α、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇的檢測限均為0.1 mg/L，4種化合物在6個加標水平獲得的平均回收率分別為96.67%、95.17%、95.33%和97.50%，相對標準偏差(RSD)分別為6.91%、6.03%、6.81%和7.24%。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0對實驗數(shù)據(jù)進行擬合、Pearson相關(guān)分析和偏相關(guān)分析，Origin 8.5軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 硫丹在紫色土中的降解過程

α、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度隨時間的變化過程如圖1所示。從圖1可以看出，土壤中α、β-硫丹的濃度均隨培養(yǎng)時間的增加而逐漸減少;前20 d硫丹硫酸鹽濃度增加較快，30 d后基本趨于穩(wěn)定;硫丹二醇濃度呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢，在15 d時達到最大。

圖1 土壤中硫丹及其代謝產(chǎn)物濃度隨時間的變化Fig．1 Variations of the concentrations of endosulfan and its metabolites in soil with time

采用一級反應(yīng)動力學模型擬合土壤中硫丹隨培養(yǎng)時間的降解過程，獲得如表2所示的結(jié)果。一級降解反應(yīng)動力學方程為:

土壤中硫丹的半衰期為:

式中，t為降解反應(yīng)時間(d);C0和Ct分別為土壤中硫丹的初始濃度和t時刻的濃度(mg/kg);k為反應(yīng)速率常數(shù)(d-1)。

從表2可以看出，可用一級反應(yīng)動力學模型描述α-、β-硫丹在紫色土中的降解過程，獲得的決定系數(shù)在0.935—0.995之間。硫丹初始濃度對降解反應(yīng)速率常數(shù)有一定影響，T1—T3處理時α-硫丹的降解速率常數(shù)相差不大，T4處理的速率常數(shù)明顯變小;T2—T4處理的β-硫丹降解速率常數(shù)十分接近，明顯小于T1處理的0.01/d。獲得α-、β-硫丹的半衰期分別為32—99 d和69—116 d，高濃度的硫丹在紫色土中降解更慢。

2.2 硫丹處理對土壤酶活性的影響

硫丹處理對土壤酶活性的影響如圖2—圖4所示。從圖2可知，CK處理時脲酶活性為0.13—0.14 mg·g-1·24 h-1;添加硫丹的初始濃度越大，脲酶活性越低。第5天時，T1處理對脲酶起激活作用，較CK增加20.0%(n=3，P＜0.05)，T2處理對脲酶也表現(xiàn)出激活作用，但與CK差異不顯著;除此之外，硫丹處理對脲酶不再表現(xiàn)出激活作用。第5—20天時T1—T3處理脲酶活性隨時間發(fā)生波動，且大部分與CK差異不顯著，僅T3處理在第10天時較CK下降16.2%(n=3，P＜0.05);第20—60天時T1—T3處理脲酶活性隨時間持續(xù)下降，第60天時受到明顯抑制，較CK分別下降19.2%、34.8%和46.9%(n=3，P＜0.01)。T4處理對脲酶活性有強烈的抑制作用，第5、10、15、20、30和60天時分別下降94.5%、85.0%、68.8%、90.1%、56.7%和71.9%(n=3，P ＜0.01)。

表2 土壤中α、β-硫丹降解的動力學方程(n=7)Table 2 Dynamic equations of endosulfan degradation in soil

從圖3可知，CK處理時硝酸還原酶活性為0.950—1.161 mg·g-1·24 h-1。T1處理，第5天對硝酸還原酶起激活作用，較CK增加12.3%(n=3，P＜0.05);第20和60天，酶活性與CK差異不顯著。除此之外，硫丹處理對硝酸還原酶活性表現(xiàn)出明顯的抑制作用，抑制作用隨添加硫丹初始濃度的增加而逐漸增強。T1—T3處理酶活性變化的趨勢基本相同，說明這3個處理對硝酸還原酶活性的作用機理可能相同;T4處理第5、10、15、20、30和60天時酶活性較CK分別下降54.8%、70.1%、72.8%、84.3%、88.8%和89.9%(n=3，P ＜0.01)，表明高濃度硫丹對酶活性的作用方式可能發(fā)生了變化。

圖2 硫丹對土壤脲酶活性的影響Fig．2 Effect of endosulfan on urease activity in soil圖中數(shù)據(jù)為ˉx±S

圖3 硫丹對土壤硝酸還原酶活性的影響Fig．3 Effect of endosulfan on nitrate reductase activity in soil

從圖4可知，CK處理時多酚氧化酶活性為0.57—0.72 mg·g-1·2 h-1，除T4處理的酶活性峰值出現(xiàn)在第15天，T1—T3處理均出現(xiàn)在第20天。T1處理對多酚氧化酶表現(xiàn)出一定的抑制作用，第10、15、30和60天時酶活性較CK分別下降12.6%、12.3%、25.3%和22.7%(n=3，P＜0.05)，但第5和20天時對酶活性影響不顯著。T2處理對多酚氧化酶活性的影響不大，僅第60天時表現(xiàn)出較強的抑制作用，酶活性較CK下降14.2%(n=3，P＜0.01)。T3處理對多酚氧化酶活性的影響隨時間變化較大，表現(xiàn)為“無顯著影響(第5天)—激活(第10、15、20天)—無顯著影響(第30天)—抑制(第60天)”的變化趨勢。第 5、10、15、20和 30天，T4處理對多酚氧化酶起激活作用，酶活性較CK分別增加92.6%、93.6%、139.9%、83.8%和 31.3%(n=3，P＜0.01);第60天，多酚氧化酶活性恢復到CK水平?？傮w來說，隨著添加硫丹初始濃度的增大，多酚氧化酶活性呈“抑制(T1處理)—無影響(T2處理)—激活(T3和T4處理)”的變化趨勢。

2.3 硫丹殘留與土壤酶活性的關(guān)系

硫丹在土壤中以多種途徑轉(zhuǎn)化，硫丹硫酸鹽和硫丹二醇是其主要代謝產(chǎn)物。將酶活性與硫丹及其主要代謝產(chǎn)物濃度進行Pearson相關(guān)分析和偏相關(guān)分析，結(jié)果見表3。

圖4 硫丹對土壤多酚氧化酶活性的影響Fig 4 Effect of endosulfan on polyphenol oxidase activity in soil

表3 土壤酶活性與硫丹及其代謝產(chǎn)物濃度的相關(guān)關(guān)系Table 3 Correlations between the enzyme activity and the concentration of endosulfan and its metabolites in soil

從Pearson相關(guān)系數(shù)來看，土壤脲酶和硝酸還原酶活性與α-、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度均呈顯著負相關(guān)，多酚氧化酶活性與其呈顯著正相關(guān)?？梢?，土壤中這4種化合物對脲酶和硝酸還原酶活性均起抑制作用，對多酚氧化酶活性起激活作用。但是，當多個影響因素同時存在時，Pearson相關(guān)分析不能真實反映變量間的相關(guān)關(guān)系。因此，在考察土壤酶活性與硫丹或其代謝產(chǎn)物濃度的相關(guān)關(guān)系時，需要控制其它變量的影響，進行偏相關(guān)分析。

從表3的偏相關(guān)分析結(jié)果可以看出，脲酶活性與α-、β-硫丹和硫丹二醇濃度間的偏相關(guān)系數(shù)均未達到顯著水平，表明這3種化合物單獨作用時對脲酶活性的影響均不大;脲酶活性與硫丹硫酸鹽濃度間的偏相關(guān)系數(shù)為-0.522，呈顯著負相關(guān)，對脲酶活性起抑制作用。硝酸還原酶活性與α-、β-硫丹和硫丹二醇濃度的偏相關(guān)性不顯著，表明這3種化合物單獨作用時對其活性的影響較弱;硝酸還原酶活性與硫丹硫酸鹽間的偏相關(guān)系數(shù)為-0.691，呈顯著負相關(guān)，對硝酸還原酶活性起抑制作用。多酚氧化酶活性與α-、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度間的偏相關(guān)系數(shù)均未達到顯著水平，表明這4種化合物單獨作用時對多酚氧化酶活性的直接影響較小。

3 討論

在農(nóng)業(yè)土壤環(huán)境中，農(nóng)藥的遷移轉(zhuǎn)化主要有揮發(fā)、淋溶、水解、光解、微生物降解和生物吸收等途徑，其中許多過程不受農(nóng)藥初始濃度的影響，符合一級反應(yīng)動力學特征，半衰期通常是一個常數(shù)［22］。但本研究中α-、β-硫丹的半衰期分別為32—99 d和69—116 d，隨硫丹初始濃度不同而發(fā)生改變。Awasthi等［23］的研究也表明，硫丹在土壤中的降解速率會隨其初始濃度的增加而減慢。其原因可能是在室內(nèi)培養(yǎng)條件下，土壤微生物和酶活性是影響硫丹降解的主要因素。硫丹具有生物毒性，高濃度硫丹處理對微生物和酶活性的毒害作用更大，抑制了微生物和酶對硫丹的降解。

脲酶活性與α-、β-硫丹和硫丹硫酸鹽濃度間的Pearson相關(guān)系數(shù)(-0.587、-0.661和-0.795)大于偏相關(guān)系數(shù)(0.098、-0.290和-0.522)，表明這3種化合物同時存在時對脲酶活性的影響比其單獨存在時強。Soto等［24］和Wan等［25］的研究表明，α-、β-硫丹和硫丹硫酸鹽對陸生和水生生物、人體的聯(lián)合毒性高于單一化合物，表現(xiàn)出毒性的協(xié)同作用。由此看來，α-、β-硫丹和硫丹硫酸鹽共存時對脲酶活性的抑制作用高于單一化合物，使得硫丹處理能顯著降低土壤脲酶的活性。但是，圖2中T1處理5 d時脲酶活性高于CK，表現(xiàn)出激活作用，與相關(guān)分析獲得的結(jié)論不符。這可能是因為土壤中存在兩種形式的脲酶［26］:一是吸附在土壤有機質(zhì)和土壤礦物中的胞外脲酶;二是以游離態(tài)存在于微生物細胞中的胞內(nèi)脲酶。有機氯農(nóng)藥對微生物具有毒性，可破壞甚至殺死土壤微生物細胞，使部分胞內(nèi)脲酶釋放出來，增大脲酶的濃度，進而增強土壤中脲酶的活性［27］。T1處理5 d時，硫丹及其代謝產(chǎn)物可能破壞微生物細胞，釋放出的胞內(nèi)脲酶增加了土壤中的酶濃度，導致脲酶活性比CK大。隨著培養(yǎng)時間的增加，不適應(yīng)硫丹脅迫的微生物細胞被全部破壞，適應(yīng)硫丹脅迫的微生物不再釋放胞內(nèi)脲酶，硫丹處理對脲酶活性不再表現(xiàn)出激活作用。T2、T3和T4處理5 d時脲酶活性未表現(xiàn)激活作用，可能與硫丹的濃度較高有關(guān)。Nasreen等［28］的研究表明，硫丹施用量為1.0—7.5 kg/hm2(約為10—75 mg/kg［29］)時對黑粘土(Black clay soil)中脲酶起激活作用，本研究卻發(fā)現(xiàn)10—100 mg/kg硫丹處理可抑制紫色土中脲酶活性;當硫丹濃度增大到10.0 kg/hm2(約為100 mg/kg［29］)時，對脲酶活性的影響由激活轉(zhuǎn)向抑制［28］，與本研究100 mg/kg硫丹抑制紫色土中脲酶活性的結(jié)果一致。Sannino等［30］發(fā)現(xiàn)，在同一種農(nóng)藥(草甘膦或百草枯)的作用下，不同類型土壤中脲酶活性出現(xiàn)被抑制和激活的兩種截然不同結(jié)果。由此看來，硫丹對土壤脲酶活性的影響可能與土壤類型有關(guān)。

硝酸還原酶活性與β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度間的Pearson相關(guān)系數(shù)(-0.743、-0.876和-0.639)大于偏相關(guān)系數(shù)(-0.170、-0.691和-0.177)，表明這3種化合物同時存在時對硝酸還原酶活性的抑制作用強于單一化合物，對酶活性的影響類似于毒物之間的協(xié)同作用。圖3中T1處理5 d時硝酸還原酶活性高于CK，其原因還有待進一步研究。硫丹影響土壤酶活性可長達數(shù)月，作用結(jié)果表現(xiàn)為持續(xù)抑制、持續(xù)激活、激活與抑制作用隨時間變化等3種形式［8-9，31-32］。Kalyani等［9］發(fā)現(xiàn)，硫丹在98 d內(nèi)可持續(xù)抑制土壤固氮菌產(chǎn)生的固氮酶。Buff等［33］認為，硫丹可以吸附于固氮菌細胞膜，并進入細胞內(nèi)部與胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，對固氮菌產(chǎn)生毒害作用，抑制固氮酶活性。圖2和圖3中60 d內(nèi)土壤脲酶和硝酸還原酶活性受到持續(xù)抑制，偏相關(guān)分析表明起抑制作用的主要是殘留期比母體化合物更長的硫丹硫酸鹽，這兩種酶活性的抑制作用機理是否類似于硫丹持續(xù)抑制固氮酶活性，還需要進一步研究。

Pearson相關(guān)分析表明，多酚氧化酶活性與α-、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度間均呈顯著正相關(guān)，而偏相關(guān)分析顯示多酚氧化酶活性與它們均無顯著相關(guān)性，說明這4種化合物單獨存在時對多酚氧化酶活性影響較小，對酶活性的影響可能是它們共同作用的結(jié)果。圖4中T2—T4處理，硫丹含量越高，多酚氧化酶的活性越強，其中T3和T4處理分別在培養(yǎng)5—20 d和30 d時顯著激活多酚氧化酶活性。Gianfreda等［34］和周禮愷［4］報道，含苯環(huán)的化合物能誘導和激活土壤中多酚氧化酶的活性，并促進該類化合物的氧化分解。Chen等［35］進一步證實，在一定條件下，土壤中多環(huán)化合物的濃度越大，多酚氧化酶的活性越強。李鈉等［36］研究表明，含雜環(huán)的尼古丁和煙焦油能誘導胞內(nèi)多酚氧化酶向胞外遷移，增加該酶的活性。硫丹的分子結(jié)構(gòu)中含有兩個五元碳環(huán)、一個六元碳環(huán)、一個七元雜環(huán)，這可能是T3和T4處理在培養(yǎng)初期可顯著激活多酚氧化酶活性的原因之一。Defo等［8］的研究顯示，硫丹可為某些微生物的生長提供碳源，增加了土壤中酶的活性，使得硫丹處理初期多酚氧化酶被激活。圖4中T2—T4處理對多酚氧化酶活性最終都起抑制作用，可能與硫丹的高毒代謝產(chǎn)物硫丹硫酸鹽的積累有關(guān)，除第5天和20天外，T1處理顯著抑制多酚氧化酶活性的原因還有待進一步研究。

［1］ Yang J，Zhang WJ.Current situation of production，use and management of endosulfan.Pesticide Science and Administration，2011，32(10):6-9.

［2］ Jia H L，Li Y F，Wang D G，Cai D J，Yang M，Ma JM，Hu JX.Endosulfan in China 1-gridded usage inventories.Environmental Science and Pollution Research，2009，16(3):295-301.

［3］ Jia H L，Sun Y Q Li Y F，Tian C G，Wang D G，Yang M，Ding Y S，Ma J M.Endosulfan in China 2-emissions and residues.Environmental Science and Pollution Research，2009，16(3):302-311.

［4］ Zhou L K.Soil Enzymology.Beijing:Science Press，1987:116-222

［5］ He W X，Yao M J，Sun L N，Sun T H.Effects of furadan on soil enzyme activity.Chinese Journal of Applied Ecology，2007，18(8):1921-1924.

［6］ Zhang Y L，Chen L J，Zhang L L.Enzymological indicators of soil quality.Chinese Journal of Soil Science，2005，36(4):598-604.

［7］ Fan K，Wang K Y，Wang D，Xia X M，Liu Z L，Wang H Y.Effects of 1，3-dichloropropene on soil microbial population and enzyme activities.Acta Ecologica Sinica，2008，28(2):695-701.

［8］ Defo M A，Njine T，Nola M，Beboua F S.Microcosm study of the long term effect of endosulfan on enzyme and microbial activities on two agricultural soils of Yaounde-Cameroon.African Journal of Agricultural Research，2011，6(9):2039-2050.

［9］ Kalyani SS，Sharma J，Dureja P，Singh S，Lata.Influence of endosulfan on microbial biomass and soil enzymatic activities of a tropical alfisol.Bulletin of Environment Contamination and Toxicology，2010，84(3):351-356.

［10］ Tejada M，Gonzalez J L，Hernandez M T，Garcia C.Application of different organic amendments in a gasoline contaminated soil:Effect on soil microbial properties.Bioresource Technology，2008，99(8):2872-2880.

［11］ Shen G Q，Lu Y T，Zhou Q X，Hong JB.Interaction of polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals on soil enzyme.Chemosphere，2005，61(8):1175-1182.

［12］ Hinojosa M B，Carreira JA，Rodrguez-maroto J M，García-Ruíz R.Effects of pyrite sludge pollution on soil enzyme activities:Ecological doseresponse model.Science of the Total Environment，2008，396(2/3):89-99.

［13］ Zhang Z D，Zhao L P.The significance of soil enzyme in studying soil fertility management.Chinese Journal of Soil Science，2006，37(2):362-368.

［14］ Chen L J，Wu Z J，Jiang Y，Zhou L K.Response of N transformation related soil enzyme activities to inhibitor applications.Chinese Journal of Applied Ecology，2002，13(9):1099-1103.

［15］ Hao JC，Wu Y Y，Lian B，Wu C D.Properties of polyphenoloxidase in soil and its significance.Chinese Journal of Soil Science，2006，37(3):470-474.

［16］ Yue Z H，Wang B W，Wang H F，Yan X F.Polyphenol oxidase activity and its relationship to the soil main fertilizer factor in west Songnen alkali grassland.Acta Pratacul Turae Sinica，2009，18(4):251-255.

［17］ He Y R.Purple Soil in China(Volume 2).Beijing:Science Press，2003:13-31.

［18］ Pi G J，Tang SY.Principle and Application of Agricultural Environmental Monitoring.Chengdu:Chengdu University of Science and Technology Press，1998:148-154.

［19］ Ma H，Zhang D H，Li X X，Zhang SJ，Chen Y D.Study on a residues dynamics of endosulfan in cotton and soil.Journal of Shihezi University:Natural Science Edition，2008，26(5):579-582.

［20］ Kumar P，Singh S P，Madhukar D，Kotresh A M.Determination of endosulfan residues in buffalo meat using high performance liquid chromatography.Buffalo Bulletin，2009，28(4):188-197.

［21］ Siddique T，Zahir A Z，F(xiàn)rankenberger W T.Reversed-phase liquid chromatographic method for analysis of endosulfan and its major metabolites.Journal of Liquid Chromatography＆ Related Technologies，2003，26(7):1069-1082.

［22］ Hamaker J W.Mathematical Prediction of Cumulative Levels of Pesticides in Soil.In Rosen A A and Kraybill H F(eds.)，Organic Pesticides in the Environment.Washington D C:American Chemical Society，1966，60(10):122-131.

［23］ Awasthi N，Ahuja R，Kumar A.Factors influencing the degradation of soil-applied endosulfan isomers.Soil Biology and Biochemistry，2000，32(11/12):1697-1705.

［24］ Soto A M，Chung K L，Sonnenschein C.The pesticides endosulfan，toxaphane，and dieldrin have estrogenic effects on human estrogen-sensitive cells.Environmental Health Perspectives，1994，102(4):380-383.

［25］ Wan M T，Kuo J N，Buday C，Schroeder G，Aggelen G V，Pasternak J.Toxicity ofα-andβ-endosulfan and their formulated and degradation products to Daphnia magna，Hyalella azteca，Oncorhynchus mykiss，Oncorhynchus kisutch，and biological implications in streams.Environmental Toxicology and Chemistry，2005，24(5):1146-1154.

［26］ Pettit N M，Smith A RJ，F(xiàn)reedman R B，Burns R G.Soil urease:activity，stability and kinetic properties.Soil Biology and Biochemistry，1976，8(6):479-484.

［27］ Wang C Y，He W X，Liu H L，Lai H X，Deng X C.Effect of monochlorobenzene on soil urease activity characteristics.Journal of Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry:Natural Science Edition，2009，37(7):171-175.

［28］ Nasreen C，Mohiddin GJ，Srinivasulu M，Padmini R A，Ramanamma P，Rangaswamy V.Interaction effects of insecticides on enzyme activities in black clay soil from groundnut(Arachis hypogaea L.)fields.Environmental Research，Engineering and Management，2012，60(2):21-28.

［29］ Nasreen C，Mohiddin G J，Srinivasulu M，Padmini R A，Ramanamma P，Rangaswamy V.Responses of soil enzymes to insecticides in groundnut(Arachis hypogaea L.)cultivated black soil.World Journal of Agricultural Sciences，2012，8(2):163-168.

［30］ Sannino F，Gianfreda L.Pesticide influence on soil enzymatic activities.Chemosphere，2001，45(4/5):417-425.

［31］ Giri1 P K，Saha M，Halder M P，Mukherjee D.Effect of pesticides on microbial transformation of sulphur in soil.Journal of Soil Science and Environmental Management，2011，2(4):97-102.

［32］ Kumar S.Effect of endosulfan and chlorpyrifos on protease activity in the cultivated soil.International Journal of Advanced Engineering Technology，2011，2(3):188-192.

［33］ Buff K，Mano DM S，Langenbach T.Effect of endosulfan on Azospirillum lipoferum growth，morphology，nitrogenase activity，and protein binding.Applied and Environmental Microbiology，1992，58(9):3173-3176.

［34］ Gianfreda L，Rao M A，Piotrowska A，Palumbo G，Colombo C.Soil enzyme activities as affected by anthropogenic alterations:intensive agricultural practices and organic pollution.Science of the Total Environment，2005，341(1/3):265-279.

［35］ Chen Y，Wang CX，Wang Z J，Huang SB.Assessment of the contamination and genotoxicity of soil irrigated with wastewater.Plant and Soil，2004，261(1/2):189-196.

［36］ Li N，Zhang J，Min H，Shao A P，Zhou H J.Variation of polyphenoloxidase in phenanthrene-degrading and other aromatic compounds-degrading bacteria.Agriculture and Life Sciences，2006，32(5):495-499.

參考文獻:

［1］ 楊峻，張文君.硫丹的生產(chǎn)使用現(xiàn)狀及管理動態(tài).農(nóng)藥科學與管理，2011，32(10):6-9.

［4］ 周禮愷.土壤酶學.北京:科學出版社，1987:116-222.

［5］ 和文祥，姚敏杰，孫麗娜，孫鐵珩.呋喃丹對土壤酶活性的影響.應(yīng)用生態(tài)學報，2007，18(8):1921-1924.

［6］ 張玉蘭，陳利軍，張麗莉.土壤質(zhì)量的酶學指標研究.土壤通報，2005，36(4):598-604.

［7］ 范昆，王開運，王東，夏曉明，劉振龍，王紅艷.1，3-二氯丙烯藥劑對土壤微生物數(shù)量和酶活性的影響.生態(tài)學報，2008，28(2):695-701.

［13］ 張志丹，趙蘭坡.土壤酶在土壤有機培肥研究中的意義.土壤通報，2006，37(2):362-368.

［14］ 陳利軍，武志杰，姜勇，周禮愷.與氮轉(zhuǎn)化有關(guān)的土壤酶活性對抑制劑施用的響應(yīng).應(yīng)用生態(tài)學報，2002，13(9):1099-1103.

［15］ 郝建朝，吳沿友，連賓，吳春篤.土壤多酚氧化酶性質(zhì)研究及意義.土壤通報，2006，37(3):470-474.

［16］ 岳中輝，王博文，王洪峰，閻秀峰.松嫩平原西部鹽堿草地土壤多酚氧化酶活性及其與主要肥力因子的關(guān)系.草業(yè)學報，2009，18(4):251-255.

［17］ 何毓蓉.中國紫色土(下篇).北京:科學出版社，2003:13-31.

［18］ 皮廣潔，唐書源.農(nóng)業(yè)環(huán)境監(jiān)測原理與應(yīng)用.成都:成都科技大學出版社，1998:148-154.

［19］ 馬輝，張東海，李小俠，張少軍，陳勇達.硫丹在棉花及土壤中的殘留動態(tài)研究.石河子大學學報:自然科學版，2008，26(5):579-582.

［27］ 王聰穎，和文祥，劉海輪，來航線，鄧小成.一氯苯對土壤脲酶活性特征的影響.西北農(nóng)林科技大學學報:自然科學版，2009，37(7):171-175.

［36］ 李鈉，章驥，閔航，邵愛萍，周紅軍.菲和其他芳香族化合物降解菌多酚氧化酶的變化研究.浙江大學學報:農(nóng)業(yè)與生命科學版，2006，32(5):495-499.