金澤冠心軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究＊

王賢英，謝香菊，李勝容

(重慶市中藥研究院，重慶 400065)

金澤冠心膠囊是在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)(原衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè))收載品種“金澤冠心膠囊(WS3－B－2171－96)”的基礎(chǔ)上研制的新劑型，由澤瀉和雪膽提取物組成，具有調(diào)血脂、增加心肌營養(yǎng)性血流量、降低心肌耗氧量的功效，用于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、心絞痛和高血脂癥。原膠囊劑標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)澤瀉進(jìn)行了薄層鑒別，無含量測定，不能有效控制新型金澤冠心軟膠囊的質(zhì)量。筆者建立高效液相色譜(HPLC)法對(duì)處方中的雪膽提取物進(jìn)行定性鑒別，建立澤瀉提取物主成分23－乙酰澤瀉醇B含量測定的HPLC法為金澤冠心軟膠囊的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

SK250LH型超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);AG265－S型電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司);LC－2010A型高效液相色譜儀;Shimadzu CLASS－VP V6.12 SP4工作站(日本島津公司)。雪膽甲素對(duì)照品，23－乙酰澤瀉醇B對(duì)照品均由中國藥品生物制品檢定所提供;金澤冠心軟膠囊樣品及缺澤瀉陰性樣品由重慶市中藥研究院制藥廠提供;乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 澤瀉的薄層色譜鑒別

取本品1粒，置50 mL具塞三角瓶中，加甲醇10 mL，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)15 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取澤瀉對(duì)照藥材2g，加甲醇20mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。依法制備缺澤瀉的陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯 － 甲酸(6 ∶3.5 ∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖1。

圖1 澤瀉的薄層色譜圖

2.2 雪膽的HPLC鑒別

取本品裝量差異項(xiàng)下的樣品，取約1.0 g，精密稱定，置 25 mL容量瓶中，加入甲醇約20 mL，超聲處理(功率 250 W，頻率 50 kHz)30 min，放冷，加甲醇定容至25 mL，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，于中性氧化鋁柱上(中性氧化鋁200～300目，10 g，干法裝柱)，用甲醇50 mL分次洗脫，收集甲醇洗脫液于水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5 mL，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取雪膽甲素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取缺雪膽陰性對(duì)空白約0.9 g，照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。在以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑、乙腈－水(40∶60)為流動(dòng)相、流速1.0 mL/min、柱溫為25℃、檢測波長為210 nm的色譜條件下，進(jìn)樣量10 μL，測定色譜峰。供試品溶液HPLC色譜圖中，在與對(duì)照品溶液HPLC色譜圖相應(yīng)保留時(shí)間處出現(xiàn)相同的色譜峰，陰性無干擾，見圖2。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 － 水(70 ∶30，V/V);流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;檢測波長:208 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

圖2 雪膽鑒別的HPLC圖譜

2.3.2 溶液制備

精密稱取23－乙酰澤瀉醇B對(duì)照品適量，加乙腈制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品裝量差異項(xiàng)下的樣品，取約0.5 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，加石油醚(60～90℃)10 mL，超聲提取10 min，濾過，棄去石油醚提取液，濾渣、濾紙揮去溶劑，一并移入同一具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加乙腈補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按處方量1%的量，稱取缺澤瀉的處方量藥材按成品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取2.3.2項(xiàng)下3種溶液，在擬訂的色譜條件下進(jìn)樣10 μL。結(jié)果見圖3?？芍幮詫?duì)照品溶液在23－乙酰澤瀉醇B出峰時(shí)間區(qū)域無干擾峰出現(xiàn)，故對(duì)測定無干擾作用。理論板數(shù)按23－乙酰澤瀉醇B峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 000，分離度大于 1.5。

線性關(guān)系考察:精密稱取23－乙酰澤瀉醇B對(duì)照品溶液(0.182 8 g/L)4，8，10，12，16 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1 502 334X+475 685，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，23－ 乙酰澤瀉醇 B 進(jìn)樣量在 0.731 2～2.924 8 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。

圖3 金澤冠心軟膠囊HPLC圖

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次(進(jìn)樣量10 μL)，按上述色譜條件測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.35%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品1份，精密稱定，照擬訂的供試品溶液制備方法制備溶液，分別于 0，2，4，6，12 h 時(shí)測定。結(jié)果峰面積的RSD為0.39%(n=5)，表明供試品溶液放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品，按擬訂的含量測定方法，分別制備5份供試品溶液并測定。結(jié)果含量的RSD為2.0%，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品內(nèi)容物各6份，精密稱定，分別精密加入23－乙酰澤瀉醇B對(duì)照品(配成溶液加入，質(zhì)量濃度為 1.828 μg/mL)0.8，0.8，0.6，0.6，0.4，0.4 mL，按擬訂的含量測定方法分別測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 23－乙酰澤瀉醇B加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.4 樣品含量測定

取6批樣品，按供試品溶液制備及測定方法測定峰面積，計(jì)算樣品中23－乙酰澤瀉醇B的含量。結(jié)果見表2。

表2 金澤冠心軟膠囊中23－乙酰澤瀉醇B的含量測定結(jié)果(n=6)

3 討論

曾研究了雪膽的薄層色譜鑒別，但由于本品中雪膽處方量低，且其他樣品對(duì)其薄層鑒別干擾極大，不易判斷，故采用HPLC對(duì)雪膽進(jìn)行鑒別。雪膽的HPLC鑒別時(shí)選擇了用乙腈－水(40∶60)作為流動(dòng)相，選用210 nm為檢測波長[1]，在此條件下，雪膽甲素與相鄰色譜峰達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱，陰性對(duì)照無干擾。

曾試驗(yàn)了乙腈 － 水不同比例(75 ∶25[2]，90 ∶10[3]，80 ∶20[4]，70∶30)，結(jié)果選用乙腈 －水(70∶30)能使樣品中23－乙酰澤瀉醇B峰與相鄰峰達(dá)到良好分離，峰形對(duì)稱，陰性對(duì)照無干擾。用甲醇制備23－乙酰澤瀉醇B對(duì)照品溶液，進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在208 nm波長處有最大吸收，故選用208 nm為檢測波長。

方法學(xué)考察結(jié)果表明，23－乙酰澤瀉醇B的含量測定方法成立，能控制產(chǎn)品質(zhì)量。

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