高效液相色譜法測定銀花感冒沖劑中綠原酸含量

李建芳，黃勁通

(1.廣西壯族自治區(qū)北海食品藥品檢驗所，廣西 北海 536000; 2.廣西恒拓集團仁盛制藥有限公司，廣西防城港 535500)

銀花感冒沖劑由金銀花、連翹、防風等6味藥組成的中藥制劑，收載于《國家衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第二冊)》，具有清熱、解毒、利咽等功效，用于治療感冒發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥，臨床應用廣泛。原質(zhì)量標準無含量測定項。方中金銀花的有效成分為綠原酸。為控制制劑質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，本試驗中采用高效液相色譜法測定銀花感冒沖劑中綠原酸的含量[1]，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－10Atvp型高效液相色譜儀(日本島津);SPD－10Avp型紫外檢測儀(日本島津);威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站;BP211D型電子天平(瑞士梅特勒)。綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110753－200413，供含量測定用);銀花感冒沖劑樣品(自制產(chǎn)品，批號分別為110921，111010，111015);乙晴為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(13∶37);檢測波長:327 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進樣量:10 μL。在此條件下，色譜圖見圖1，理論板數(shù)按綠原酸計算應不低于1 500，綠原酸的保留時間約為12.5 min，陰性對照品溶液在綠原酸峰相應位置處無吸收峰，對測定無干擾。

2.2 溶液制備

取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液(10℃以下保存)，作為對照品溶液;取本品適量，研細，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率200 W，頻率 50 kHz)30 min，取出，放冷，再稱重，用50%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取不含金銀花的其余各味藥，按銀花感冒沖劑處方和制備工藝，制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:分別精密吸取2.2項下3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，依法測定。結(jié)果供試品溶液與對照品溶液均在相同保留時間內(nèi)出現(xiàn)吸收峰，而陰性對照品溶液無干擾峰，方法具有專屬性(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密吸取綠原酸對照品溶液1，3，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，依法測定，以峰面積積分值為縱坐標、進樣量(μg)為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為Y=2.998 710 7X+1.691 010 4，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，綠原酸進樣量在0.050 4～1.008 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，依法重復進樣 6次，測定并記錄綠原酸峰面積。結(jié)果的RSD為 0.4%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，分別在0，4，8，12，24 h時依法進樣測定。結(jié)果峰面積的RSD為1.67%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批樣品6份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果綠原酸平均含量為 2.524 8，RSD=1.6%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品6份，每份約1.0 g，分別精密加入對照品溶液(1.001 4 g/L)1，2，2.5 mL，按供試品溶液制備方法制備，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，每批樣品平行測定3次，按外標法計算綠原酸含量。結(jié)果批號為110921，111010，111015的樣品中綠原酸含量分別為 2.529 3，2.554 7，2.504 1 mg/g。

表1 綠原酸加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

3 討論

2010年版《中國藥典(一部)》金銀花項下綠原酸含量測定所用流動相為乙腈－0.4%磷酸溶液(10∶90)，本試驗通過調(diào)整乙腈與0.4%磷酸溶液的比例并作了一系列比較，結(jié)果表明，本試驗所用的流動相比例，能較好地將綠原酸與相鄰峰達到基線分離，分離效果好，陰性無干擾。曾比較了供試品溶液制備的超聲處理時間(20，30，40 min)對綠原酸含量的影響，結(jié)果表明30 min時己能提取完全。方法學考察結(jié)果表明，本方法簡便、結(jié)果準確、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:205.