壯藥紅魚眼三萜類成分鎮(zhèn)痛和抗炎活性實(shí)驗(yàn)研究＊

黃彬彬 ，馬健雄

(1.廣西壯族自治區(qū)桂林市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西 桂林 541001;2.廣西醫(yī)科大學(xué)，廣西 南寧 530021;3.廣西金海堂藥業(yè)有限責(zé)任公司新藥研發(fā)中心，廣西 南寧 530313)

紅魚眼又名龍眼睛、爛頭缽，為大戟科植物無毛龍眼睛 Phyllanthus reticulatus Poir.var.glaberMueU.Arg.的莖、葉，為廣西特色藥材，收載于廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)[1]，具有祛風(fēng)活血、散瘀消腫等功效，壯族醫(yī)藥中常用于治療急慢性肝炎及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[2]。筆者的前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，紅魚眼含有三萜等成分[3－5]。目前尚未見有關(guān)該藥材活性成分抗炎作用的報(bào)道。為此，現(xiàn)對紅魚眼三萜類成分的鎮(zhèn)痛和抗炎作用進(jìn)行研究，為該藥材的深度開發(fā)提供參考。

1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);TV－1810型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);電熱恒溫水浴鍋(北京醫(yī)療設(shè)備廠有限責(zé)任公司);EL204型電子分析天平(梅特勒－托利多儀器上海有限公司)。二甲苯(北京長海化工廠，批號為20080530);醋酸(天津市泰興化工有限公司，批號為20091203);延胡索乙素(中國藥品生物制品檢定所，批號為110726－200409);地塞米松(長春長紅制藥廠，批號為20100419);伊文思藍(lán)(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為20090913);其他試劑均為分析純。紅魚眼采自廣西南寧市郊，并經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院劉步鳴教授鑒定。昆明種小鼠，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，SPF級，動物合格證號為SCXK桂2009－0002。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥物制備

取紅魚眼藥材粗粉，用適量90%乙醇浸泡過夜，加90%乙醇至10倍量，在70℃回流溫度下提取2次，第1次1.5h，第2次1h，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，所得稠膏用乙酸乙酯－水(1∶1)萃取3次，合并萃取液放置過夜，取有機(jī)層濃縮除去溶劑，用蒸餾水適當(dāng)加熱溶解，配制成相當(dāng)于每1mL含藥材2 g的藥液，備用。所制得樣品經(jīng)系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)[6]，顯現(xiàn)出三萜的性質(zhì)，已對該植物進(jìn)行深入化學(xué)成分研究，通過現(xiàn)代光譜學(xué)和波譜學(xué)知識鑒定了其中的三萜化合物[3－4]。

2.2 鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[7]

取昆明種小鼠50只，雌雄各半，稱重標(biāo)記，隨機(jī)分為生理鹽水(NS)組、延胡索乙素組和紅魚眼高、中、低劑量組，每組10只，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥30min后，向各鼠腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2mL(用前配制)。觀察并記錄注射醋酸溶液后20 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)及時間，以評價藥物的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果見表1。可見，延胡索乙素組和紅魚眼高、中、低劑量組與生理鹽水組抑制率比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，紅魚眼高劑量組鎮(zhèn)痛效果與延胡索乙素組相當(dāng)。

表1 紅魚眼三萜類成分鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果(±s)

表1 紅魚眼三萜類成分鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果(±s)

組別生理鹽水延胡索乙素組紅魚眼高劑量組紅魚眼中劑量組紅魚眼低劑量組動物數(shù)10 10 10 10 10給藥量20mL/kg 50mg/kg 50 g/kg 30 g/kg 10 g/kg扭體次數(shù)26.3 ± 5.9 5.6 ± 3.7 6.3 ± 2.1 7.8 ± 2.3 9.2 ± 2.0抑制率(%)78.70 76.05 70.34 65.02 P＜ 0.01＜ 0.01＜ 0.05＜ 0.05

2.3 抗炎試驗(yàn)[7－8]

二甲苯致小鼠耳腫脹試驗(yàn):取昆明種小鼠50只，雌雄各半，每組10只，隨機(jī)分為5組，即空白對照組(A組)，地塞米松組(B組)，紅魚眼高、中、低劑量組(C1，C2，C3組)。每只小鼠灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7 d。于末次給藥時，分別將每只小鼠左耳外側(cè)均勻涂抹二甲苯0.05mL，右耳不涂二甲苯，4 h后脫頸處死，用直徑8mm的打孔器在同一部位取下耳片，稱取質(zhì)量，用左右耳片質(zhì)量差值來表示腫脹程度。結(jié)果見表2。可見，與A組相比，C1組對小鼠耳廓腫脹程度有顯著抑制作用(P＜0.05)，且與B組相當(dāng)(P＞0.05)，C3組也有一定的抑制作用。這表明在較高劑量時，紅魚眼三萜類成分與地塞米松抗炎作用相當(dāng)。

表2 紅魚眼三萜類成分抗炎試驗(yàn)結(jié)果(± s，n=10)

表2 紅魚眼三萜類成分抗炎試驗(yàn)結(jié)果(± s，n=10)

二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn) 醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響試驗(yàn)組別 藥物 給藥量A組B組C1組C2組C3組生理鹽水地塞米松紅魚眼三萜紅魚眼三萜紅魚眼三萜20mL/kg 20mg/kg 50 g/kg 30 g/kg 10 g/kg腫脹度(mg/g)18.32 ± 2.7 9.73 ± 5.62 10.25 ± 1.18 12.26 ± 1.13 15.14 ± 2.22抑制率(%)46.89 44.05 33.08 17.36 P＜ 0.05＜ 0.05 A值0.402 ± 0.028 0.298 ± 0.012 0.304 ± 0.036 0.329 ± 0.046 0.350 ± 0.052抑制率(%)25.87 24.38 18.16 12.94 P＜ 0.05＜ 0.05

醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響試驗(yàn):取昆明種小鼠50只，動物分組方法同二甲苯致小鼠耳腫脹試驗(yàn)項(xiàng)。每只小鼠灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7 d，于末次給藥后1 h，按10mL/kg尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液，同時腹腔注射0.6%醋酸溶液10mL/kg，20min后處死，用5mL生理鹽水沖洗腹腔，沖洗液以2 000 r/min離心15min，取適量上清液，在590 nm波長處測定吸光度?？寡鬃饔靡砸廖乃妓{(lán)染料滲出量來表示，染料滲出量越多，其吸光度(A)值越大，表明其血管通透性增加，抗炎作用越低。結(jié)果見表2。與A組相比，C1組伊文思藍(lán)滲出量顯著下降(P＜0.05)，且與B組相當(dāng)(P＞0.05)，說明紅魚眼三萜類成分能顯著抑制醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加。這提示，紅魚眼三萜類成分能通過抑制毛細(xì)血管通透性增加而達(dá)到抗炎作用。

3 討論

紅魚眼臨床應(yīng)用能明顯緩解類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的紅、腫、熱等癥狀。本研究結(jié)果表明，紅魚眼三萜類成分具有一定的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，說明其傳統(tǒng)功效與現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果一致。因此推斷，紅魚眼三萜類成分可能是該藥材鎮(zhèn)痛、抗炎作用的活性成分。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是臨床常見病，將紅魚眼開發(fā)成為有效的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物或功能性食品，具有很大的市場潛力。下一步，將開展其抗炎活性單體成分的篩選工作。

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