高效液相色譜－紫外分光光度法測(cè)定奧美沙坦酯片劑的含量及有關(guān)物質(zhì)

封宇飛 ，王志宏，倪明月，孫春華

(1.衛(wèi)生部北京醫(yī)院藥學(xué)部，北京 100730； 2.北京大學(xué)藥學(xué)院，北京 100083)

奧美沙坦酯是非肽類血管緊張素Ⅱ－1型（AT1）受體拮抗劑，最早由日本Sankyo公司研制開(kāi)發(fā)，并于2002年5月獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市。本品主要用于治療高血壓。與其他的血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑類藥物相比，本品的劑量小、起效快，服用方便，降壓作用更強(qiáng)而持久，不良反應(yīng)的發(fā)生率低，具有明顯的優(yōu)點(diǎn)。有關(guān)奧美沙坦酯及其代謝產(chǎn)物奧美沙坦在血漿中濃度的測(cè)定已有報(bào)道[1－7]。筆者采用高效液相色譜－紫外分光光度（HPLC－UV）法測(cè)定奧美沙坦片劑的含量及其有關(guān)物質(zhì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀；奧美沙坦酯對(duì)照品（含量99.2%）由北京邁勁醫(yī)藥科技有限公司提供，奧美沙坦片（商品名為傲坦，批號(hào)分別為 100010，100020，100030，規(guī)格為 20 mg），由上海三共制藥有限公司提供；乙腈為色譜純，三乙胺和磷酸為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：美國(guó)奧泰 Apollo C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1% 甲酸水溶液 － 乙腈（67.5 ∶32.5）；流速 1.0 m L ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：10μL。在上述條件下，奧美沙坦酯與其有關(guān)物質(zhì)實(shí)現(xiàn)基線分離，理論板數(shù)以?shī)W美沙坦酯計(jì)算不低于8 000。

2.2 溶液制備

精密稱取片劑適量（約相當(dāng)于奧美沙坦酯10mg），置100 mL量瓶中，加乙腈適量振搖使溶解，乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液4 m L，置100 m L量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取對(duì)照品約10 mg，置100 m L量瓶中，加乙腈適量振搖使溶解，乙腈稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取此儲(chǔ)備液4 m L，置100 m L量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：取奧美沙坦酯對(duì)照品適量，分別在下述條件下進(jìn)行試驗(yàn)。堿破壞：加0.1 mol／L氫氧化鈉溶液適量使溶解，水浴加熱2 h，放冷，加酸中和，加流動(dòng)相至規(guī)定體積，作為堿降解產(chǎn)物溶液；酸破壞：加0.1mol／L鹽酸溶液適量使溶解，水浴加熱2 h，放冷，加堿中和，加流動(dòng)相至規(guī)定體積，作為酸降解產(chǎn)物溶液；高溫破壞：直火加熱熔融后，放冷，用乙腈溶解，加流動(dòng)相稀釋，作為高溫降解產(chǎn)物溶液；光破壞：紫外燈下照射48 h，用乙腈溶解，加流動(dòng)相稀釋，作為光降解產(chǎn)物溶液。色譜圖見(jiàn)圖1。圖中各雜質(zhì)峰與主峰均有很好的分離?？瞻兹芤荷V圖見(jiàn)圖1A。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取 2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液 0.5，1，2，4，6，8，10m L，置 100 m L 量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，制成不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品系列溶液，進(jìn)樣10μL。結(jié)果顯示在0.5～10μg／mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)質(zhì)量與峰面積呈良好線性關(guān)系。以峰面積（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行回歸分析，得線性方程 Y＝0.204 3X＋1.042 7，r＝0.999 6（n＝5），定量限為 0.5μg／m L。

精密度試驗(yàn)：取本品（批號(hào)為060060），照2.2項(xiàng)下的方法于同一日內(nèi)測(cè)定5次和連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算日內(nèi)和日間精密度，結(jié)果日內(nèi)平均含量為 99.6%，RSD為 0.3%；日間平均含量為99.1%，RSD為0.5%。穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液分別放置0，2，4，6，8，10 h 后進(jìn)樣品測(cè)定，結(jié)果在 10 h 內(nèi)，供試品溶液的峰面積的 RSD為0.3%，表明供試品在流動(dòng)相中穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取供試品（批號(hào)為110020）9份，各約相當(dāng)于奧美沙坦10 mg，置100 m L量瓶中，分別加乙腈適量振搖使溶解，并用乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1mL，置100 mL量瓶中，分別精密加入 2.3項(xiàng)下的貯備液 0.5，2，8 mL各3份，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定。結(jié)果每個(gè)質(zhì)量濃度的回收率依次為 101.1% ，99.5% ，98.3% ，RSD 分別為 1.2% ，0.7% ，0.3% （n ＝3）。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測(cè)定

按2.2項(xiàng)下制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，3批樣品的含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 樣品有關(guān)物質(zhì)檢查

精密量取供試品溶液3 mL，置100 m L的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為自身對(duì)照溶液（3.0%）。精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各40μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍，按不加校正因子的主成分自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3批樣品的含量測(cè)定及有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果(%)

3 討論

取奧美沙坦酯對(duì)照品適量，用流動(dòng)相配制成適當(dāng)質(zhì)量濃度的溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果顯示，奧美沙坦酯在254 nm波長(zhǎng)附近有最大吸收，因此，選擇254 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

分別用甲醇、稀醋酸溶液、0.1mol／L 鹽酸溶液、0.1mol／L 氫氧化鈉溶液、乙腈、流動(dòng)相6種不同的介質(zhì)制備對(duì)照品溶液和供試品溶液并進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果顯示，甲醇、稀醋酸溶液、0.1mol／L鹽酸溶液和流動(dòng)相對(duì)奧美沙坦的溶解性能較差，0.1 mol／L氫氧化鈉溶液和乙腈溶解性能基本一致，但0.1mol／L氫氧化鈉溶液易使樣品降解?？紤]與流動(dòng)相的一致性，決定先用乙腈溶解被測(cè)樣品，再用流動(dòng)相進(jìn)一步稀釋。

對(duì)樣品經(jīng)酸破壞，堿破壞，高溫破壞，光照破壞后的分解產(chǎn)物的色譜分離試驗(yàn)結(jié)果表明，本法專屬性強(qiáng)，適用于含量測(cè)定，也可用于有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

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